山羊PTHrP基因干扰重组腺病毒的制备与鉴定

甲状旁腺激素相关蛋白 (Parathyroid hormone related protein,PTHrP) 具有广泛生物学功能,对调控钙代谢具有重要作用。采用RNA干扰和重组腺病毒技术,对山羊乳腺上皮细胞中PTHrP基因表达进行沉默,为进一步研究该基因在乳腺上皮细胞中的功能奠定基础。采用BLOCK-iT shRNA腺病毒干扰系统,将设计好的寡聚shRNA-322/357经退火复性后插入穿梭质粒pENTR/CMV-GFP/U6中。经Western blotting检测干扰效率后,选择pENTR/CMV-GFP/U6-322与病毒骨架质粒pAd/PL-DEST进行同源重组,成功获得重组干扰腺病毒载体pAD/PL-DEST/CMV-GFP/U6-322,并转染HEK-293细胞,通过包装、扩增后产生干扰重组腺病毒AD-PTHrP-322,TCID50法测定其滴度为2.0×109 PFU/mL。用AD-PTHrP-322感染山羊原代乳腺上皮细胞(MOI=200),经实时定量PCR及Western blotting检测表明在病毒感染24 h、48 h和72 h后,山羊乳腺上皮细胞中PTHrP mRNA表达量分别下调了29.2％、68.1％和82.6％ (P＜0.05),其蛋白表达水平也明显下调,干扰效果明显。     

护理干预在直肠癌前切除术后并发吻合口瘘的应用及效果

目的：探讨护理干预在直肠癌前切除术后并发吻合口瘘的应用及效果。方法：将179例患者分为对照组和观察组,分别给予 常规护理和综合护理,观察护理干预在直肠癌前切除术后并发吻合口瘘的应用效果。结果：对照组术后3 d内5例患者发生吻合 口瘘,3例患者术后4-7 d发生吻合口瘘;观察组术后3 d内1例患者发生吻合口瘘,1例患者术后4-7 d发生吻合口瘘,两组吻合 口发生率差异有统计学意义（x2=3.880,P＜0.05）。经过护理和治疗后,观察组患者吻合口瘘愈合时间明显短于对照组（t=4.026,P＜ 0.05）。对照组SAS 阳性率69.23%,观察组50.00%,二者之间具有统计学差异（x2=5.186,P＜0.05）;对照组SDS阳性率61.54%,观 察组40.00%,二者之间具有统计学差异（x2=4.978,P＜0.05）。结论：合理有效的综合护理措施可以减少吻合口瘘和医患矛盾的发 生,提高患者对治疗的满意度,促进医患关系的和谐。