摩氏摩根菌ZJB-09203酯酶的分离纯化及性质

立体选择性水解2-羧乙基-3-氰基-5-甲基己酸乙酯(CNDE)是化学-酶法合成重大疾病治疗药物普瑞巴林的关键步骤。分离纯化了能够高效水解S-型CNDE的摩氏摩根菌ZJB-09203胞内酯水解酶,并进行酶学性质研究。采用硫酸铵分级沉淀、Phenyl Sepharose 6 FF疏水柱层析、DEAE Sephadex A-50阴离子交换和羟基磷灰石Bio-Scale CHT层析,纯化得到电泳纯的酯水解酶。SDS-PAGE和凝胶过滤HPLC分析确定该酶为单亚基蛋白,分子量为68 kDa。不同碳链长度p-硝基苯酚酯特异性酶解结果表明,该酶为酯酶,酶促合成普瑞巴林手性中间体(S)-2-羧乙基-3-氰基-5-甲基己酸的最适pH为9.0,最适温度为45℃,且在pH 7.0-9.0和40℃条件下具有良好的稳定性。Ca2+、Cu2+、Mn2+对酶活有一定的促进作用,Co2+、Fe3+、Ni2+及EDTA对酶活有较强的抑制作用。此外,考察了该酯酶水解p-硝基苯酚酯的动力学参数,及CNDE浓度对转化率的影响。首次报道了能够立体选择性水解CNDE的酯酶,相关酶学性质研究将为该酶催化合成普瑞巴林手性中间体的工业化应用提供重要依据。     

P 7IkZP i、EF Z- 1在胃癌中的表达及其相关性研究

目的：研究p27^kip1蛋白、转录因子E2F-1在胃癌中的表达及其与胃癌病理参数乏问的关系,并探讨二者相关性。方法：应用免疫组化S-P法,对90例胃癌患者的癌组织、34例癌旁正常胃黏膜进行检测,分析p27^kip1、E2F-1蛋白表达及其与胃癌病理参数之间的关系。结果：p27^kip1在正常胃组织、胃癌组织中的阳性率分别为55．9％（19／34）、31．1％（28／90）,二者差异有统计学意义（p〈0．05）。其阳性表达率与胃癌组织的浸润深度（p〈0．05）、组织学分型（p〈0．01）、分化程度（p〈0．01）、淋巴结转移（p〈0．05）均相关;E2F-1在正常胃组织、胃癌组织中的阳性率分别为17．6％（6／34）、36．7％（33／90）,二者差异有统计学意义（p〈0．05）,其阳性表达率与胃癌的组织学分型相关。而与胃癌的浸润深度（p〉0．05）、分化程度（p〉0．05）、淋巴结转移无关（p〉0．05）。结论：p27^kip1在胃癌组织中的表达明显低于在正常组织,相反,E2F-1蛋白在胃癌组织中的表达却明显增强;p27^kip1蛋白表达与胃癌的浸润深度、组织学分型、分化程度、淋巴结转移等病理参数相关;E2F-1表达与胃癌的组织学分型相关;p27^kip1、E2F-1在胃癌中的表迭呈负相关。     

乙型肝炎病毒4种基因型与干扰素治疗应答的关系

目的:在细胞水平上比较乙型肝炎病毒(HBV)基因型A,B,C,D对干扰素治疗的不同应答反应,进而探讨基因型对干扰素治疗效果的影响。方法:利用脂质体法将前期构建好的HBV基因型A,B,C,D质粒分别转染入Hep G2细胞系中,并在转染细胞上清中加入干扰素-α2a(IFN-α2a)。ELISA方法用来检测上清中HBV抗原,荧光定量PCR方法检测上清中HBV DNA,通过比较加药前后上清中HBV抗原和DNA水平的变化,反应HBV基因型对IFN-α2a的治疗反应。结果:HBV 4种基因型对IFN-α2a治疗的应答反应存在差异,其中A和B基因型对IFN-α2a的应答明显高于C和D基因型;而基因型A和B之间、以及基因型C和D之间对IFN-α2a的反应无统计学差异。结论:HBV基因型能影响干扰素的治疗效果,其中A和B基因型对IFN-α2a的治疗反应优于C和D基因型,在临床上应开展HBV基因分型检测,用以指导临床用药的选择。