布鲁氏菌粗糙型RA343株与光滑型A19株免疫小鼠后特异性T细胞和抗体动态变化分析

【背景】布鲁氏菌病（简称布病）严重威胁着人类健康和畜牧业的发展,使用毒力弱、免疫原性好、不干扰血清学诊断的疫苗是防控布病的有效措施。【目的】比较布鲁氏菌粗糙型RA343株与光滑型A19株免疫小鼠后机体特异性T细胞和抗体的动态变化,评价粗糙型RA343株的免疫效果。【方法】采用6周龄雌性BALB/c小鼠,共分为3组,RA343株免疫组和A19株免疫组各15只小鼠,空白对照组5只小鼠。免疫组的每只小鼠经腹股沟皮下注射0.1 mL （含菌量为1×10⁸ CFU）菌液。免疫后1、2和3周各免疫组及空白对照组分别剖杀5只小鼠,无菌取脾脏,一部分脾脏研磨分离淋巴细胞,用流式细胞术检测小鼠布鲁氏菌特异性CD4⁺T细胞与CD8⁺T细胞所占比例的变化趋势;另一部分脾脏称重后分离布鲁氏菌RA343株和A19株,评估RA343株和A19株在小鼠脾脏中的定殖情况。在剖杀小鼠的同时取外周血分离血清,用ELISA方法检测免疫后小鼠血清中IgM和IgG抗体的消长规律。采用GraphPad Prism 8.0软件作图并进行统计学分析。【结果】与A19免...     

牛种布鲁氏菌2308不同途径小鼠感染模型的建立与评估

[背景] 布鲁氏菌可经口、皮肤、黏膜和呼吸道感染人和动物。小鼠是布鲁氏菌研究中最常用的模型动物。[目的] 建立牛种布鲁氏菌2308不同途径和剂量感染BALB/c小鼠的模型,为布鲁氏菌小鼠感染试验提供参考。[方法] 用10¹-10⁵ CFU这5个不同感染剂量,分别经注射、口服和点眼方式感染BALB/c小鼠。在感染后不同时间点采集小鼠血清,检测IgG、IgM、IgA抗体含量、脾脏重量及脾脏含菌量,评价布鲁氏菌经不同途径感染BALB/c小鼠的效果。[结果] 10 CFU是注射感染BALB/c小鼠的最小感染剂量;10⁵ CFU是口服感染BALB/c小鼠的最小感染剂量。10¹-10⁵ CFU这5个不同感染剂量经点眼途径均未能成功感染BALB/c小鼠。在10⁵ CFU感染剂量下,口服与注射感染组小鼠每克脾脏平均含菌量分别为10^5.673 CFU/g和10^5.009 CFU/g,无显著差异（P>0.05）,但口服感染组小鼠脾脏平均重量为0.310 g,显著高于注射感染组0.165 g （P<0.01）。在试验期内,注射感染组和口服感染组小鼠体内IgG抗体的滴度均随感染时间延长而持续升高;整体上,口服感染组IgG抗体峰值显著高于注射感染组;2组IgM抗体变化趋势一致;口服感染组有2只小鼠在感染28 d后产生IgA抗体,注射感染组均未检测到IgA抗体。[结论] 建立了牛种布鲁氏菌2308通过不同途径感染BALB/c小鼠的模型。     

