产生无标记农杆菌突变体方法的建立及优化

农杆菌已经用作许多生物过程研究的模型细菌,为了解析这些生物过程的分子机理,对农杆菌的某些基因进行突变就显得非常重要．以自杀性基因sacB作为反向可选择性标记基因,利用同源重组的原理,建立了一种可对农杆菌基因进行准确插入、删除和位点置换的突变方法,所获突变体不带任何不需要的外源DNA序列．通过详细研究同源序列的长度对农杆菌同源重组效率和突变体产生概率的影响,以及对农杆菌中的同源重组机理的分析,提出了优化该突变体产生方法的方案,即通过设计不等长的上下游同源序列和选择其中一种类型的单交换重组体来筛选二次交换重组体的方法,可以显著地提高理想突变体的产生概率．研究结果对如何提高突变体的产生概率和减少突变体筛选的工作量具重要的参考价值．利用该方法成功地获得了两个基因被同时删除而且不含抗性标记的农杆菌突变株．     

反例微视频教学法在“微生物学实验”课程中的实践研究

"微生物学实验"是生物类相关专业的一门必修课程,该课程的开展对提高学生实验技能和理解微生物学知识原理至关重要。因此,不断探索和改进实验课程教学方法、减少学生的错误实验操作、提高实验课堂教学效率是任课教师的基本任务。反例微视频教学法是将传统的案例教学法、反例教学法和当下流行的微课程相结合的一种教学方法。本文阐述了该教学法的原理、基本操作流程、课堂应用效果和存在的问题。该教学法的实施能较好地提高实验课堂效率,大幅减少学生错误实验操作的次数,值得在本科生物类实验课堂中进行推广。     

壳聚糖固定化AS1．398中性蛋白酶稳定性的研究

对以壳聚糖为载体,由戊二醛作交联剂。制备的固定化ＡＳ１．３９８中性蛋白酶的稳定性进行了研究。实验结果表明,固定化ＡＳ１．３９８中性蛋白酶对热、乙醇、尿素以及ｐＨ值的稳定性均有明显的提高。     

三种胰岛素在反相色谱上的保留行为与热力学性质

以C8 柱为固定相 ,5 4%～ 5 9%甲醇为流动相 ,在一个广泛的温度 10～ 6 5℃范围内 ,研究了人、牛、猪 3种生物的胰岛素在高效反相色谱上的保留行为和热力学性质。研究结果表明 3种胰岛素在结构上的细微差别 ,能在反相色谱行为上明显地显示出来。同时还测定了 3种胰岛素与C8 柱结合时的焓ΔHo 和熵ΔSo 变化情况 ,这些热力学参数 ,对多肽和疏水界面相互作用机制的研究具有重要的参考价值。实验结果证明 ,通过色谱热力学参数的测定 ,将为蛋白质折叠机制以及生物大分子相互作用机制的研究 ,提供一种极其有效的方法     

根癌农杆菌化学受体MCP1912调节趋化响应功能的鉴定

【目的】本研究以根癌农杆菌C58为材料,鉴定其甲基趋化受体蛋白（methyl-accepting chemotaxis protein,MCP） MCP₁₉₁₂能够识别的配体,并研究该蛋白在调控根癌农杆菌趋化响应中的具体功能。【方法】通过异源表达MCP₁₉₁₂的配体结合结构域（ligand binding domain,LBD）,获得带有His标签的LBD蛋白(LBD₁₉₁₂)。利用基于荧光的热位移测定法（fluorescence-based thermal shift assay,TSA）筛选出LBD₁₉₁₂的潜在配体;通过等温滴定量热（isothermal titration calorimetry,ITC）,进一步确定筛选出的潜在配体,并测定LBD₁₉₁₂与配体结合之后的解离平衡常数K_D。利用基于同源重组的精准DNA片段删除方法,敲除根癌农杆菌C58中编码MCP₁₉₁₂的基因atu1912,获得MCP_{1 912}     

考马斯亮蓝显色液组分对蛋白质测定的影响

考马斯亮蓝（CBB）显色法测定蛋白质含量的主要缺点之一是线性关系差．通过研究显色液组分对线性关系的影响,发现显色液H⁺浓度是影响线性关系的主要因素,并提出了一个新的显色液配方来改善考马斯亮蓝蛋白质测定法的线性关系．     

固定化植物细胞

植物除了为人类提供生命必需的碳水化合物,脂类以及蛋白质外,还为我们提供许多有益的次生代谢物如生物碱、萜类、甾体、酚类以及醌类物质.据统计在三万种已知的天然产物中大约有80%是来自植物界,但是长期以来这些物质的供应仅能依靠整株植物的栽培或野生植物的采集来实现.由于植物的生长和栽培受到气候、地理、季节以及政府禁令等的影响,使得这些物质的供应既不充分又不稳定,因此在植物细胞培养成功不久,人们就     

用酸度计测定植物碳酸酐酶活性

碳酸酐酶(CA)主要是催化CO_2+H_20HCO_3~-+H~+的可逆反应。该酶普遍存在于动、植物界。菠菜CA约占叶片可溶性蛋白的1～2％。近年来随着CA在藻类无机碳浓缩中的作用的发现,CA功能的研究引起了更多植物生理学工作者的重视。测定CA的方法主要有测压法,pH电极法,停流比色法和质谱法等。其中应用最为普遍的是pH电极法,其原理是用pH电极测定反应体系的pH变化。该法所用仪器简单,操作方便,有较高的精确度。