一种基于多种微生物的急性毒性测定方法

以广东省微生物研究所环境微生物专业菌种库中 25 个不同种属的菌株为材料, 根据菌株与有毒化合物反应的剂量效应关系、系统发育多样性以及对 2, 3, 5-三苯基四氮唑(TTC)响应稳定性的原则筛选了 10 株细菌和 1 株酵母菌作为受试菌。结合 96 孔板建立了一种稳定、灵敏的检测环境污染物急性毒性的微生物新方法, 该方法被命名为多种微生物平板毒性测试法 (Multispecies Plate for Toxicity testing, MTOXPlate)。 MTOXPlate 基于 11 个菌株菌体内脱氢酶活性, 活性大小 TTC 作为细胞活性指示, 污染物毒性由脱氢酶抑制率决定。新方法的最佳接种密度(OD600)是 1.0 稀释100 倍, 最佳指示剂 TTC 浓度为 0.1%, 最佳响应时间是 18 h, 稳定性较好, 重现性相对标准偏差 RSD <1%。用本方法测试了 7 种化合物的急性毒性, 并与 Microbial Assay for Risk Assessment(MARA)方法作了比较。结果显示: 新方法 MTOXPlate与 MARA 有非常高的相关性(r=0.978, P<0.05), 灵敏度略高于 MARA 方法。     

基于多种微生物的毒性检测MTOXPlate冻干板制备及优化

[目的]制备基于多种微生物的生物毒性检测MTOXPlate冻干板,从而简化操作程序,使其能更灵敏、方便、快速地进行生物毒性测试.[方法]采用真空冷冻干燥法将指示微生物固定在微孔板中.以存活率为指标,利用荧光分光光度法确定冻干保护剂的组成.通过分析毒性响应灵敏度对检测条件进行优化.[结果]MTOXPlate的冻干保护剂组成为8％海藻糖、2％葡萄糖、2％甘露醇、1％谷氨酸钠.在此组成下,11株菌株的平均存活率最高,可达89.41％.复活介质与测试样品同时加入,在缩短了测试时间的同时也提高了检测灵敏度.该冻干板具有良好的灵敏度和重现性,能较好地满足污染物生物毒性测试的需要.[结论]MTOXPlate冻干板可作为一种新型的生物毒性测试技术,在生态毒理检测领域推广应用.