澳洲坚果SCoT反应体系的建立及应用

为建立澳洲坚果(Macadamia spp.)的SCoT最适反应体系,用单因素设计方法对影响SCoT-PCR反应体系的主要影响因素进行了优化筛选,并构建了澳洲坚果种质的指纹图谱。结果表明,澳洲坚果的SCoT最适反应体系为:反应体系总体积为20μL,包含2.5 mmol L–1Mg2+,0.3 mmol L–1dNTPs,0.8μmol L–1引物,40 mg L–1模板DNA和1.0 U Taq DNA聚合酶。最适退火温度为50℃。该反应体系对澳洲坚果种质具有良好的稳定性、可靠性和较高的分辨率。选用多态性良好的单引物SC5和引物组合SC34+SC39,可以将12份澳洲坚果种质完全区分开,每份种质都各有独特的指纹图谱,置信概率达到99.988%。构建的SCoT反应体系可为澳洲坚果种质鉴定和遗传多样性分析等提供技术支持。