不明原因男性不育人群中睾丸特异性乳酸脱氢酶基因突变的发现及其意义

为了研究睾丸特异性乳酸脱氢酶,即乳酸脱氢酶C4(LDH-C4)基因突变在男性不育发病中的作用,利用LDH-C4特异性底物对100名不明原因男性不育症患者的精子LDH-C4进行活性显色,用变性高效液相色谱(DHPLC)技术对LDH-C4活性低下的患者进行LDHC基因PCR产物的突变筛查,对DHPLC峰形异常的PCR产物进行序列测定.筛选到一组精子LDH-C4活性明显下降的患者,其中1名患者的LDHC基因PCR产物在DHPLC中呈异常洗脱峰.对这一PCR产物进行序列测定,发现患者LDHC基因第5外显子的115位碱基发生了T→A的杂合改变(GenBank登录号GU479375),该突变使LDHC基因的178位密码子由原来的TTG(编码亮氨酸)变为TAG(终止密码子),形成截短的C亚基.T克隆-测序进一步证实了该无义突变的杂合状态.这是在人类LDHC基因上发现的第一个突变,提示LDHC基因突变可能是男性不育发病的原因之一.     

截短的人精子特异性乳酸脱氢酶L178X突变体丧失催化活性

精子特异性乳酸脱氢酶(乳酸脱氢酶C4,LDH-C4)是精子能量代谢的关键酶类之一.为了研究前期发现的1个LDH-C4基因突变(L178X)对LDH-C4功能的影响,在已构建的LDH-C4原核表达载体pET-28a(+)-hLDHC的基础上,利用PCR定点诱变技术,制备了L178X突变体的原核表达载体pET-28a(+)-hLDHC/L178X,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS,诱导其表达.对该载体进行限制性酶切表明,插入的LDHC基因cDNA约1000bp;序列分析表明,该插入片段读框正确,带L178X突变.SDS-PAGE及免疫印迹显示,携带该载体的菌体可表达分子量约25kD的蛋白质,后者可被兔抗LDH-C4血清特异识别.乳酸脱氢酶(LDH)活性测定及活性染色表明,所表达的产物没有LDH活性.本研究成功进行了LDH-C4的1个突变体的原核表达,为研究LDHC基因突变对LDH-C4功能以及男性生育的影响奠定了基础.     

新疆尉犁县黑湖嗜盐嗜碱菌的分离及系统发育学分析

【目的】从新疆尉犁县黑湖中筛选分离获得嗜盐嗜碱微生物,并对筛选获得的微生物进行种属鉴定。【方法】采用传统分离鉴定技术,进行形态和生理生化特性研究和基于16S r RNA基因的序列分析。【结果】从样品中分离获得可培养嗜盐嗜碱菌25株,对其进行鉴定。根据生理生化特征、16S r RNA基因序列测定和系统发育分析表明,25株菌分布在古菌Halorubrum、Haloarcula、Natrialba、Halohasta和Halopiger等5个属。其中优势菌群为Halorubrum,次优势菌群为Natrialba。其中DH-66(KU663028)属于Halopiger属,16S r RNA基因序列同源性与该属的模式菌株Halopiger aswanensis 56T同源性最高,为95.75%,预示为潜在的新种(新种鉴定将另行报道)。25株嗜盐嗜碱菌生长条件实验表明,这些菌适应Na Cl的浓度范围为15%-30%、最适浓度为20%-25%,生长的p H范围为7.0-13.0、最适p H为9.0-10.0。各种水解酶类的分析表明,在分离的25株菌中产淀粉酶的菌有5株占20%、产蛋白酶的菌有4株占16%、产酯酶可水解吐温20的菌有15株占60%、可水解吐温40的有7株占28%、可水解吐温80的有4株占16%、产过氧化氢酶的菌有14株占56%。9株菌同时能产4种酶,2株菌同时能产3种酶。表明了嗜盐嗜碱菌产酶的多样性。19株菌硝酸盐还原为阳性。【结论】揭示了新疆尉犁县黑湖嗜盐嗜碱菌生理生化特性的多样性和系统发育多样性,而且蕴藏着较丰富的新的微生物类群,亟待系统研究和进一步开发利用。     

细菌诱析袋表面培养法及其蛋白质产物的检测

本报告的细菌透析袋表面培养法,可使被检菌的浓度比普通培养法高１０倍左右,并避免了培养基中高分子物质混入,以上清原液直接进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ得到了清晰的带谱。对葡萄球菌产生的蛋白质带谱观察显示;不同菌种,菌株间带谱都有各自不同特征,各菌株的带谱重复性良好。本培养法在细菌蛋白质产物分析及临床细菌鉴定中是很在实用价值的。     

紫茎泽兰提取物对美洲大蠊和米蛾的忌避活性

应用“Y”型嗅觉仪和培养皿用紫茎泽兰(Eupatorium adenophorum Spreng)提取物对美洲大蠊Periplaneta americana(L.)和米蛾Corcyra cephalonica(Stainton)的忌避效果进行生物测定。结果表明,紫茎泽兰精油0·028g/L剂量对美洲大蠊忌避活性最高,平均忌避活力为78·28%,显著高于粗提物各剂量的忌避活力,而对米蛾幼虫生物测定的结果表明,10g/kg粗提物的剂量对其忌避效果最好,平均忌避活力为80·86%。     

