利用逆转录病毒RNAi载体抑制心肌成纤维细胞分泌纤维连接蛋白

心脏间质纤维化是心室重塑的最重要表现之一, 心肌细胞外基质的过度积聚在其中扮演着重要角色. 纤维连接蛋白是细胞外基质的重要成分之一, 它负责胶原之间的连接、细胞的黏附和增殖等. 纤维连接蛋白主要由心肌成纤维细胞产生. 由于导致心肌细胞外基质过度分泌的因素很多, 单独阻断某一上游途径很难完全抑制由其他途径导致的过度合成. 利用RNAi技术试图在细胞外基质合成的终末途径进行阻断以期达到更为有效的结果. 通过体外合成的双链RNA, 抑制了纤维连接蛋白在血管紧张素Ⅱ刺激下的过度表达, 进而构建带有H1启动子的逆转录病毒载体, 成功地实现了用可稳定表达的shRNA抑制纤维连接蛋白的过度分泌. 该载体也可作为今后进行基因功能快速分析和基因治疗的工具.     

动态检测血管紧张素Ⅱ刺激后STAT3信号核转位及其与衰老的关系

为了动态观察复制性衰老细胞中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)激活人信号转导与转录活化因子3(hSTAT3)信号转导途径的核转位情况及该途径在细胞衰老过程中的变化。将载体pMS1-hSTAT3上的目的基因STAT3序列亚克隆到pEGFP-C3报告载体中,构建出pEGFP-hSTAT3质粒选择人胚肺二倍体成纤维细胞WI-38细胞株进行细胞培养,通过脂质体(Effectene)转染的方法,将pEGFP-STAT3质粒分别转染至19代,42代WI-38细胞中;在激光共聚焦显微镜下动态观察血管紧张素Ⅱ激活STAT3的核转位的变化及不同代数的差别．结果显示AngⅡ刺激细胞后,出现活化的STAT3在胞核内聚集现象,并且在19代细胞中15分钟开始出现,30—45分钟左右时达到高峰;42代细胞中30分钟左右开始出现,50—60分钟左右达到高峰。因此我们认为AngⅡ刺激WI-38细胞,能出现hSTAT3信号转导的核内集聚现象;并且随着WI-38细胞传代数的增加,STAT3信号转导入核时间延迟。说明随着细胞的复制性衰老,通过STAT3通路转导的信号活性逐渐降低,最终影响细胞的增殖,可能是促进细胞衰老的原因之一。     

东北蕨类植物的分类研究

通过研究现有标本,考证即往文献,本文就东北蕨类植物疑难种类发表了自己的分类见解。指出了既往文献的某些错误;描述了这些种类的鉴别性特征及与其近亲种的区别;提出了二个命名新组合。     

螺旋藻源血管紧张素转化酶抑制肽的纯化和鉴定

血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂通过影响肾素-血管紧张素系统,对减缓和抑制高血压具有重要的作用.该研究通过超滤、凝胶过滤色谱、反相高效液相色谱等方法,从钝顶螺旋藻的木瓜蛋白酶水解液中分离、纯化得到一种血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽,并利用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和氨基酸测序对纯化肽进行鉴定.此外,对其抑制类型和体外模拟消化环境稳定性也进行了研究.结果表明,分子质量范围为0～3000ku的酶解液ACE抑制活性最高,IC50值为(1.03±0.04)g/L.该部分酶解液通过纯化获得ACE抑制肽,IC50值为(0.0094±0.0002)g/L,相当于(27.36±0.14)μmol/L,序列经鉴定为Val-Glu-Pro.Lineweaver-Burk图和Dixon图表明该ACE抑制肽为非竞争性抑制剂,Ki值为(23.59±0.54)μmol/L.体外稳定性实验显示,该抑制肽在胃蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶等胃肠蛋白酶的消化下能够保持良好的抑制活性,表明螺旋藻源ACE抑制肽可以用于降血压功能食品和药剂方面,具有很好的发展前景.     

叶片投影盖度--描述植物群落结构的有效方法

植物群落盖度是描述植物群落结构及其重要性的主要指标之一。但长期以来植物群落盖度的测定往往是基于野外目视估计 ,影响了植物群落盖度特征度量的准确性。本文引入植物群落叶片投影盖度 (FPC)的概念 ,其含义是植物群落叶片覆盖地表的百分率 ,它具有生态意义明确、适于描述植物群落水平结构的特点。使用自制的FPC测量仪 ,在新疆的两个地区进行了FPC的测定 ,同时将测定数据与采用Stella模型工具开发的植物群落生理生态模型的模拟FPC值进行比较 ,二者相符较好。因此 ,认为FPC是描述干旱区植物群落水平结构的有效方法 ,并可用于所有植物群落叶片投影盖度的度量。     

秋汛带鱼对水团舌锋的聚集反应与渔场预报初探

本文分析了秋汛带鱼对水温舌锋伸展的聚集反应,这种聚集反应常出现在舌锋延伸与流界的交汇区、带鱼的适温区域内,舌锋线附近聚集密度较大,渔业产量也与聚集强度成正比。利用这一现象,在现有的技术条件下,从海洋表层水温分布着手,分析水团和海流的分布变动情况,结合当时生产实际和鱼类生物学状况,进行中心渔场短期预报。预报实践初步表明,这种方法是可行的,它对渔业生产有重要价值,对于探讨鱼发规律和预报方法也是有益的。     

