骨髓瘤细胞中阿霉素诱导的ATP变化与自噬的关系

目的：检测用阿霉素（doxorubicin DOXO）处理的骨髓瘤细胞株NCI-H929中ATP与自噬表达水平的变化,探讨两者之间的关联。方法：分别以DOXO 2umol/l 24h、DOXO 2umol/l联用自噬抑制剂3MA 10mmol/l 24h处理H-929细胞后,采用MTT法检测细胞存活率;ATP生物发光法检测ATP表达量;Western Blot检测靶细胞自噬标志分子LC3蛋白的表达。结果：各组相对未处理组存活率分别为54%、35%;相对未处理组%ATP分别为400%、150%;DOXO 24h LC3表达显著上调。结论：经DOXO处理H-929细胞系自噬形成,进而ATP上升以保护细胞。     

不同坛紫菜丝状体生化性状的比较研究

为建立坛紫菜(Neoporphyra haitanensis)丝状体新品种选育的生化评价体系, 对比了5个品种/品系丝状体的光合色素和生长指标, 并利用液相色谱-质谱联用技术检测其红藻糖苷、类菌胞素氨基酸(MAAs)和植物激素的含量差异。结果显示, 藻胆蛋白和叶绿素a与净光合放氧速率和相对生长速率呈正相关, 与坛紫菜的高产特性有关。浙东2号(ZD2)、申福2号(SF2)和闽丰1号(MF1)丝状体的藻红蛋白含量较高, 其相对生长速率也较快。红藻糖苷与坛紫菜的耐高温能力有关, 在MF1和MF2中含量较高; 而MAAs与抗紫外辐射有关, 在MF2中含量远高于其他4个品种/品系, 体现了闽丰坛紫菜的耐高温和抗紫外线的南方品种特性。坛紫菜丝状体中发现了异戊烯腺嘌呤、异戊烯腺苷、反式玉米素核苷和芸苔素内酯4种植物激素, 但激素与生产性状的关联性不明确。综上所述, 研究为坛紫菜丝状体的新品种优选和人工培育构建了一套可行的评价指标体系。     

香菇多糖注射液联合CHOP化疗治疗弥漫性大B细胞淋巴瘤的疗效及对Bcl-6、Ki-67、VEGF、β2-MG表达的影响

目的:探讨香菇多糖注射液联合CHOP化疗治疗弥漫性大B细胞淋巴瘤的疗效及对B细胞淋巴瘤因子-6(Bcl-6)、Ki-67抗原(Ki-67)、内皮细胞生长因子(VEGF)、β2微球蛋白(β2-MG)表达的影响。方法:选取2010年1月~2011年12月我院收治的64例弥漫性大B细胞淋巴瘤患者作为研究对象,按治疗方式进行分组,采用香菇多糖注射液联合CHOP化疗治疗的患者为观察组,单纯采用CHOP化疗治疗的患者为对照组。比较两组患者短期疗效、治疗前后Bcl-6、Ki-67、VEGF、β2-MG的表达情况、不良反应的发生情况及生存情况。结果:治疗后,观察组治疗总有效率显著高于对照组[84.38%(27/32)vs.53.13(17/32)](P0.05);肿瘤组织Bcl-6阳性表达率高于对照组[84.38%(27/32)vs.62.50%(20/32)](P0.05),Ki-67、VEGF、β2-MG阳性表达率均低于对照组[31.25%(10/32)vs.59.38%(19/32),28.13%(9/32)vs.56.25%(18/32),18.75%(6/32)vs.40.63%(13/32)](P0.05);不良反应总发生率低于对照组[21.88%(7/32)vs.46.88%(15/32)](P0.05);第5年随访时存活率高于对照组[59.38%(19/32)vs.34.38%(11/32)](P0.05)。结论:香菇多糖注射液联合CHOP化疗方案治疗弥漫性大B细胞淋巴瘤可有效提高近期疗效、生存率及生存质量,且安全性高,可能与其改善机体肿瘤组织中Bcl-6、Ki-67、VEGF、β2-MG的表达有关。     