常用消毒剂对布鲁氏菌疫苗株的灭菌效果评估

【背景】布鲁氏菌是一种重要的人畜共患胞内寄生菌,是引起动物和人发生布鲁氏菌病(布病)的病原体。高效消毒剂杀灭环境中的布鲁氏菌是防控布病的关键措施。【目的】评价市面上常用消毒剂对布鲁氏菌的灭菌效果及差异。【方法】选用市面上9种不同类型的常用消毒剂,以高、中、低3种不同使用浓度分别研究其对牛种、羊种和猪种布鲁氏菌的杀灭效果。同时根据消毒剂的有效浓度通过最小抑菌浓度实验确定各消毒剂的最小抑菌浓度。【结果】除苯酚外,其余8种消毒剂,包括聚维酮碘、癸甲溴铵、苯扎溴铵、戊二醛、复合季铵盐、乙醇和2种商品化消毒剂等在推荐使用浓度下5 min内均能完全杀灭布鲁氏菌,碘酸制剂在0.1%低使用浓度下细菌存活率为0.000039%-0.000095%。苯酚按0.5%的推荐剂量,作用5 min后细菌存活率为0.000144%-0.000183%,20 min后,细菌存活率为0.000138%-0.000193%;按1%的使用剂量作用5 min后,猪种布鲁氏菌存活率为0.000125%,作用20min后的存活率下降至0.000038%。最小抑菌浓度研究结果表明,季铵盐类消毒剂其最小抑菌浓度大致在0.01563%-0.03125%之间,其余消毒剂的最小抑菌浓度结果与消毒剂最低推荐使用浓度基本一致。研究同时发现,不同种属布鲁氏菌对同一消毒剂的敏感性也存在一定差异。【结论】研究结果为生产实践中科学选择布鲁氏菌消毒剂提供了借鉴。     

检测OMP28抗体不能有效诊断羊布鲁氏菌病

【目的】探索布鲁氏菌外膜蛋白OMP28作为羊布鲁氏菌病特异性检测方法的可行性。【方法】体外表达和纯化OMP28蛋白,建立并优化以OMP28重组蛋白为包被抗原的布鲁氏菌病ELISA诊断方法。以3个不同种属的4株布鲁氏菌(羊种布鲁氏菌16M和M28,猪种布鲁氏菌S1330,牛种布鲁氏菌2308)分别感染山羊和绵羊至42周,期间每隔2周收集血清,分别用布鲁氏菌LPS包被的ELISA和OMP28 ELISA方法对不同阶段的分离血清进行检测,比较2种不同ELISA对4株布鲁氏菌感染的山羊和绵羊的检测敏感性。【结果】4株布鲁氏菌感染的山羊和绵羊均产生高水平针对LPS的抗体,但是仅有B. melitensis 16M和B. melitensis M28感染的绵羊与B. melitensis 16M和B. abortus 2308感染的山羊可产生针对OMP28的抗体。【结论】基于OMP28的间接ELISA具有细菌属特异性和宿主动物品种特异性,通过检测OMP28抗体不能有效诊断羊布鲁氏菌病。     

植物不饱和脂肪酸的生物合成及调控

不饱和脂肪酸是植物细胞中的一类重要代谢物质,是组成细胞膜的主要成分,对调节细胞的生理功能起着重要作用。不饱和脂肪酸也是人类必须的一类营养物质,对健康发挥着重要作用。因此,研究植物不饱和脂肪酸的合成和调控机制具有着重要的理论和现实意义。不饱和脂肪酸的合成主要发生在质体和内质网,由一系列编码基因控制,并受到外在环境胁迫及发育的调控。本研究综述了近年来不饱和脂肪酸合成和调控机制相关的一些研究进展,解析了不饱和脂肪酸合成的一些关键基因,以期为将来利用相关基因进行种质创新,从而实现改良食用油品质或提升植物的抗性育种提供思路和实践。     

绵羊红细胞敏感性对补体结合试验的最佳反应时间

正补体结合试验(CFT)是一种经典的抗原、抗体检测方法,其敏感性、特异性均较高,不仅可用于诊断各种传染病,也可用于鉴定病原体,是免疫学上一个应用较广泛的重要试验[1]。在布鲁氏菌病(布病)的血清学诊断方法中,CFT被世界动物卫生组织(OIE)认可为布病血清学确诊的经典标准方法[2]。在CFT实际操作中经常发现,使用不同保存时间的绵羊红细胞(SRBC)滴定同一批次溶血素和补体时,结果存在较大差异,有时效价可能相差     