慢病毒介导miR-4258-siRNA表达对波动高糖诱导肾小管上皮细胞转分化的影响

该实验构建了慢病毒介导(lentivirus,LV)的miR-4258-siRNA,探讨干扰miR-4258对肾小管上皮细胞(HK-2)转分化的影响。将HK-2转分化细胞分为正常组、阴性对照组和干扰组;荧光定量PCR方法检测miR-4258的表达情况;免疫印迹检测Fibronectin、E-cadherin和α-SMA的表达情况。结果显示,miR-4258-siRNA-LV可显著降低miR-4258的表达水平,干扰组的Fibronectin和α-SMA的相对表达量较阴性对照组显著下调;而E-cadherin的相对表达量较阴性对照组明显上调。研究说明,通过慢病毒介导的miR-4258-siRNA-LV下调miR-4258的表达,可抑制波动高糖诱导的HK-2细胞转分化过程。     

不同营养支持对急性重症胰腺炎的效果对比及对血清钙离子、hs-CRP、AMS、PCT的影响

摘要 目的：探讨不同营养支持对急性重症胰腺炎的效果对比及对血清钙离子、超敏C反应蛋白（hs-CRP）、淀粉酶（AMS）、降钙素原（PCT）的影响。方法：选择2015年1月到2020年12月在我院接受治疗的131例急性重症胰腺炎患者,采用随机数表法分为试验组（n=66）和对照组（n=65）。对照组给予肠外营养支持治疗,试验组给予肠内营养支持治疗。比较两组临床疗效、钙离子、hs-CRP、AMS、PCT、D-乳酸、二胺氧化酶（DAO）、内毒素、临床症状改善情况及不良反应发生情况。结果：治疗后,两组总有效率比较差异显著（P<0.05）;治疗前,试验组和对照组血清抑钙离子、hs-CRP、AMS、PCT比较无显著差异;治疗后,试验组和对照组血清hs-CRP、AMS、PCT随着时间的推移而降低,且试验组均低于对照组,血清钙离子随着时间的推移而升高,且试验组高于对照组,差异显著（P<0.05）;治疗前,试验组和对照组血清D-乳酸、DAO、内毒素比较无显著差异;治疗后试验组和对照组血清D-乳酸、DAO、内毒素随着时间的推移而降低,且试验组均低于对照组,差异显著（P<0.05）;试验组腹痛缓解、肠鸣音恢复、血淀粉酶恢复及尿淀粉酶恢复时间均显著低于对照组,差异显著（P<0.05）;两组不良反应总发生率分别为9.09%、15.38%（P>0.05）。结论：在急性重症胰腺炎患者中应用肠内营养支持效果显著,可有效改善血清钙离子、hs-CRP、AMS、PCT水平,且不良反应较低。     

高浓度盐对植物的影响

目前关於高濃度鹽对植物影响的研究注意得很不够,並且对植物所表现的极个别的抗鹽性以及植物有机體受鹽害的生理学这類问题,在文献中也没有適当的阐明。因此研究植物在那些情况下最能表现出对鹽渍基质適应的特性以及在那些情况下对鹽的有毒作用发生各种抵抗的反应是很有意义的。大家知道植物种在强鹽地和鹽斑地带常常普遍地死亡,能活的只是个别矮小的植株。而在这些活着的矮小植株中间又常常会见到个别植株发育得很好。据金傑里的研究指出,生长得好的棉花更能適     

黑颈乌龟两个养殖种群的遗传多样性分析

开展濒危物种养殖群体的遗传多样性研究,对种质资源的保护与利用具有重要意义.选择线粒体COI基因作为本次研究的分子标记,分别从序列组成、单倍型及遗传距离、种群历史动态等方面对黑颈乌龟(Mauremys nigricans)两个养殖种群进行比较分析.结果显示:两个种群的COI序列全长572 bp,A+T含量为55.4％,G+C含量为44.6％.广东种群的遗传多样性指标均高于广西种群.其次,两个种群共享15个单倍型,广东种群内部的遗传距离(0.002～0.024)高于广西种群内部(0.002～0.011),可见广东种群具有更加丰富的遗传变异.中性检验结果显示种群间的遗传分化达到较高水平(Fst=0.205 93),AMOVA分析结果证明种群内部变异在两个种群的遗传分化中占据主要作用(79.41％).最后,核苷酸错配分布曲线和中性检验结果揭示广西种群经历了种群扩张,然而在扩张过程中并未有效积累核苷酸变异,建议避免杂交,加强同一物种不同群体间的基因交流,并优先保护群体中个体占有率低的单倍型.本研究为黑颈乌龟的遗传多样性保护提供了科学的理论指导,促进了黑颈乌龟经济养殖与物种保护的共同发展.     

波动性高糖对肾小管上皮细胞Wnt／β-catenin信号途径的影响

肾脏纤维化分为肾小球硬化和肾小管间质纤维化（tubular interstitial fibrosis,TIF）,而TIF过程与肾损伤具有密切的关系。TIF是由于细胞外基质的过度沉积造成的,肌成纤维细胞是TIF发生发展过程中产生细胞外基质的主要细胞,该过程被成纤维细胞激活,涉及上皮细胞向肌成纤维细胞的转分化^[1-2]。Wnt／β-catenin信号途径涉及细胞增殖、肿瘤发生与转移的调控。β-catenin是Wnt信号途径的关键分子,在细胞的生长与分化过程中起着重要的作用,