2008年至2010年泌尿系统感染中病原菌的分布及耐药性分析

目的了解泌尿系统感染的病原菌分布及药物耐药性。方法采用法国生物梅里埃公司的VITEK60分析仪对2008年至2010年宁波市妇女儿童医院疑为泌尿系统感染患者的尿液标本进行细菌培养、菌株鉴定,纸片扩散确证试验检测ESBLs。结果 2008年至2010年尿标本中共分离出病原菌1 561株,以大肠埃希菌最多见,占27.2%,其次肺炎克雷伯菌、奇异变形菌、粪肠球菌(D群),各占6.34%、6.28%和6.21%,再次是表皮葡萄球、白色念珠菌和屎肠球菌(D群),各占4.48%、4.36%和3.91%。表皮葡萄球、粪肠球菌(D群)、屎肠球菌(D群)对万古霉素均敏感,对利奈唑烷仅1株粪肠球菌(D群)耐药。3年中,无1例大肠埃希菌对亚胺培南耐药,1株肺炎克雷伯菌和1株奇异变形菌对亚胺培南耐药,其他药物均有不同程度耐药。结论大肠埃希菌是导致泌尿系统感染最常见的致病菌,产ESBLs的菌株已达46.6%。治疗由产ESBLs细菌引起的尿路感染首选亚胺培南和哌拉西林/他唑巴坦;引起尿路感染的革兰阳性菌主要为肠球菌,青霉素可作为治疗粪肠球菌引起的尿路感染,但不适合治疗屎肠球菌引起的尿路感染,耐药率已达95%以上,呋喃妥因、利奈坐烷、万古霉素可作为首选。     

229株阴沟肠杆菌的标本分布及耐药性分析

目的 了解阴沟肠杆菌在医院感染的标本分布和耐药情况,为临床合理选择和应用抗生素提供依据.方法 采用VITEK 60全自动微生物分析仪和配套的GNI、GNS-143、GNI-448,对229株阴沟肠杆菌进行分离鉴定和药敏试验,药敏结果使用WHONET 5.5软件进行分析.结果 从2007年1月至2011年9月共分离到阴沟肠杆菌229株,59.0％来自于呼吸道标本,其次是尿液占13.5％,再次为创面分泌物/脓液占12.7％.阴沟肠杆菌对美洛培南、亚胺培南和头孢哌酮/舒巴坦的耐药率分别为0.0％、0.4％和2.5％,对氨苄西林、头孢唑啉、头孢西丁的耐药率分别为98.7％、96.9％、97.5％.结论 阴沟肠杆菌耐药机制复杂,对抗生素具有多重耐药性,临床应合理使用抗菌药物,以减少阴沟肠杆菌耐药性的产生和在院内扩散.     

耐热嗜酸古细菌Sulfolobus acidocaldarius 谷氨酰胺合成酶的表达调控和性质研究

古细菌Sulfolobus acidocaldarius细胞内谷氨酰胺合成酶的表达量随着培养条件的改变有较大差异,RNA印迹表明,该差异是在mRNA水平受到调控.经DEAE-Sepharose和Sephacryl S-300两步分离酶蛋白,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和凝胶过滤测定分子质量,表明该酶为12个相同亚基组成,分子质量为630 ku的多聚体.该酶的最佳pH为7.3;对羟胺、谷氨酰胺、ADP和Mn²⁺的K_m值分别为3.5 mmol/L、1.3 mmol/L、0.15 mmol/L和0.24 mmol/L;其γ-谷氨酰转移酶活性和生物合成酶活性的最佳温度均为90℃.Arrhenius曲线表明,γ-谷氨酰转移酶的活化能为47 kJ/(mol·K),生物合成酶的活化能分别为29 kJ/(mol·K)（40～75℃）和10 kJ/(mol·K)（55～90℃）.对该酶的抑制剂研究发现,与其他来源的谷氨酰胺合成酶不同,甘氨酸、L-丙氨酸能明显抑制 S.acidocaldarius谷氨酰胺合成酶的活性,而常规的抑制剂如L-色氨酸、L-组氨酸、5′-AMP却没有抑制作用,甘氨酸、L-丙氨酸的抑制作用为竞争性抑制,推断该酶的活性调节与绝大多数革兰氏阳性菌一样不受腺甘酰化的影响.     

