宫颈癌差异表达基因筛选及功能分析

目的:筛选参与宫颈癌发生、发展的关键基因,为临床诊疗提供新的靶点。方法:在NCBI-GEO数据库中筛选多组宫颈癌基因表达检测数据集,利用GEO2R分析工具筛选各组数据集的差异表达基因;应用R分析筛选不同数据集之间共有的差异表达基因;利用DAVID在线分析对差异表达基因进行功能聚类和通路分析;利用STRING分析差异表达基因编码蛋白之间的相互作用关系。结果:共选择6组表达数据集,筛选得到59个差异表达基因(宫颈癌组织vs正常组织),表达差异至少达2倍,其中包含50个表达上调基因及9个表达下调基因。这些差异表达基因参与细胞周期、DNA复制、细胞分裂等生物进程。蛋白互作分析表明,这些差异表达基因多数存在相互作用。结论:利用生物信息学方法对不同来源的基因检测数据进行整合分析,有助于更准确的筛选对宫颈癌发生、发展过程具有重要作用的关键基因,本文筛选的宫颈癌差异基因为进一步研究宫颈癌发生、发展的分子机制及临床诊疗提供思路。     

腺苷脱氨酶抑制巨噬细胞增殖迁移的作用研究

目的:探讨腺苷脱氨酶对鼠源巨噬细胞RAW264.7增殖、迁移、细胞周期、细胞凋亡的影响。方法:用不同浓度(0、0.25、1.25、2.5、5U/m L)的腺苷脱氨酶处理RAW264.7细胞后,用实时细胞分析系统检测细胞增殖能力,用流式细胞术检测腺苷脱氨酶对细胞凋亡和周期的影响,划痕修复实验检测RAW264.7细胞迁移能力。结果:与对照组相比,高浓度腺苷脱氨酶(2.5 U/m L、5 U/m L)处理可以显著抑制RAW264.7细胞的增殖能力,且抑制效果随腺苷脱氨酶浓度升高而增强(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,相较于对照组,高浓度腺苷脱氨酶(2.5 U/m L)处理可以诱导RAW264.7细胞凋亡,并导致细胞周期G2/M期阻滞(P<0.05)。此外,细胞划痕实验表明,高浓度腺苷脱氨酶(2.5 U/m L)处理可以显著抑制RAW264.7巨噬细胞的迁移能力(P<0.05)。结论:高浓度腺苷脱氨酶对巨噬细胞增殖和迁移具有抑制作用,并可诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞。     

AD-MPE与TPE患者血常规参数变化及其诊断价值

目的:比较结核性胸腔积液(tuberculous pleural effusion, TPE)和肺腺癌性胸腔积液(malignant pleural effusion associated with lung adenocarcinoma, AD-MPE)血常规参数及相关炎症指标的比值,探讨单项指标或联合分析的鉴别诊断价值。方法:对临床确诊的100例AD-MPE患者和84例TPE患者的血常规参数进行分析,比较各指标在两组疾病中的差异,并用ROC曲线分析以确定单项指标以及联合分析的鉴别诊断性能。结果:AD-MPE组的白细胞数(WBC)、中性粒细胞绝对值(NEUT)、淋巴细胞数(LYMPH)、淋巴细胞/单核细胞比值(LMR)、平均血小板体积(MPV)、大血小板比率(P-LCR)和血小板分布宽度(PDW)水平高于TPE组(P<0.05),TPE组的单核细胞百分比(MONO%)、血小板/淋巴细胞比值(PLR)、血小板数(PLT)和血小板比积(PCT)水平均高于AD-MPE组(P<0.05);ROC曲线分析显示WBC、MONO%和PLR相比较其它单项指标,具有较好的鉴别诊断价值(AUC>0.7)并且三者联合有最高的鉴别诊断价值(Youden Index>0.5,AUC>0.7)。结论:AD-MPE和TPE在炎症反应和凝血功能方面有不同程度的变化,血常规参数分析对TPE和AD-MPE中具有一定的鉴别诊断价值,尤其是WBC、MONO%和PLR的联合分析。     

