鳞杯伞α-半乳糖苷酶的提取纯化及酶学性质研究

采用离子交换层析和凝胶过滤层析对鳞杯伞子实体中的α-半乳糖苷酶进行纯化,得到了一种分子量为50 kDa的α-半乳糖苷酶,命名为CSG。纯化后的CSG纯化倍数为891.46倍,比活力为54.78 U/mg,得率为0.71%。通过BLAST比对液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)获得其肽段,发现其为GH27家族的α-半乳糖苷酶。CSG的最适pH为3.0,最适温度为50 ℃。在酸性范围pH 2.2-7.0和温度范围4-30 ℃有较好的稳定性。Mn²⁺、Cd²⁺、Cu²⁺对CSG有较强的抑制作用。半乳糖和蜜二糖对CSG的抑制类型为混合型抑制。化学修饰剂N-溴代琥珀酰亚胺显著降低CSG的活力,碳二亚胺对CSG具有显著的激活作用。该酶具有良好的蛋白酶抗性,且对棉子糖家族寡糖(RFOs)、瓜尔豆胶和赤槐豆胶均表现出良好的水解作用。     

利用F_v/F_m检测锥状施克里普藻N和P限制的局限

通过测定缺N和缺P的锥状施克里普藻(Scrippsiella trochoidea)在分别添加充足的NO3-N、PO4-P后,光系统Ⅱ(PSⅡ)最大光化学量子产量(Fv/Fm)的变化,来检验Fv/Fm能否用来检测锥状施克里普藻N、P限制的情况。实验表明,锥状施克里普藻分别在不加N、P元素的f/2-Si培养基培养过程中,缺N组叶绿素a(Chla)浓度先升高,在原培养液N耗尽后快速下降;缺P组Chla开始时升高,在原培养液P耗尽后缓慢下降。两组藻液Fv/Fm比值保持相对稳定,短时间内未见明显降低。当分别向藻液中重新添加充足的N和P后,缺N组藻液添加N后Chla浓度48h内明显上升,缺P组藻液添加P后Chla浓度48h内没有明显变化,两种培养液中Fv/Fm均未见明显升高。结果证明,利用Fv/Fm不能够快速检测锥状施克里普藻N、P限制的情况,该法在检测浮游植物营养盐胁迫时具有局限性。