12 402例女性生殖道感染病原体分布以及耐药状况分析

目的了解宁波地区近年来女性生殖道感染病原体分布以及耐药状况,为临床用药提供实验依据。方法对2003年1月至2006年11月就诊于性病科、妇科、生殖中心、不孕不育科的拟诊生殖道感染患者,取宫颈分泌物进行病原体检测及药敏试验。结果12 402例中共检出生殖道感染患者4827例,感染率为38.92%,检出病原体6164株,1216人感染了2种或2种以上病原体,混合感染率为9.80%。结论感染病原体中,解脲脲原体占44.7%,且部分菌株耐药严重,临床医生治疗前应尽可能做药敏试验,做到合理用药,以提高妇女的生殖健康水平。     

142例儿童感染肺炎链球菌的耐药性分析

目的分析儿科病房的肺炎链球菌的主要分布情况以及耐药现状。方法收集宁波市妇女儿童医院儿科病房2010年1月1日至2012年12月31日临床分离的142株肺炎链球菌,采用法国生物梅里埃公司的VITEK-60型全自动微生物分析仪进行菌株鉴定。采用纸片扩散法（K—B法）做药敏试验,用参考菌株做质量控制。药敏试验结果按NCCL2002版判断标准,对照参考菌株判断敏感,中介和耐药。结果分离的142株肺炎链球菌的送检科室以呼吸科最多62株,其次是小儿监护病房21株,新生儿科送检标本中未培养出肺炎链球菌。分离的142株肺炎链球菌的标本以痰液标本最多103株。分离的142株肺炎链球菌对克林霉素,红霉素的耐药率分别为98．5％和95．07％且呈现逐年上升;对氨苄西林、氨苄西林舒巴坦钠、头孢呋辛、头孢曲松和万古霉素的敏感率分别为84．51％、89．44％、93．66％、97．89％和100％。结论本地区住院儿童的肺炎链球菌来源仍以呼吸道为主,对广谱半合成青霉素仍较敏感,对β-内酰胺酶抑制剂的广谱半合成青霉素敏感率更高,对头孢类敏感率更高,未发现对万古霉素耐药菌株。在门急诊可选用广谱半合成青霉素作为治疗肺炎链球菌的首选用药,在病房可选用敏感性更高的头孢呋新或头孢曲松治疗肺炎链球菌．但为了延缓耐药性的产生,应动态监测肺炎链球菌的耐药情况,合理选择抗生素,提高疗效。     

转基因油菜与野芥菜混作对土壤线虫群落的影响

随着转基因作物在全球的广泛种植,转基因作物对非靶标生物的影响受到人们的广泛关注。转Bt基因抗虫作物与非转基因作物种间混作是避免昆虫产生抗性的一种生态防御策略,但混作对非靶标生物尤其是土壤线虫影响研究较少。设置不同比例的转基因油菜(Brassica napus)与野芥菜(B.juncea)混作5种处理,包括处理A、B、C、D、E分别为转基因油菜和野芥菜比例0∶100;25∶75;50∶50;75∶25;100∶0,调查不同生育期土壤线虫种类与数量变化。结果表明,在油菜与野芥菜生育期内,不同处理线虫优势类群均为拟丽突属Acrobeloides和真滑刃属Aphelenchus,各处理线虫属数由多到少顺序为处理B(30属)处理C(28属)处理A(26属)处理D和处理E(25属)。线虫生活史策略(c-p值)组成一致,各处理间线虫生活史组成不存在明显差异。不同处理的线虫总数以及各营养类群均无显著差异,线虫群落生态指数亦无显著差异,但不同采样时期间线虫ShannonWiener多样性指数、Simpson优势度指数、均匀度指数、成熟度指数和线虫通路指数差异显著。结果表明转基因油菜与野芥菜单作和混作短期内不影响土壤线虫群落结构。     

