一种源于蜗牛的壳聚糖水解酶的纯化和定性

目的研究属于蜗牛的壳聚糖水解酶的纯化方法,得到壳聚糖水解酶的纯品,从而为氨基酸序列分析、基因克隆及工业菌制备奠定前期基础。方法建立检测蜗牛壳聚糖水解酶活性的手段并考察影响酶活性的各种因素,比较现有层析方法纯化蜗牛壳聚糖水解酶的实际效果,确定纯化的最佳条件,从而设计出最合理的纯化方案。结果经苯基琼脂糖柱层析,DEAE-Sepharose离子交换层析和Sephacryl S-300凝胶过滤分离,得到高纯高活性蛋白质,在SDS-PAGE上用银染的方法呈单一蛋白质条带,比活性提高33.333倍,纯化倍数为18.272,得率为0.15。结论实验建立了1种从蜗牛中分离高效高纯度壳聚糖水解酶的方法,为壳寡糖的酶解工业生产提供了新思路、新方法。     

Rap信号在神经系统中的功能研究进展

小分子G蛋白Rap属于Ras家族,其结构类似于Ras,结合GTP后处于活性状态(RapGTP),结合GDP后则处于非活性状态(RapGDP)。在细胞内,Rap通过RapGTP与RapGDP之间的动态转换起到分子开关的作用,调控细胞增殖、分化、存活、粘附、迁移等生理过程。胞外信号通过特异性鸟嘌呤核苷酸交换因子(guanine nucleotide exchange factors,GEFs)调控Rap与GTP的结合,激活Rap;胞内特异性GTP酶激活蛋白(GTPase activating proteins,GAPs)促进GTP的水解,使Rap失活。活化的Rap信号通过其下游不同的信号分子调控不同的生物学功能。在神经系统中,Rap信号具有多样的生物学功能,Rap信号能促进神经元极性的建立和轴突生长,还能调节神经突生长。Rap信号能够调控神经突触结构和功能的可塑性变化。此外,也有研究报道Rap信号和神经元的迁移具有相关性。本文主要针对Rap信号在神经系统中的功能研究进展进行综述。     

合成生物学底盘微生物细胞的应用及其生物安全在创新型本科生培养中的实践

本科生创新能力培养是"双一流"建设人才培养的重要组成部分。合成生物学是一门新兴多学科交叉领域,被誉为可改变世界的十大新技术领域之一。构建高版本底盘微生物细胞和利用底盘细胞人工合成细胞工厂是合成生物学的重要组成部分。以实现创新型本科生为培养目标,我们将合成生物学底盘微生物细胞技术融入人才培养环节,通过组织学生参加国际遗传工程机器设计竞赛、主持大学生创新创业训练项目以及完成本科生毕业设计课题等多元化途径,提高学生理论联系实际及创新实践能力。同时,由于底盘微生物细胞是基因组经过精简、优化或其基因通路被改变的细胞,其应用存在一定的生物安全风险。我们通过将安全教育纳入培养大纲和教学计划、出版实验室安全与操作规范专业教材、开发虚拟仿真实验项目、建立实验室准入制度和信息化管理体系,以及针对底盘微生物细胞从购买、管理、规范使用和废弃物处理等进行生物安全教育等系列举措,规范底盘微生物细胞应用的生物安全。这些实践为培养创新型本科生提供了一个强有力的途径和有效保障,也为合成生物学的发展提供了支持,并有助于培养新的生力军。     

N2分子激光泵浦染料激光对小鼠NK细胞活性和肿瘤生长的影响

N_2分子激光泵浦染料激光(简称N_2染料激光)照射正常小鼠脾区后检测脾指数及脾细胞NK活性(比色沉淀法)的变化。发现600nm波长的激光照射能积显著提高脾指数,增强NK细胞活性,570nm、530nm波长亦能增强NK活性,500nm时则起显著抑制作用,570nm波长对脾指数无影响,而530nm、500nm则极显著降低脾指数。接种艾氏腹水癌(EAG)的荷瘤小鼠经激光照射9、11、13天后瘤重显著减小,且荷瘤后增大的脾脏亦得以显著减小,NK活性显著增强。说明适当功率和适当照射时间的激光影响机体免疫功能是防治肿瘤的途径之一。     

