环腺苷酸在灰盖鬼伞子实体发育中的效用研究

通过测试ｃＡＭＰ,子实体浸提液对灰盖鬼伞（Ｃｏｐｒｉｎｕｓ　ｃｉｎｅｒｅｕｓ）双核体菌丝的子实体诱导测试研究及通过用腺苷分别抑制ｃＡＭＰ在子实体发育各阶段的合成,对ｃＡＭＰ在灰盖克伞子实体发育中的影响进行了研究。结果表明：ｃＡＭＰ及子实体浸提液对灰盖鬼伞双核体菌丝的子实体形成并无诱导信号作用,阻止ｃＡＭＰ的合成延缓了子实体原基的发生,菌盖的形成,担孢子梗的形成,也延缓了质配和担孢子的发生,但菌柄的延长,子实体的成熟,担孢子的着色与释放则不受ｃＡＭＰ合成受阻的影响。     

猪圆环病毒2型通过外泌体miR-125a-5p靶向Bcl-2诱导淋巴细胞凋亡

为研究miR-125a-5p在猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)诱导淋巴细胞凋亡中的作用及其作用机制,以PCV2感染PK-15细胞外泌体孵育的淋巴细胞为研究对象,采用流式细胞术、蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)和实时荧光定量PCR,检测淋巴细胞凋亡率及凋亡相关miRNA表达;合成miR-125a-5p模拟物和抑制物转染PK-15细胞,检测miR-125a-5p过表达或抑制表达后细胞凋亡率;采用生物信息学方法预测miR-125a-5p的靶基因,双荧光素酶报告基因检测miR-125a-5p对靶基因的调控;Western blotting检测外泌体孵育淋巴细胞的线粒体凋亡信号通路相关蛋白Bcl-2、Bax、细胞色素C和caspase-3的表达。结果显示,感染PCV2的PK-15细胞分泌的外泌体极显著提高淋巴细胞凋亡率,在一定浓度范围内呈剂量依赖性;与PCV2诱导细胞凋亡相关的miRNA中,miR-125a-5p表达量极显著升高,miR-125a-5p模拟物转染细胞后极显著提高细胞凋亡率;利用TargetScan预测发现,miR-125a-5p与Bcl-2 3''UTR区有结合位点,miR-125a-5p模拟物极显著抑制pmir-Bcl-2 3''UTR-WT荧光素酶活性,对pmir-Bcl-2 3''UTR-MuT的荧光素酶活性无明显改变;外泌体孵育的淋巴细胞Bcl-2表达量显著降低,Bax、细胞色素C的释放和caspase-3表达量显著升高,Bcl-2/Bax的比值极显著降低。这表明,PCV2通过外泌体诱导淋巴细胞上调miR-125a-5p的表达,进而抑制Bcl-2 mRNA和蛋白表达,激活淋巴细胞线粒体凋亡通路诱导细胞凋亡。     