Beclin-1蛋白在霍奇金淋巴瘤中的表达及其临床意义

目的:探讨beclin-1蛋白在霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma,HL)组织霍奇金里斯细胞(Hodgkin Reed-Sternberg,HRS)的表达及其与HL患者临床特征之间的关系.方法:收集2001年1月至2012年1月青岛大学医学院附属医院初发的HL患者61例和同期反应增生性淋巴结炎患者35例的组织标本为研究对象,通过免疫组化检测beclin-1蛋白在HL组织HRS细胞、反应性细胞及反应增生性淋巴结组织中的表达情况.结果:①HL与反应增生性淋巴结组织中beclin-1蛋白的阳性表达率分别为64％(39/61)和86 ％(30/35),HL组的beclin-1蛋白表达明显低于反应增生性淋巴结炎组,两者之间差异有统计学意义(P＜0.05);而在同一HL组织中,HRS细胞beclin-1蛋白的表达明显低于反应性细胞,差异有统计学意义(P＜0.05).②不同组织分型的HRS细胞beclin-1蛋白的表达有差异,淋巴细胞消减型(lymphocyte depletion,LD)HRS细胞beclin-1蛋白的表达明显低于混合细胞型(mixed cellularity,MC)及结节硬化型(nodular sclerosis,NS),差异有统计学意义(P＜0.05),富于淋巴细胞型(lymphocyte rich,LR)与混合细胞型、富于淋巴细胞型与结节硬化型、富于淋巴细胞型与淋巴细胞消减型、混合细胞型与结节硬化型之间HRS细胞beclin-1蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).③HL组织中HRS细胞beclin-1蛋白表达水平与患者Ann Arbor分期、B症状及血清LDH值有关(P＜0.05),而与年龄、性别、巨大肿块及血沉无关(P＞0.05).结论:Beclin-1蛋白在HL中HRS细胞的表达明显降低,且与HL的恶性程度及侵袭性明显相关;beclin-1表达降低可能参与了HL发生发展.     

B细胞性非霍奇金淋巴瘤中CHFR mRNA的表达与其临床病理特征关系的研究

目的:探讨CHFR(checkpoint with FHA and ring finger)基因在B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)中的表达水平及其与临床病理特征之间的关系.方法:采用荧光定量PCR方法检测81例B细胞非霍奇金淋巴瘤组织和38例淋巴结反应性增生组织(RH)CHFR mRNA的表达水平.结果:①81例B-NHL组织中低水平表达CHFR mRNA,其中2例表达缺失;而在淋巴结反应性增生组中该基因全部表达,差异有统计学意义(P＜0.05).②B-NHL患者中Ⅰ+Ⅱ期组和Ⅲ+Ⅳ期组CHFR mRNA表达存在差异,Ⅲ+Ⅳ期表达水平低于Ⅰ+Ⅱ期,差异有统计学意义(P＜0.05);B-NHL组按IPI评分分0-1分组和2-5分组,高评分组CHFR mRNA表达量低于低评分组,差异具有统计学意义(P＜0.05);而CHFR mRNA表达量与年龄、性别、有无症状、LDH水平及ECOG评分无相关性.结论:CHFR表达水平的降低在非霍奇金淋巴瘤的发生过程中具有一定作用,并与其恶性程度及进展相关.     

造血负调控因子对骨髓基质细胞的调控作用

目的:探讨血小板第4因子(platelet factor 4,PF4)对急性辐射损伤人骨髓基质细胞(human bone marrow stromal cells,hBMSCs)的保护作用及机理,揭示PF4对造血系统辐射保护机制.方法:原代培养的hBMSCs随机分为4组:①PF4+照射组(P+I),②PF4保护组(P),③单纯照射组(I),④正常对照组(N).照射前给予1μ g·mL-1PF4或等量PBS预孵育12h,5.0 Gy60Co-γ射线均匀照射,20 h后收集各组细胞.MTT法测定细胞活性,观察细胞生长状态,流式细胞术检测细胞周期.RT-PCR测定P21、PCNAmRNA表达.结果:①PF4对人正常骨髓基质细胞生长无明显抑制或促进作用;②与I组相比,PF4明显提高5.0Gy60Co-γ射线照射后骨髓基质细胞的存活率,存活细胞达60%以上(I组<40%);③与N组和I组相比,P组和P+I组S期比例显著增高有统计学意义(P<0.001),但P组与P+I组相比无统计学差异;④RT-PCR结果显示,I组(+0.84±0.03)P21 mRNA表达较之N组(0.00±0.00)显著上调(P<0.01);而与I组相比,P组(+0.17±0.09)P21 mRNA表达显著下调(P<0.05 ).结论:PF4具有减轻电离辐射对人骨髓基质细胞的损伤作用,其调控机理可能与S期阻滞和下调P21基因表达有关.     

