细菌双杂交系统的优化及其应用

细菌双杂交系统是一种用于检测体内蛋白质互作的方法，该方法互补腺苷酸环化酶功能，通过检测细胞表达的β-半乳糖苷酶LacZ的活性，分析蛋白质互作能力。但在应用过程中，发现存在操作繁琐、灵敏度低、难实现高通量操作等缺陷。本研究目的是对原有细菌双杂交进行优化，建立一种操作方便、可批量操作、具有较高灵敏度和能够实现实时监测的细菌双杂交系统，本研究成功构建由lacZ启动子控制的luxCDABE的报告质粒pBBR-lacZ-luxCDABE，引入原有的检测系统，新的判读标准并不影响原有的判读标准，本文通过快速灵敏地冷光观察菌落或测定菌液冷光值即可判读结果，优化后的双杂交系统，阳性对照组冷光值为阴性对照组的几十（霍乱弧菌为宿主）至几百倍（大肠杆菌为宿主），阴阳性结果判读差异明显，不仅节约实验成本，提高工作效率，又实现了连续监测。该系统不仅以大肠杆菌为宿主获得成功应用，宿主范围也扩展到霍乱弧菌。该系统通过质粒将lacZ启动子的拷贝数提高，减弱了非腺苷三磷酸（cAMP）因素引起的lacZ启动子活性的干扰，无需繁琐耗时的实验操作，为大批量的蛋白质互作分析及互作蛋白质的筛选提供了有利工具。     

豚草和三裂叶豚草不同植株部位种子萌发与入侵扩散关系

豚草(Ambrosia artemisiifoliaLinn.)和三裂叶豚草(A. trifidaLinn.)是我国恶性入侵物种,分布常呈高密度单一种群,且结实量庞大。探讨二者不同植株部位种子萌发(休眠)与扩散特点,对了解二者入侵机制具有重要意义。以新疆伊犁新源县发生的豚草和三裂叶豚草为材料,在种子成熟期,根据植株高度、枝条长度,按比例从上到下分为9个部位,对不同植株部位种子的形态特征、数量和萌发特性进行比较,分析这两种植物不同植株部位种子萌发与扩散的共性和差异性,研究二者种群密度调节和入侵的关系。结果表明:1)两个物种内不同植株部位间种子的长、宽、百粒重无显著差异,但三裂叶豚草种子的长度和宽度分别是豚草的2—3倍,百粒重高7倍。结合两个物种在伊犁地区分布差异,认为种子大小是两个物种分布区域性差异的原因之一。2)豚草和三裂叶豚草植株外部的上顶、中顶、上中部位种子数占植株总种子数量的50%,中中、下顶占比约23%,而下部的上基、中基、下中、下基的种子数占比约27%,表明当年生产的种子有近73%的比例具有远距离扩散的潜力。3)豚草和三裂叶豚草不同植株部位种子的萌发率具有上端中端下端的趋势;初始萌发时间为下端中端上端;萌发持续时间为上端中端下端。这种萌发方式避免了同一生长季大批种子同时萌发有可能导致高密度死亡的风险。基于上述研究分析,认为豚草和三裂叶豚草不同植株部位种子具有不同的适应功能。其中,上部所产生的种子具较强的扩散能力和低休眠性,有利于两物种快速占据新生境并扩大种群;而中、下部位的种子在母株周围就近扩散,翌年萌发率低,缓解了种群竞争。豚草和三裂叶豚草不同植株部位生产的种子特性和萌发差异是两个物种进行种群密度调节和扩散入侵的重要原因。     

橙皮苷与迷迭香酸组合对育肥猪盲肠肠道形态、抗氧化功能、菌群结构及屏障功能的影响

【目的】本研究旨在探究橙皮苷与迷迭香酸组合对育肥猪生长性能与盲肠的肠道形态、抗氧化功能、菌群结构及屏障功能的影响。【方法】选取24头90日龄的杜×长×大三元杂交公猪，随机分为4组，每组6个重复，每个重复1头猪，进行为期90 d的试验。对照组(control, Con)饲喂基础日粮，橙皮苷组(hesperidin, Hes)在基础日粮中添加600 mg/kg橙皮苷，迷迭香酸组(rosmarinic acid, RA)在基础日粮中添加40 mg/kg迷迭香酸，橙迷组(Hes×RA)在基础日粮中添加300 mg/kg橙皮苷与20 mg/kg迷迭香酸。【结果】与Con组相比，橙皮苷与迷迭香酸组合显著提高了育肥猪前期、后期、全期的平均日采食量，显著提高了前期、全期的平均日增重，显著降低了全期的料重比(P<0.05)；橙皮苷与迷迭香酸组合显著提高了育肥猪盲肠的黏膜厚度，同时显著提高了盲肠的总抗氧化能力(total antioxidant capacity, T-AOC)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性并增强了核因子E2相关因子(nuclear factor erythroid 2-related factor 2, NRF2)、血红素加氧酶-1 (heme oxygenase-1, HO-1)的相对mRNA表达量(P<0.05)；橙皮苷与迷迭香酸组合显著降低了变形杆菌(Proteobacteria)、Terrisporobacter、Clostridium sensu stricto 1和Romboutsia的相对丰度，显著提高了拟杆菌(Bacteroidota)、乳杆菌属(Lactobacillus)、Muribaculaceae_norank、Phascolarctobacterium和Rikenellaceae RC9的相对丰度，并显著提高了盲肠食糜中异丁酸与丁酸的浓度，同时显著提高了闭锁小带蛋白-1 (zonula occludens 1, ZO-1)、闭合蛋白-1 (Claudin-1)、黏蛋白-2 (mucin-2, MUC-2)的相对mRNA表达量，显著降低了白细胞介-1β (interleukin-1β, IL-1β)的含量，并显著提高了分泌性免疫球蛋白A (secretory immunoglobulin A, SIgA)的含量(P<0.05)。【结论】橙皮苷与迷迭香酸组合提高了育肥猪的生长性能，改善了盲肠的肠道形态，调节了盲肠食糜菌群组成并增强了盲肠的抗氧化能力与屏障功能。