HIV-1 gp41的酵母表面展示及表达优化

以His标签检测蛋白的表达, 利用酿酒酵母表面展示系统, 成功地将HIV-1 gp41片段锚定在酵母表面, 并检测到gp41的活性。以pMD18T-gp41为模板, 通过PCR技术克隆了gp41基因, 将gp41基因通过双酶切连接到载体pICAS-His上,构建了gp41酵母表面展示载体, 并将其转化至酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)MT8-1中。重组菌经培养, 利用免疫荧光染色方法进行染色, 显微镜观察发现重组酵母细胞表面有绿色荧光, 流式细胞仪结果进一步证实gp41正确折叠展示于酵母细胞表面。采用不同浓度的葡萄糖培养基进行表达优化。当葡萄糖浓度为1%时, 82.46%的酵母细胞表达了gp41抗原; 随着葡萄糖浓度升高, 蛋白表达受到抑制。     

酵母表面展示-酶联免疫吸附测定法的建立

以表面展示人源蛋白酶体α亚基6蛋白的重组酵母细胞,结合酶联吸附免疫原理检测技术,以表面展示有人源蛋白酶体α亚基6(proteasome subunit alpha6,PSα6)的重组酵母细胞及其对应的单克隆抗体3D7D12D为研究对象,建立酵母酶联免疫吸附(yeast-ELISA)检测技术,应用于检测小鼠单克隆抗体及单抗效价.应用该方法最佳酵母浓度为0.50A600;测得单抗效价为1∶5×105,与常规ELISA效价接近;交叉试验和阻断试验表明该方法特异性强;同时该方法可用于检测抗血清.结果表明,yeast-ELISA可直接应用于检测单抗,测得效价与常规抗原包被间接ELISA具有良好一致性,特异性好,无交叉反应性.     

酵母表面展示脂肪酶合成己二酸二异辛酯

展示酶的酵母细胞既具有固定化酶的优点,又有制备简单、成本较低的特点.采用表面展示南极假丝酵母脂肪酶B (Candida antarctica lipase B,CALB)的毕赤酵母细胞催化合成己二酸二异辛酯(Diisooctyl adipate,DIOA),对该反应体系进行优化,并实现了初步工艺放大制备.经条件优化后,在10mL反应体系中,DIOA的产率可达85.0％.该工艺放大到200mL反应体系时,DIOA产率可达97.8％.经减压蒸馏,DIOA纯度可达到98.2％.该酵母表面展示脂肪酶在合成绿色润滑油己二酸二异辛酯中具有良好应用前景.     

嗜冷酶及其工业应用

生物圈中超过 80 %的地方温度低于5℃ ,在生态学上低温环境的影响范围更广。生活在这些低温环境中的嗜冷菌对低温有特殊的适应性。相对于嗜温菌而言 ,嗜冷微生物在低温条件下调节其膜流动性和膜通透性的能力更强 ,含有更多的不饱和脂肪酸和短链脂肪酸 ,还可通过合成冷激蛋白来响应冷激作用。嗜冷菌也可通过基因调控和自身的抗生素作用来适应低温。近来有研究报道 ,南北极严寒地区的海洋鱼类依靠血液中的抗冻蛋白来适应低温。生物体内的大多数生化反应都是由酶催化而成的 ,所以考虑嗜冷微生物的适应机制时首先应研究嗜冷酶的适冷机制。1 .嗜…     

维生素C的钠离子依赖性传输物质

维生素Ｃ是许多酶反应所必需的 ,它不仅能使补偿离子 (如Ｆｅ2 、Ｃｕ2 )保持还原状态[1,2 ] ,并且有助于清除自由基 ,以保护组织不被氧化而损伤[3 ] 。促进糖传输的葡萄糖输运体 (ｇｌｕｃｏｓｅｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ,ＧＬＵＴ)型传输物质能传输氧化型维生素Ｃ[4,5 ] ,但是该传输物质不允许在正常的葡萄糖浓度下吸收有效的生理剂量的维生素Ｃ ,这是因为维生素Ｃ在血浆中仅以还原型存在[6] 。Ｔｓｕｋａｇｕｃｈｉ等[7] 应用大鼠的ｃＤＮＡ文库分离并克隆表达得到两种新的维生素Ｃ传输物质 (ｓｏｄｉｕｍ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｖｉｔ…     

黑曲霉组成型表面展示南极假丝酵母脂肪酶B及其发酵调控

黑曲霉表面展示南极假丝酵母脂肪酶B(CALB)可有效应用于食品、化妆品、医药等行业。以黑曲霉Aspergillus niger SH-1为宿主细胞构建诱导型糖化酶基因启动子表面展示CALB,在较高浓度葡萄糖碳源的发酵中CALB表达会受到抑制,发酵后期菌体容易出现菌丝断裂和展示酶活力下降等问题。采用组成型3-磷酸甘油醛脱氢酶基因启动子替代诱导型糖化酶基因启动子的细胞表面展示CALB黑曲霉菌株可有效解决上述问题,该菌株不但可以利用葡萄糖,而且还能利用木糖为发酵碳源,以木糖为碳源发酵在144 h展示酶水平达到1 100.28 U/g。文中探讨了甘蔗渣水解液发酵生产黑曲霉表面展示CALB,初步达到预期的结果,为甘蔗渣的综合利用提供了新途径。     

双氧水在皮肤软组织缺损VSD冲洗中的应用及护理

目的观察双氧水在皮肤软组织缺损负压封闭引流技术(VSD)冲洗中的效果。方法将114例采用VSD治疗的皮肤软组织缺损患者随机分为观察组和对照组各57例。观察组应用生理盐水+双氧水间断冲洗创面,对照组应用生理盐水持续冲洗创面,观察两组创面感染、VSD管堵塞、生长不良肉芽组织的发生情况。结果生理盐水+双氧水间断冲洗创面法在观察指标上均优于生理盐水持续冲洗创面法,差异有统计学意义(P0.05)。结论 VSD治疗皮肤软组织缺损创面时应用生理盐水+双氧水间断冲洗创面,在预防感染、VSD引流不畅及创面肉芽生长方面具有良好效果,但同时要相应的高质量护理。     

极端酶及其工业应用

无论是从极端环境中筛选天然极端酶,还是由蛋白质工程构建的突变酶,或者是交联酶晶体,都可以提高酶夺环境的抵卸能力及其稳定性,从而使酶在工业上的应用有了突破性的进展。     

高静压对枯草杆菌芽孢灭活作用的研究

采用高静压协同中温的方法,研究了连续式施压(continuous pressurization)和间歇式施压(intermittent pressurization)两种不同方式对枯草杆菌芽孢的灭活作用.实验设计了分阶段施压方式,即先低压200 MPa/5 min,再高压500 MPa/5 min,循环1～3次.结果表明,同200 MPa～500MPa连续施压30 min相比,间歇施压更有效地杀灭芽孢,并缩短了处理时间.经扫描电镜观察,芽孢外壳出现凹陷、皱褶等形态变化,这种间歇式的施压产生强烈的机械剪切力,造成芽孢损伤,及内容物的泄漏,甚至死亡.