尖孢镰刀菌M1耐热蛋白酶纯化及酶学性质

【背景】前期工作中,从北大仓白酒大曲分离到一株真菌,经形态学和分子生物学方法,将其鉴定为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporim)M1,研究发现该菌能产中性蛋白酶。中性蛋白酶是应用于工业化生产的重要酶制剂。由于其作用条件温和、催化速率较高,被广泛应用于食品、医药、皮革、饲料、化工和废弃物处理行业。【目的】为了使该菌蛋白酶应用于相关工业生产,需要对该蛋白酶进行纯化和酶学特性研究。【方法】采用硫酸铵分级分离、疏水和离子交换层析对该菌蛋白酶进行纯化,通过SDS-PAGE测定酶的纯度和分子量,并研究其热稳定性和酸碱适应性。【结果】经各步层析,蛋白酶纯化倍数达26.1,得率为7.9%;经测定纯酶的分子量为62 kD;该酶最适温度为40℃,最适pH为7.0,属于中性蛋白酶;该酶对酸较敏感,对碱有较强的耐受性;耐热性较强,但酶活性不受乙二胺四乙酸二钠盐抑制。【结论】由于该中性蛋白酶具有较好的耐热性,因此,可作为工业生产上潜在的生物催化剂。     

铅镉抗性菌株JB11强化植物对污染土壤中铅镉的吸收

研究了铅、镉抗性菌株(JB11)和生物降解螯合剂乙二胺二琥珀酸(S,S)-EDDS)提高高羊茅和红三叶草吸收土壤中铅、镉的能力。从土壤样品中筛选出1株对Cd、Pb具有较强抗性的菌株JB11,经鉴定为成团泛菌属(Pantoea agglomerans)。JB11对Pb2+、Cd2+、Cr6+、Cu2+、Zn2+、Ni2+等多种重金属和卡那霉素、氨苄青霉素、链霉素、四环素等抗生素具有抗性,在温度15—35℃和pH为5.0—9.0范围内生长良好,最适生长温度为30℃,最适pH值为7.0左右,在低于3%的NaCl浓度下生长良好。盆栽试验研究了菌株JB11、EDDS及1/2EDDS+JB11 3种处理下对生长在Cd 100 mg/kg、Cd 200 mg/kg、Pb 500 mg/kg和Pb 1000mg/kg的土壤中的高羊茅和红三叶生长及从土壤富集Cd、Pb能力的影响。结果表明,外加JB11能使高羊茅和红三叶的干重分别比对照都有增加。除外加JB11后在经Pb 1000 mg/kg处理的土壤中高羊茅地上部的Pb浓度、经Cd 200 mg/kg处理的土壤中红三叶地上部的Cd浓度以及经Cd 100 mg/kg处理的土壤中高羊茅和红三叶根部的Cd浓度以外,外加JB11后对其他重金属处理植物中Pb和Cd的含量都显著增加。外加EDDS后除在经Pb 500 mg/kg的土壤中高羊茅根部的Pb浓度增加差异不显著,对其余重金属处理都可产生显著的影响(P0.05)。1/2EDDS+JB11的复合处理下植物重金属吸收量多数高于JB11和EDDS单独处理,JB11用于植物修复土壤Pb和Cd污染具有很大的潜力。     

rhIGF-1等电点的测定

目的：通过测定rhIGF-1等电点为例，建立一种快速测定蛋白质等电点的方法。方法：采用等电聚焦电泳（isoelectric focusing,IEF）和高效液相色谱（HPLC）连用的方法，主要以7．5％的凝胶浓度、3％的交联度及6％的两性电解质浓度配置凝胶，电泳后的凝胶经凝胶成像系统和HPLE分析确定目的条带及其pI值。结果：rhIGF-1的等电点为pI=8．20，pH梯度曲线线形回归方程为Y=0．0664X＋3．8217，相关系数r达0．9956，说明等电聚焦电泳测定结果准确。     

牛初乳IGF-1的研究进展

牛初乳IGF-1是从牛初乳中提取制备的单链多肽蛋白质.氨基酸序列与其他物种同源性很高,其中与人类的IGF-1完全一致.在制备牛初乳IGF-1方面上,国内外的传统方法都是通过制备型色谱柱小剂量制备;而检测方面,国外早期是通过放射性免疫法(HAI)来测定,近几年也发展了一些新的技术,国内则大多数利用电泳、HPLC和Western blot.IGF-1具有促进细胞生长、增强机体免疫机制、促进骨骼生长、维持神经系统、调节心脏机能等功效,巳被广泛用于临床、生物学作用等研究领域.牛初乳IGF-1的大量制备具有相当广阔的前景,为牛初乳功能性食品的研制与开发带来新的方向.