儿童重症监护病房呼吸机相关性肺炎病原菌分布及耐药性分析

目的探讨儿童重症监护病房(PICU)机械通气患儿呼吸机相关性肺炎(VAP)的病原菌群,并对细菌耐药性进行分析,为抗生素的使用提供依据。方法对2012年6月至2015年5月我院PICU中发生的34例VAP患儿的下呼吸道分泌物细菌培养结果进行回顾性分析。结果共计检出病原菌40株,其中革兰阴性菌34株(85.0%),革兰阳性菌4株(10.0%),真菌2株(5.0%)。前四位致病菌依次为:鲍曼不动杆菌(25.0%)、肺炎克雷伯菌(20.0%)、铜绿假单胞菌(15.0%)、大肠埃希菌(12.5%),均对儿科常用抗生素耐药性严重。鲍曼不动杆菌对头孢哌酮/舒巴坦耐药率较低,肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌对亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦的耐药率较低,铜绿假单胞菌则对喹诺酮类耐药率较低。结论应加强机械通气儿童患者呼吸道管理及病原学监测,合理应用抗生素。     

应用Surrogate 报告载体提高RISPR/Cas9 对TMEM215基因的打靶效率*

目的:构建Surrogate报告载体,并利用Surrogate报告载体提高CRISPR/Cas9对HEK293T细胞TMEM215基因打靶效率。方法:构建针对人TMEM215的CRISPR/Cas9表达载体及相应Surrogate报告载体,两者共转HEK293T细胞,通过流式分析、T7EI检测、TA克隆测序等明确Surrogate报告载体对不同sgRNA打靶效率的检测及对基因修饰细胞的筛选富集作用。结果:流式分析结果表明,Surrogate报告载体成功检测出不同sgRNA的打靶效率,并筛选出高效率sgRNA;T7EI检测及TA克隆测序显示,外加嘌呤霉素抗性筛选时,Surrogate报告载体可有效富集基因修饰细胞。结论:成功构建Surrogate报告载体,并利用Surrogate报告载体提高CRISPR/Cas9对HEK293T细胞TMEM215基因的打靶效率。     

曲美他嗪对心肌梗死后心力衰竭大鼠炎症反应、氧化应激及心肌细胞自噬的影响

目的:研究曲美他嗪对心肌梗死后心力衰竭大鼠炎症反应、氧化应激及心肌细胞自噬的影响。方法:将51只SD大鼠纳入研究,遵循随机数字表法分成假手术组、模型组及干预组,每组17只。模型组与干预组大鼠均以结扎冠状动脉前降支近段法完成心肌梗死后心力衰竭大鼠模型的制备,假手术组仅开腹暴露,分离双侧肾动脉间腹主动脉,但不实施缩窄处理,其余步骤和模型组以及干预组一致。造模成功后,模型组与假手术组大鼠分别予以生理盐水灌胃处理,干预组大鼠则予以曲美他嗪灌胃处理。比较各组大鼠心功能,炎症反应,氧化应激以及心肌细胞自噬情况。结果:模型组、干预组左心射血分数(LVEF)均低于假手术组,但干预组高于模型组;模型组、干预组的左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)均高于假手术组,但干预组低于模型组(均P0.05)。模型组、干预组的C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)水平均高于假手术组,但干预组低于模型组(均P0.05)。模型组、干预组的丙二醛(MDA)水平均高于假手术组,但干预组低于模型组;模型组、干预组的超氧化物歧化酶(SOD)水平均低于假手术组,但干预组高于模型组(均P0.05)。模型组、干预组的LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白相对表达量均高于假手术组,且干预组高于模型组(均P0.05)。结论:曲美他嗪可有效改善心肌梗死后心力衰竭大鼠心功能,同时减轻炎症反应与氧化应激反应,有效促进心肌细胞自噬因子表达。