双向电泳和肽质量指纹谱技术鉴定支气管上皮细胞恶性转化相关蛋白质ANX1-human

采用 2 - D PAGE及质谱技术对α粒子照射诱发人支气管上皮恶性转化细胞的不同阶段进行了比较蛋白组分析与鉴定 .2 - D电泳后在分子量 1 4.4～ 94k D,等电点 3～ 1 0范围内分离出约 1 1 0 0个不同蛋白质斑点 .对等电点约 7,分子量约 40 k D的蛋白质点进行了质谱分析 .鉴定出分子量为38.58k D、等电点 6.64的蛋白质 ANX1 - human(脂皮质蛋白 ,lipocortin ) ,并且发现该蛋白质在BEP2 D细胞恶性转化过程的不同时期存在差异表达 .提示蛋白质 ANX1 - human参与了支气管上皮细胞恶性转化过程 ,与细胞恶性转化相关 .     

以抑制消减杂交法筛选肿瘤耐药相关基因

避开化疗诱导多药耐药性的常规方法,建立烷基磷脂类化合物（十六烷基磷酸胆碱,HePC)诱导人上皮性肿瘤细胞系产生交叉耐药。旨在以新的角度认识肿瘤多药耐药性,揭示新的调控机制。利用抑制消减杂交技术,对库进行克隆分析,在获得的可分析的78个克隆中,27%没有同源基因片段或同源性很低,暂定为“新基因”;14%具有染色体明确定位,认为是化疗敏感肿瘤KB细胞所特有的cDNA片段;19%在人类EST库库MGC和CGAP中出现,可能是肿瘤细胞特有基因;发现与耐药相关的巳知功能基因高达40%。     

几种牧草幼苗对冷蒿茎叶水浸提液化感作用的生理响应

采用沙培法对草木樨、披碱草、冰草和羊草进行幼苗生长试验,研究了不同浓度冷蒿茎叶水浸提液处理对4种牧草幼苗生长、根系活力、叶绿素含量以及抗氧化保护酶活性的影响,并采用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术对冷蒿茎叶水浸提液的化学成分进行了分析。结果表明:冷蒿茎叶水浸提液对草木樨、披碱草、冰草和羊草4种牧草幼苗生长有明显的影响,这种影响效应与牧草的种类及冷蒿茎叶水浸提液浓度显著相关。其中,25mgDw·mL-1的冷蒿茎叶水浸提液均表现出对4种牧草幼苗生长指标有极显著的抑制作用(P0.01),4种牧草幼苗根系活力分别降低了46.7%、65.9%、59.3%和66.7%,草木樨、披碱草和羊草幼苗叶绿素含量分别下降了47.3%、56.6%和46.7%。当冷蒿茎叶水浸提液浓度为10mgDw·mL-1时,对4种牧草幼苗体内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性有显著的促进作用;当浓度为25mgDw·mL-1时,对4种牧草幼苗体内SOD、POD和CAT活性有显著的抑制作用,同时使幼苗体内丙二醛(MDA)的含量显著增加。冷蒿茎叶水浸提液有30种化感类次生代谢化合物,主要成分是樟脑(27.6%)、龙脑(10.1%)、蓍草苦素(9.8%)、桉树脑(8.7%)、喇叭烯醇(4.1%)和对-1-薄荷烯-4-醇(4.1%),占总量的60%以上。     

竞争RT-PCR法定量检测多药耐药基因的表达

由MDR1过度表达所介导的多药耐药性存在于多种肿瘤组织中,是降低化疗效果的主要原因之一,其耐受化疗药物的程度与MDR1的表达量呈正相关.准确测定MDR1的表达量在临床化疗过程中有重要的指导意义.建立了竞争RT-PCR定量检测MDR1表达的方法.首先构建含MDR1 cDNA片段的质粒,其携带的cDNA和靶cDNA有相同的引物结合区,但和靶cDNA长度上有区别（少58 bp）.把该cDNA在体外转录出的cRNA作为竞争PCR的内参照,该cRNA与靶RNA在同一体系内进行反转录和PCR过程,二者的PCR产物因长度不同可经电泳区分开.分析电泳结果,由已知的cRNA内参的量可计算出靶RNA的量,从而得到MDR1基因的绝对表达量.该方法具有灵敏、可靠、准确等优点.     