低钾胁迫对水稻(Oryza sativa L.)化感潜力变化的影响

研究以国际公认的化感水稻P1312777和非化感水稻Lemont为供体，稗草（Echinochloa cru-galli L.）为受体，采用稻／稗共培体系，研究低钾胁迫对水稻化感潜力变化的影响及其机制。受体稗草的形态指标分析结果表明，低钾胁迫促使化感水稻P1312777对共培稗草的根长、株高和干重的抑制率均升高，增幅远大于非化感水稻Lemont。受体稗草生理生化指标分析结果表明，低钾胁迫下化感与非化感水稻对受体稗草保护酶系（SOD、POD、CAT）及根系活力的抑制作用增强，但化感水稻P1312777比非化感水稻Lemont的抑制程度大，且达极显著差异。实时荧光定量PCR分析结果表明，低钾胁迫下，化感水稻P1312777根部与叶部中酚类代谢的关键酶——苯丙氨酸解氨酶、肉桂酸-4-羟化酶、羟化酶、O-甲基转移酶的基因均上调表达，而非化感水稻根部相应酶均下调表达，叶部除苯丙氨酸解氨酶上调，其余酶也下调表达。而萜类代谢途径关键酶——HMG—CoA还原酶、角鲨烯合酶、单萜烯环化酶、倍半萜烯环化酶、二萜烯环化酶的基因，在两种水稻根部中呈现出相同或相似的表达方式（上调或下调），即HMG—CoA还原酶上调表达，角鲨烯合酶、单萜烯环化酶、倍半萜烯环化酶、二萜烯环化酶下调表达；而在水稻叶部，非化感水稻Lmont相应酶基因表达方式仍然不变，化感水稻P1312777除了角鲨烯合酶下调表达，其余4个酶均上调表达。水稻根系分泌物中酚类物质的HPLC分析结果表明，低钾胁迫下，化感水稻P1312777根系分泌物中，所检出的酚酸类物质总量是正常营养条件下的2．30倍，而非化感水稻Lemont则是正常营养条件下的0．91倍。综合分析认为低钾胁迫下，化感水稻P1312777抑草能力增强主要是由于酚类代谢途径关键酶基因表达上调，导致酚类代谢途径旺盛，分泌出更多的酚类物质，进而破坏受体稗草保护酶系统，抑制了稗草的正常生长。     

不同化感潜力水稻(Oryza sativa L.)苗期的氮素养分效率及相关基因的表达

为了阐明养分水平引起水稻(Oryza sativa L.)化感抑草潜力变化的生理生态机制,研究了不同N素营养处理下,不同化感潜力水稻苗期对N素营养逆境的响应特性及N素养分效率的差异,并运用实时荧光定量RT-PCR技术(FQ-PCR)检测与N素代谢和次生代谢关键酶的基因表达.结果表明:弱化感水稻品种Lemont对N素营养胁迫较敏感,强化感水稻品种PI312777对资源波动的适应性较强,N素养分效率较高.FQ-PCR分析结果显示,在低N条件下Lemont中的亚硝酸还原酶基因(nir),谷氨酰胺合成酶基因(gs)相对表达量均有不同幅度的下调, PI312777分别下调了1.2倍和1.4倍,而Lemont分别下调了3.0倍和1.8倍, Lemont下调的幅度分别是PI312777的2.5倍和1.3倍,但对于苯丙氨酸解氨酶基因(pal)与3-羟基-3甲基戊二酰辅酶A还原酶基因(hmgr)而言, PI312777叶组织中的pal和hmgr均上调表达,与对照相比上调了6.0倍和1.6倍,而Lemont中对应的基因均下调表达,分别下调了1.3倍和6.8倍,佐证了上述差异的分子生态学特性.     

PCR和随机引物标记探针的方法比较

采用PCR标记法和随机引物标记法对小白鼠、欧洲田鼠(M icrotus arvalis和Pitymys duodecim costatus)的Sry基因保守区进行地高辛标记,结果显示PCR标记的探针灵敏度要高于随机引物法,同时对两种标记方法进行了比较,为进一步进行Southern杂交研究打下了基础。     

外源水杨酸调控水稻化感抑草作用及其分子生理特性

为了探讨外源水杨酸（SA）调控水稻化感抑草效应的可行性，研究了不同浓度的外源SA对强化感水稻PI312777抑草效应的影响及其生理生化特性，并运用实时定量RT-PCR(FQ-PCR)技术检测SA介导的关键酶苯丙氨酸解氨酶基因（ZB8）的相对表达量.结果表明：外源SA能够诱导水稻化感抑草效应增强，而且这种诱导效应与SA的浓度和处理时间相关.叶面喷施SA后，PI312777对稗草的抑制率显著提高，其根系活力、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化物酶（POD）活性增强，过氧化氢酶（CAT）活性降低；而伴生杂草稗草的相应生理指标的变化趋势则相反.PI312777植株中的苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性增强，总酚含量升高.0.2 mmol·L^-1的SA诱导水稻化感抑草效应最显著，该浓度下目的基因ZB8的相对表达丰度随处理时间先上调后下调，在24 h达到表达高峰.