NaCl和Na2SO4胁迫下两种刺槐叶肉细胞叶绿体超微结构

二倍体刺槐(diploid Robinia pseudoacacia)是我国水土保持林的先锋树种,具有较强的适应性和抗逆性,对改善生态环境、防治水土流失、调节水文状况有重要作用。四倍体刺槐(tetraploid Robinia pseudoacacia)是二倍体刺槐的加倍品种,也称多倍体刺槐,由韩国引进,具有速生、耐盐碱、耐干旱和耐烟尘等特点。目前,关于四倍体刺槐的研究,主要集中于栽培技术和繁殖技术方面,而关于四倍体刺槐叶片超微结构与其耐盐性的关系尚缺乏报道。比较了二倍体刺槐和四倍体刺槐在NaCl和Na₂SO₄胁迫下,叶片叶绿体超微结构的变化特点,一方面可以对二者的耐盐性进行鉴定,同时也可以探讨不同盐分胁迫条件下的作用机制。利用NaCl和Na₂SO₄进行20d的盐胁迫处理,观察叶绿体超微结构的变化特点,发现:NaCl处理前,二者叶肉细胞叶绿体为梭形、形态饱满、结构完整,NaCl处理后10d时,二倍体刺槐的叶绿体出现变形、膜模糊、基粒片层松散、类囊体解体、脂质球增多等现象,NaCl处理后20d时,叶绿体肿胀、变形,基粒片层断裂,膜系统解体。Na₂SO₄处理后10d时,二倍体刺槐的叶绿体肿胀,膜模糊,基粒片层松散、类囊体解体,Na₂SO₄盐胁迫处理后20d时,膜系统全部解体,结构破坏更为严重。总体来说,四倍体刺槐在盐胁迫后叶绿体结构变化不明显,只是在Na₂SO₄处理20d时,四倍体刺槐的叶绿体出现中空、基粒片层松散、膜边缘模糊现象。在处理前,两种刺槐的叶绿体均紧贴细胞壁,分布于细胞壁边缘。在NaCl处理后10d时,二倍体刺槐的叶绿体仍呈有序排列,紧贴细胞壁,但在处理后20d时,大部分叶绿体脱离细胞壁,呈随机分布。在Na₂SO₄处理后10d时,二倍体刺槐部分叶绿体脱离细胞壁,位于细胞中央。在Na₂SO₄处理后20d时,二倍体刺槐叶绿体大部分与细胞壁脱离。四倍体刺槐在两种盐胁迫处理前后叶绿体的排列变化不明显,均分布于细胞壁边缘,紧贴细胞壁。所以在盐胁迫下,耐盐植物叶片的叶绿体表现为结构完整,基粒片层清晰,类囊体结构完整,而不耐盐植物则表现为叶绿体超微结构松散、变形,基粒片层模糊,破坏严重时基粒片层扭曲,叶绿体解体,失去完整结构。     

大豆中L34基因的克隆与表达分析

目的:采用分子手段试图分离与大豆种子低温吸胀相关的基因.方法:利用cDNA-AFLP(cDNA-amplified fragment length polymorphism)和RACE技术从大豆种子胚轴中克隆到一个编码132 kD的全长核糖体蛋白基因,命名为SOL34.结果:序列分析表明,SOL34和苜蓿(gi | 113205273 |)、茄科植物(gi | 48057670 |)及拟南芥(gi | 2500376 |)中L34蛋白基因的同源性分别为95%、95%和90%.半定量RT-PCR结果表明:大豆种子在4℃下吸胀24h内,胚轴中的SOL34被诱导表达,其中当种子低温吸胀6h,SOL34表达量升高非常明显,18h的表达量最大,24h表达量和18h相似;SOL34在大豆不同部位的表达不同,4叶期的大豆幼苗经过低温处理后,根尖中SOL34的表达比非处理材料增强约5倍,同时比胚轴中高约2倍;但是在叶片中,SOL34表达量并没有受到温度的影响,表达量也很弱,说明SOL34在叶片中是组成型表达.结论:结果分析表明,SOL34可能和大豆根的代谢有关.     

生物分子在溶液中的构象和动力学的自旋-晶格驰豫研究 Ⅰ.丙氨酸

对丙氨酸在水溶液中的构象阳动力学进行了~(13)C自旋—晶格弛豫研究.它的C_α和C_β都有完全的核奥佛好塞效应(NOE),但弛豫特性有明显差异;表明它的甲基在丙氨酸分子整体作各向同性重取向运动的同时绕C_α—C_β键快速旋转.根据这个转动扩散模型,利用实验测定的自旋—晶格弛豫时间和溶液粘度计算了丙氨酸在不同pH值下的体积.对它的体积随离子态的变化,从丙氨酸分子内和丙氨酸间以及丙氨酸与水相互作用加以讨论.此外,还得出了丙氨酸在溶液中作整体运动和甲基内旋转的势垒.以及与之结合的水分子数.     

Val-Glu-Pro对原发性高血压大鼠的体内降压作用

Val-Glu-Pro(VEP)是从钝顶螺旋藻(Spirulina platensis)中发现的一种血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽.以原发性高血压大鼠(SHR)为模型,检测单次口服和一周间口服VEP的降压效果,并通过Real-timePCR和酶联免疫吸附法(ELISA)探索其对肾素-血管紧张素系统(RAS)主要成分在SHR大鼠肾脏和血清中的表达调控作用.结果表明:口服VEP的最低有效降压剂量为5mg/kg,加大剂量后表现出剂量效应,最低加权收缩压(WSBP)出现在口服后6h,最低加权舒张压(WDBP)出现在口服后4 h.在一周间口服试验中,10 mg/kg VEP处理组的WSBP在第5日显著低于负对照组.此外,口服VEP显著下调了SHR大鼠肾脏中肾素(renin)、ACE、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)类型1受体(AT1)的mRNA表达,并上调AngⅡ类型2受体(AT2)的mRNA表达,说明VEP的降压效果可能与对RAS系统的抑制作用相关,在高血压的预防和治疗中具有潜在的应用前景.