MDR1反义RNA降低细胞KB_(v200)的耐药性

由ＭＤＲ１基因过度表达所引起的肿瘤细胞对化疗药物的耐药性,是导致化疗失败的主要原因之一．针对ＭＤＲ１中一段包含转录启始位点、翻译启始位点和转录正调控区的序列,设计了反义ＲＮＡ并将其克隆到逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮ上．用脂质体包裹载体导入ＭＤＲ１高表达的耐药细胞ＫＢｖ２００中,在反义ＲＮＡ转染的细胞中,ＭＤＲ１在ｍＲＮＡ和蛋白水平的表达都有下降,细胞内药物的浓度有所提高,对长春新碱、阿霉素的耐药性分别下降了６５％和４７％．实验结果表明,反义ＲＮＡ对ＭＤＲ１的表达有抑制作用,从而使肿瘤细胞内的药物浓度升高,其耐药程度下降．     

HPC脂质体的制备及抗HL-60细胞增殖作用的初探

采用十六烷基磷酸胆碱（ＨＰＣ）作为脂质体膜材,配以胆固醇和双十六烷基磷酸盐,反相蒸发法制备出ＨＰＣ脂质体,连续５周每周测定一次它对ＣＦ（ｃａｒｂｏｘｙｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ,羧基荧光素）的包封率,可知制备的脂质体在前２周内相当稳定,５周后包封率仅减少２４％,可满足实际应用的需要．冰冻蚀刻法测定脂质体的平均直径在５００ｎｍ左右,该直径的脂质体较适于和细胞发生相互作用且稳定性比小单层脂质体好．四氮唑（ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌｄｉｐｈｅｈｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍｂｒｏ－ｍｉｄｅ,ＭＴＴ）分析可知,在脂质体浓度达１５μｍｏｌ／Ｌ,对ＨＬ－６０细胞的增殖具有抑制作用．在相同的脂浓度下,ＨＰＣ脂质体抑制ＨＬ－６０细胞生长比游离ＨＰＣ有较强的抑制细胞增殖作用,当ＨＰＣ浓度低于５μｍｏｌ／Ｌ时,细胞生长不受抑制．当ＨＰＣ浓度在１０μｍｏｌ／Ｌ时,ＨＰＣ脂质体表现出对细胞生长的抑制作用,而游离ＨＰＣ在此浓度下的抑制作用较低     

绿色荧光蛋白在een基因表达产物中的应用

ｅｅｎ是一个新的人类急性白血病相关基因,为了确定ｅｅｎ基因在ＣＨＯ细胞中表达产物的作用部位,用绿色荧光蛋白载体将ｅｅｎ基因导入其中并得到表达。结果表明,ｅｅｎ基因的表达产物定位于胞浆中。     

血管靶向激光的特征和应用

血管靶向激光以血管中的血红蛋白为靶分子,经由激光与血红蛋白相互作用的光热效应,破坏和封闭受照射的血管组织,以达到特定的治疗目的。选择性光热解作用是血管靶向激光的基本原理。本文围绕国内外临床上常见的几种血管靶向激光器,介绍和讨论其工作特征和治疗参数。并对密切相关的非激光光源和血管靶向光动力疗法的光源作简要介绍。     

竞争RT-PCR法定量检测多药耐药基因的表达

MDR1基因的表达量与肿瘤细胞的耐药性呈正相关且在多种肿瘤组织中都有过度表达。准确监测肿瘤病人MDR1基因表达情况对选择化疗方案和提高化疗效果有重要作用。在检测MDR1基因表达的方法中RT-PCR检测MDR1的过程中一般使用β肌动蛋白作为外参照,通过计算MDR1 cDNA与β肌动蛋白cDNA的比值来表示MDR1基因的表达量。这样只能得到MDR1基因相对β肌动蛋白基因的表达量,而不能测出其绝对表达量。而且扩增     

超薄切片套片法

超薄切片捞取方法很多,近年来,我们采用铂金丝环套片法,与目前采用的沾片法和水底捞片法相比,具有较多的优点。铂金丝环套片法操作简单,易于掌握,而且能使切片平整地铺在铜网中央。沾片法易将带状的连续切片打乱,切片也往往有皱折。水底捞片法,固然可以使切片保持平整,但操作不易掌握,对于缺乏经验的新手来说,很容易将切片捞偏,即使是熟练的操作者,