腺苷脱氨酶活性对自身免疫性肝病的临床意义研究

摘要 目的：探讨腺苷脱氨酶（ADA）在自身免疫性肝病患者血清中的变化及其临床意义。方法：利用酶法试剂盒检测自身免疫性肝病患者血清中的总ADA（tADA）及其同工酶ADA1和ADA2的活性变化,利用受试者工作曲线（ROC）分析总ADA、ADA1及ADA2活性的诊断价值。利用Spearman相关性分析自身免疫性肝病患者各指标之间的相关性。结果：与对照组相比,tADA和ADA2活性在自身免疫性肝病患者血清中均极显著升高（P<0.001）,ADA1活性有一定程度升高（P=0.035）。不同自身免疫性肝病亚型患者之间的血清tADA、ADA1及ADA2活性均无显著差异。ROC分析显示,血清tADA和ADA2活性具有诊断价值,ADA1活性无诊断价值。tADA活性截断值取13.5 U/L时,诊断特异性为93.3%,敏感性为81.2%。血清ADA2活性截断值取9.5 U/L时,诊断特异性为85.0%,敏感性为83.3%。而ADA1无显著的诊断价值,ADA活性与白蛋白球蛋白比值呈显著负相关（r=-0.41,P=0.004）,与球蛋白水平具有一定程度的正相关（r=0.34,P=0.018）,与ALT呈弱正相关（r=0.29,P=0.042）,与其他指标的相关性均无统计学显著性。结论：血清tADA及ADA2活性在自身免疫性肝病患者血清中显著升高,并且具有一定的诊断价值。     

CD14蛋白表达、纯化及单克隆抗体制备

摘要 目的：制备CD14重组蛋白及抗CD14单克隆抗体。方法：从人外周血淋巴细胞中克隆CD14编码基因,将其连接至质粒pRSETC,构建表达质粒pRSETC/CD14,转染大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),筛选阳性克隆、用IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测CD14蛋白表达水平,应用镍柱进行亲和纯化,SDS-PAGE及Western blot进行纯化产物鉴定。纯化后的CD14蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术筛选分泌单克隆抗体细胞株,制备单克隆抗体,利用Western blot鉴定抗体活性。结果：获得CD14编码基因,并成功进行了原核表达,SDS-PAGE显示CD14以包涵体形式表达,纯化产物的纯度超过95%。利用杂交瘤技术筛选出稳定分泌抗CD14抗体的细胞株,并制备了高纯度的单克隆抗体,抗体具有CD14蛋白结合活性。结论：成功表达纯化了CD14蛋白,并制备了抗CD14单克隆抗体,为后续开发CD14检测技术提供抗体。     

围封年限对内蒙古灌丛化草原小叶锦鸡儿灌丛结构及群落种间关联的影响

由于全球气候变化及过度放牧等不合理利用,灌木入侵草地已经成为干旱半干旱草原区的一种普遍现象。本研究在内蒙古锡林郭勒草原区选择3处不同围封恢复年限（围封时间分别为1979,1983和2003年）的小叶锦鸡儿（Caragana microphylla）灌丛化草地,分析了围封年限对灌丛化草地关键种小叶锦鸡儿种群大小格局及灌丛间主要物种种间关联的影响,并从群落内物种生态位配置情况方面进行了相关机制的探讨。结果显示：（1）小叶锦鸡儿的冠幅大小分布结构的偏态系数在8/9的样区内大于0,表现为正偏态;随着围封年限的延长,在低、中灌丛化样区内,小叶锦鸡儿的冠幅有增大的趋势,这主要是由小于0.5 m冠幅的小叶锦鸡儿的减少或者消失导致的;（2）随着围封年限的延长,灌丛间多年生禾草生态位宽度（B）逐渐增大,表现为B_1979围封 > B_1983围封 > B_2003围封;灌丛间主要物种种间关系由负关联作用（竞争作用）向正关联作用（促进作用）转变。本研究结果不仅揭示了围封条件下小叶锦鸡儿灌丛化草地群落结构的变化及发展趋势,同时也从关键种小叶锦鸡儿种群大小格局及灌丛间主要物种种间关联的角度对相关机制进行了解释,为该区域的合理利用及恢复政策的制定提供了数据支持及理论指导。     