牛布鲁氏菌病阳性血清国家标准品的研制

手足口病是由多种肠道病毒感染导致的一种急性儿科传染病。近年来,我国肠道病毒71型 (EV71) 手足口病发病率急剧上升,重症病例时有报道,严重威胁儿童健康。临床上对于重症手足口病的治疗缺乏有效手段,主要以对症治疗和支持疗法为主。静脉注射人免疫球蛋白由健康献血员血浆提取纯化而来,含有包括EV71在内的多种肠道病毒的中和抗体,可作为重症手足口病被动免疫和免疫调节的重要手段,值得关注。     

犬种布鲁氏菌ZG株单克隆抗体4H3抗原模拟表位的筛选及分析

【背景】目前犬布鲁氏菌病诊断存在一定的困难。【目的】筛选并研究犬种布鲁氏菌单克隆抗体4H3株的特异性抗原表位。【方法】利用噬菌体肽库展示技术,以犬种布鲁氏菌单克隆抗体4H3株作为靶分子,包被酶标板,用12肽随机肽库经过3轮生物淘洗程序进行筛选。经过3轮筛选后,噬菌体产出率从5.00×10^-7增加到9.84×10^-6,假阳性率逐轮降低。从第3轮筛选的阳性克隆中随机挑取14个进行增殖,提取基因组DNA,进行测序分析;并通过iELISA和cELISA检测阳性克隆的亲和性和特异性。【结果】14株阳性单克隆噬菌体共出现3种不同的短肽序列,分别是KMSIRHPIRLPI、ILRRRRKRIIQI和QRIHMRLTTQS;iELISA结果表明3种短肽序列与单克隆抗体的亲和性依次为KMSIRHPIRLPI>ILRRRRKRIIQI>QRIHMRLTTQS;cELISA结果显示短肽KMSIRHPIRLPI和ILRRRRKRIIQI特异性较强。对亲和性较强、特异性较高的2条短肽KMSIRHPIRLPI和ILRRRRKRIIQI展开具体分析,比对分析表...     

牛布鲁氏菌病阳性血清国家标准品的研制

为制备标定凝集试验用的牛布鲁氏菌病阳性血清国家标准品,采集4份田间自然感染牛布鲁氏菌病的阳性血清作为候选物,经过筛选后,选择了3#血清用于标准品制备。对该标准品进行了物理性状、无菌检验、真空度测定、剩余水分检验、均匀性检测和稳定性试验,检测结果均符合要求。以国际标准品为参比,测定了该标准品的RBT、SAT和CFT效价,结果分别为1∶160“+”、1∶2 400“++”、1∶800“++”,与协作标定结果完全一致。该标准品以国际标准品溯源的国际单位含量为4 000 IU/mL。     

芍药花药愈伤组织诱导及体细胞胚发生

以芍药(Paeonia lactiflora)品种粉玉奴花药为外植体, 研究不同浓度2,4-D对愈伤组织诱导、体胚发生及植株再生的影响, 采用组织细胞学方法观察愈伤组织以及体细胞胚发育过程, 采用根尖染色体法鉴定再生植株倍性。结果表明, 芍药花药愈伤组织诱导的最适培养基为MS+1 mg·L^-12,4-D+1 mg·L^-1 NAA+0.1 mg·L^-1 KT+30 g·L^-1蔗糖+6.5 g·L^-1琼脂, 愈伤组织诱导率为14.7%。转入体细胞胚诱导培养基上, 历经球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶胚阶段, 体胚诱导率为52.1%; 在成苗培养基中能够长出真叶并得到完整植株, 成苗率为47.1%。经根尖染色体法鉴定出单倍体和二倍体植株。该研究初步建立了通过体细胞胚间接发生途径实现植株再生的培养体系, 可为芍药属其它品种的花药培养提供借鉴, 获得的再生植株是芍药遗传学研究和育种工作的重要材料。