富含半胱氨酸蛋白61多克隆抗体的制备及其在子痫前期胎盘检测中的作用

目的:制备兔抗人富含半胱氨酸蛋白(Cyr61)多克隆抗体,并用该抗体检测Cyr61蛋白在重度子痫前期(PE)和正常妊娠胎盘中的差异表达.方法:用RT-PCR法从Hela细胞中克隆Cyr61全长mRNA,并在大肠杆菌中表达获得重组蛋白,免疫新西兰白兔得到兔抗人Cyr61多克隆抗体.然后用此抗体对14例重度子痫前期胎盘进行检测,并与孕周匹配的14例正常胎盘比较.结果:Cyr61DNA测序结果与参考序列一致;Western blot竞争法证实制备的兔抗Cyr61抗体与商品化的羊抗Cyr61抗体有共同的靶点;用制备的兔抗人Cyr61蛋白抗体Western blot检测发现,在重度PE胎盘中Cyr61蛋白含量较正常胎盘含量降低(14.2±1.0 vs.29.2±1.1 P＜0.05).结论:本研究成功地在大肠杆菌中表达出Cyr61融合蛋白,并制备了特异性高的兔抗人Cyr61抗体.重度PE胎盘中Cyr61蛋白表达水平降低.     

GABAB受体活性调控机制的研究进展

γ-氨基丁酸B型受体(GABAB receptor,GABABR)是由GABAB1(GB1)和GABAB2(GB2)亚基组成的异源二聚体,在中枢神经系统中介导持久而缓慢的神经抑制活动。GABAB受体活性受多种因素的调控,如受体的胞内运输、受体的内吞和再循环、受体与胞内蛋白相互作用等,在神经元维持突触可塑性、产生快速神经抑制信号等方面起着非常重要的作用,其活性失调则导致自发性癫痫、痉挛药物成瘾、精神分裂症等多种严重疾病。     

羊口疮024基因的表达、多抗制备及亚细胞定位

目的克隆表达羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)024基因,制备多克隆抗体,检测其免疫原性,并对其进行亚细胞定位分析。方法根据GenBank中羊口疮病毒024基因序列设计引物,进行PCR扩增。将其亚克隆至表达载体,构建原核重组质粒pGEX-6P-1-024以及真核重组质粒pEGFP-N1-024。将原核重组质粒转化Rosetta (DE3)细胞,IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定024蛋白的表达情况。纯化后的024蛋白免疫BALB/c雌鼠,获得血清并制备多克隆抗体,进行Western-blot分析。将构建的真核质粒转染MDBK细胞,24h后通过免疫荧光观察其在细胞中的表达及亚细胞定位。结果 SDS-PAGE结果表明,羊口疮病毒024基因在Rosetta (DE3)细胞中正确表达,大小为59kDa。Western-blot结果表明024蛋白能与制备的多抗发生特异性反应,具有良好的反应原性。荧光显微镜下结果表明024蛋白转染MDBK细胞后主要在细胞质中表达。结论本实验为后续深入研究ORFV 024基因功能和致病机制奠定了基础。     

病原体感染及其免疫逃逸机制研究进展

病原体进入宿主后,可通过多种致病机制损伤机体。与此同时,病原体为维持其在宿主体内的生存繁殖,可通过各种方式逃避宿主免疫系统的攻击。简要介绍了病毒、细菌及寄生虫主要的感染及免疫逃逸机制。     

河南新乡地区儿童的体质发育与体型

本文报道了河南省新乡地区４－１３岁汉族儿童的１８项体质指标的测试结果,并计算了８项体质发育指数;分析了本地区儿童生长发育的特点,并与文献资料进行了比较;据有关指数,确定该地区汉族儿童躯干部的体质类型为：长躯干型、窄胸型、窄肩型、窄骨盆型。     

裂褶菌菌株G18对孔雀石绿染料的脱色优化

通过对兔眼蓝莓幼果组织中分离得到的内生真菌G18进行形态特征、ITS序列和系统进化分析鉴定菌株G18为裂褶菌Schizophyllum commune。同时,对菌株G18产生的3种木质素降解酶进行监测,发现G18菌株可以分泌漆酶、木质素过氧化物酶和锰过氧化物酶。为明确裂褶菌G18对染料的脱色能力,利用裂褶菌G18对固体条件下8种染料进行脱色能力的检测,筛选出较易脱色的染料后,对该染料的脱色条件进行优化。结果表明,裂褶菌G18对8种染料均可以脱色,对孔雀石绿染料的脱色效果最好。裂褶菌G18对孔雀石绿的脱色优化结果为pH 7.0、20.0g/L淀粉、1.0g/L尿素、1.0g/L硫酸锌、接菌量9片（d=5.0mm）。