平茬处理对小叶锦鸡儿灌丛邻居植物群落空间格局的影响

近几十年来,内蒙古典型草原小叶锦鸡儿(Caragana microphylla)灌丛化现象普遍发生,严重影响了草地生产力。平茬作为灌丛化草地主要管理方式之一,已受到广泛关注;然而平茬如何影响灌丛邻居植物群落的格局动态及其下土壤理化性质变化,仍缺少相应研究。以内蒙古草原小叶锦鸡儿灌丛化草地为研究对象,进行平茬处理,并依据距离小叶锦鸡儿灌丛的远近位置(远—2.5 m,近—0.5 m)设置样方进行植物群落调查和土壤样品的采集,经分析发现:(1)平茬处理显著提高了灌丛邻居植物群落均匀度及邻居植物群落下土壤全碳、全氮含量。(2)借助零模型(Null-model)分析,得出未平茬处理条件下,距离灌丛远近两种位置群落均表现为竞争性格局;而平茬处理条件下,群落竞争性格局作用弱化,且距离灌丛2.5 m位置处群落表现为促进性格局。(3)调查群落中物种间的关系多为中性作用;仅有少数物种对表现为显著正(或负)相互作用关系,且多由群落中优势物种组成;平茬处理条件下群落中显著负相互作用关系物种对比例下降,支持群落整体竞争性格局弱化这一结论。所得结果不仅为小叶锦鸡儿灌丛平茬处理条件下邻居植物群落及土壤环境的动态变化的探讨提供了实验依据,而且对灌丛化草地的恢复具有一定的实践指导意义。     

血清CD5L对肝脏疾病患者的临床意义研究

摘要 目的：检测CD5L水平在肝脏疾病患者血清中的变化,并分析其临床意义。方法：采用ELISA法检测41例慢性肝炎患者、192例肝硬化患者、69例肝癌患者和136例健康对照血清CD5L水平。全自动生化分析仪测定肝功能指标,Spearman相关性分析用于评估CD5L与肝功能指标的关系。受试者工作曲线（receiver operator characteristic, ROC）分析血清CD5L的潜在诊断价值。结果：与健康对照相比,CD5L水平在肝炎、肝硬化、肝癌患者中显著降低（P<0.01）。肝硬化患者血清CD5L水平较肝炎及肝癌患者显著降低（P<0.01）。肝硬化代偿期和失代偿期患者血清CD5L水平无显著差异。血清CD5L水平与FIB-4指数(肝纤维化评分)呈显著负相关（r=-0.2688,P=0.0001）。Spearman相关性分析结果显示：在肝炎患者中,血清CD5L与总胆红素（T-BIL）、直接胆红素（D-BIL）、间接胆红素（I-BIL）显著正相关;在肝硬化患者中,CD5L与其他肝功指标无显著相关性;在肝癌患者中,CD5L与碱性磷酸酶（ALP）显著正相关。以健康人为对照组,肝硬化患者为病例组,ROC分析显示血清CD5L的诊断特异性为85.3%,敏感性为77.1%。结论：CD5L水平在肝炎、肝硬化及肝癌患者血清中显著降低,且在肝硬化患者中最低。CD5L水平与肝纤维化评分FIB-4指数负相关,可作为监测肝纤维化进展的潜在生物标志物。     

双氢青蒿素调控巨噬细胞增殖和迁移的作用研究

目的:探讨双氢青蒿素在体外对小鼠单核巨噬细胞RAW264.7的增殖、克隆形成、周期、凋亡和迁移的影响。方法:采用梯度浓度(2.5μg/m L, 5μg/m L, 10μg/m L, 20μg/m L)的双氢青蒿素处理RAW264.7细胞,利用CCK8实验检测双氢青蒿素对巨噬细胞增殖能力的影响,利用克隆形成实验检测双氢青蒿素对RAW264.7细胞克隆形成能力的影响,利用流式细胞术检测双氢青蒿素对RAW264.7细胞周期和凋亡的影响,利用划痕修复实验检测RAW264.7细胞迁移能力。结果:CCK8实验结果显示,双氢青蒿素可以显著抑制RAW264.7巨噬细胞的增殖能力,且抑制效果与双氢青蒿素的浓度呈正相关性。克隆形成实验结果显示,双氢青蒿素可以抑制细胞的克隆形成能力。双氢青蒿素处理使RAW264.7细胞G0/G1期比例显著升高,S期与G2/M期细胞比例显著降低。双氢青蒿素对巨噬细胞凋亡具有诱导作用,且凋亡诱导作用呈现浓度依赖的特性。划痕修复实验结果显示,双氢青蒿素可以显著抑制RAW264.7巨噬细胞的迁移能力。结论:双氢青蒿素可以导致巨噬细胞的细胞周期G0/G1阻滞,并且诱导细胞凋亡,对巨噬细胞增殖和迁移具有抑制作用。