2009年度宁波市妇儿医院主要病原菌的临床分布及耐药性分析

目的了解宁波市妇儿医院主要病原菌的临床分布及耐药性分析。方法血液培养采用法国生物梅里埃公司的BacT/Alert3D,菌株鉴定采用法国生物梅里埃公司的VITEK 60分析仪,药敏试验采用K-B法,纸片扩散确证试验检测ESBLs。结果前10位细菌构成比依次是大肠埃希菌(13.4%)、白色念珠菌(8.7%)、阴道加德纳菌(7.8%)、表皮葡萄球菌(6.9%)、金黄色葡萄球菌(5.6%)、肺炎克雷伯菌(4.9%)、鲍曼复合醋酸钙不动杆菌(3.9%)、粪肠球菌(D群)(3.1%)、铜绿假单胞菌(2.7%)和溶血葡萄球菌(2.0%)。大肠埃希菌539株中产ESBLs阳性率为52.5%,肺炎克雷伯菌195株中产ESBLs阳性率为45.2%。大肠埃希菌主要分离于尿液,其次是脓液/切口。肺炎克雷伯菌在痰及咽拭子中所占比例最高。46株铜绿假单胞菌和11株鲍曼复合醋酸钙不动杆菌对亚胺培南耐药。结论对产ESBLs的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)、耐亚胺培南的鲍曼复合醋酸钙不动杆菌和铜绿假单胞菌,应加强隔离预防,控制在医院内的扩散,减少耐药菌株产生。     

114株肺炎链球菌的临床分布及药敏分析

目的波市妇女儿童医院肺炎链球菌的临床分布和耐药情况,为临床合理用药提供依据。方法对该院2009年6月1日至2011年3月31日期间分离的114株肺炎链球菌进行分析,菌株鉴定采用法国生物梅里埃公司的VITEK60分析仪,药敏试验采用K-B法,用参考菌株做质量控制。结果该院分离的肺炎链球菌主要来自儿童（84.21%）,标本来源主要是痰液（61.4%）,其次是血液（9.65%）,其他（28.95%）。肺炎链球菌的耐药率：林可霉素92.19%,红霉素90.12%,青霉素G85.53%,左旋氧氟沙星20.24%,氨苄西林16.67%,头孢唑啉8.7%,头孢曲松5.8%,头孢噻肟4.11%,万古霉素0%,氨苄西林/舒巴坦0%,哌拉西林/他唑巴坦0%。结论宁波市妇女儿童医院肺炎链球菌对某些药物的耐药率很高,有必要对其进行耐药率监测,指导临床合理选择抗菌药物。     

132株奇异变形杆菌的临床分布及药敏分析

目的了解宁波市妇女儿童医院奇异变形杆菌的临床分布和耐药情况,为临床合理用药提供依据。方法对该院2009年6月1日至2011年5月31日期间分离的132株奇异变形杆菌进行分析,菌株鉴定采用法国生物梅里埃公司的VITEK 60分析仪,药敏试验采用K-B法,用参考菌株作质量控制。结果该院分离的奇异变形杆菌主要来自尿液（51.50%）,其次是创口分泌物（21.21%）,再次是阴道分泌物（19.70%）,其他（7.59%）。对奇异变形杆菌敏感率较高的抗生素是：丁胺卡那霉素、氨曲南、美罗培南、亚胺培南、头孢唑林、头孢呋辛酯、头孢曲松、头孢他啶、头孢噻肟、马斯平、头孢西丁、罗红霉素、氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦和头孢哌酮/舒巴坦。结论加强奇异变形杆菌的分离鉴定及耐药性的测定,是临床合理应用抗生素的重要依据。     

基因工程酶法结合酵母能量耦联高效合成L-谷氨酰胺的研究

通过PCR方法从Bacillus subtilis基因组DNA中扩增出谷氨酰胺合成酶基因(glnA),克隆至表达载体pET28b, 经测序鉴定后转化大肠杆菌BL21(DE3), 用IPTG及乳糖诱导表达。 SDSPAGE分析表明,所表达的谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase ,简称GS)为可溶性蛋白,约占总菌蛋白的80％。利用表达的GS蛋白 N端的6×HisTag 对GS进行亲和层析,将获得的纯蛋白进行酶活性测定。结果表明,纯化的GS合成反应的最适温度为60℃,最适pH为6.5,Mn²⁺能明显提高GS的活性和稳定性。工程菌BL21(DE3)/pET28b-glnA粗提物中GS的比活是宿主菌本身的84倍。以谷氨酸、NH₄Cl和ATP为底物的转化实验表明谷氨酸的转化率达95％以上。 经筛选获得一株高效能量耦联酵母菌株,命名为YC001;通过能量耦联表明,该系统对谷氨酸的转化率高达80％,平均谷氨酰胺产量为22g/L。