草履虫活体观察——体积定量法的进一步完善

尾草履虫Paramecium caudatun,属于原生动物纤毛纲,一直是动物学实验中不可缺少的实验材料.由于虫体游动快速,给活体观察实验带来了困难.近年来有一些关于草履虫观察方法的报导(黄丽清,2000;龚军辉,2003;吴美仙,2003;马惠钦等,2006;杨丽红,魏开,2007),但是这些方法仍具有一定的局限性.本研究室在前人工作的基础上,总结并报告了活体观察草履虫的一套方法,包括体积定量法、矿物油封闭法和脱纤毛法(杨仙玉等,2008).体积定量法中,使用了22×22 mm2规格的盖玻片,观察效果良好.但是利用体积定量法对草履虫进行观察时,使用不同规格的盖玻片所需草履虫培养液的体积不同.本文针对4种规格的盖玻片,对所需最适草履虫培养液的体积进行了研究,扩充了体积定量法,为观察活体草履虫带来了更大的方便.     

大鼠肝脏半乳糖凝聚素-3 cDNA分子多样性分析

半乳糖凝聚素-3(Galectin-3,Gal-3)是一种多功能蛋白,参与机体内的多种生命活动过程。为分析大鼠Rattus norvegicus gal-3 c DNA分子多样性,在分析Gen Bank注册的大鼠gal-3 c DNA序列的同时,从三只不同大鼠个体的肝脏第一链c DNA,共计9个独立实验中克隆gal-3开放阅读框OFR(Open reading frame)。分析结果表明,在已注册的序列中存在1个单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)。本实验从1-3号大鼠肝脏分别获得118、95和120个克隆,新发现1处缺失和5处SNP,共克隆17个不同的gal-3 ORF,其中仅1个克隆与已报告大鼠gal-3 c DNA的ORF完全相同。从1号和3号个体肝脏中分别克隆11和14个不同的gal-3 ORF,揭示大鼠gal-3 c DNA存在个体水平的分子多样性。     

第四双小核草履虫减数分裂产物的退化特征分析

通过吖啶橙和Hoechst 33342两种活体荧光染料双染的方法对第四双小核草履虫(Paramecium tetraurelia)接合生殖过程中小核减数分裂产物进行观察,结果发现位于口旁锥外的小核分裂产物呈蓝绿色或黄绿色,表明它们以凋亡的方式发生退化.     

浙江农林大学动物学科杨仙玉课题组简介

浙江农林大学动物学科杨仙玉课题组目前主要从事纤毛虫发育学和蟾酥多肽类有效成分基因克隆两方面研究:以尾草履虫(Paramecium caudatum)为模式生物,重点研究核发育的详细过程,并借助分子生物学技术手段探讨其调控机制;已开展对蟾蜍皮肤cDNA质粒文库的筛选工作,克隆到多个与癌症的发     

不同染色方法揭示纤毛原生动物草履虫接合生殖过程的新细节

通过石炭酸品红、Hoechst 33342、蛋白银及免疫荧光标记等染色方法对草履虫接合生殖过程进行了重新观察,结果发现:1)新月核是第一次减数分裂前期小核的主要形态学特征,在核内有一未被石炭酸品红、Hoechst 33342着色区域,蛋白银染色则清楚显示该结构;2)4个单倍体减数分裂产物中的1个核进入口旁锥完成配前第三次核分裂,其余3核退化.蛋白银染色和抗α微管蛋白单克隆抗体进行免疫荧光标记显示,核进入口旁锥的时期在第二次减数分裂末期而非减数分裂结束后;3)配前第三次分裂末期,核间连丝的中间段有一被蛋白银识别的结构,但免疫荧光标记却无显示,只表现为纤维状结构与两侧核间连丝相连.观察结果为草履虫接合生殖过程中相关分子生物学机制研究奠定了必要的形态学基础.     

超声波处理提高磁性微小铁葡聚糖颗粒的产量及对纤毛虫细胞的应用

共沉淀法是制备磁性微小铁葡聚糖颗粒的常用方法之一,其简单、易操作,但是温度、pH、氨水滴加速度等多种因素影响粒径的大小,而且很多颗粒聚集成束,因而微小铁葡聚糖颗粒的回收量低。为提高微小铁葡聚糖颗粒的回收量,对反应初产物离心后的沉淀部分进行了超声波处理,使回收量由处理前的0.5g提高到处理后的10g以上。利用回收的微小铁葡聚糖颗粒进行纤毛虫接合对分离,接合率高达95%以上。     

杭州西湖浮游藻类变化规律与水质的关系

于2006～2007年对杭州西湖浮游藻类的种类及个体丰度进行初步研究,并依据<水和废水监测分析方法>对其水质现状进行了生物学评价.综合生物和理化指标数据,对杭州西湖的水质作一总体评估,并对西湖水中的物种多样性保护及水质的可持续利用提出了建议.共鉴定浮游藻类179种,其中蓝藻25种,隐藻1种,金藻3种,甲藻3种,黄藻5种,裸藻23种,硅藻41种和绿藻78种.分析了杭州西湖浮游藻类的组成和分布的特点,揭示出西湖浮游藻类的种类组成与西湖水质变化之间的关系.结果表明:藻类的组成和分布与水质变化规律基本吻合,西湖水质较整治前有明显的改善,一些清水藻类的物种逐步增多.     

日本蟾蜍聚集素cDNA的克隆与序列分析

为研究蟾酥、蟾衣、蟾皮中多肽类有效成分,通过菌落PCR对日本蟾蜍(Bufo japonicus formosus)皮肤cDNA质粒文库进行了筛选,获得了聚集素(clusterin,CLU)全长cDNA序列(GenBank登录号为JX035891)并对其进行了生物信息学分析。日本蟾蜍clucDNA全长为1 616 bp,包括1 332 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF)、5’端30 bp及3’端254 bp的非翻译区(untranslated region,UTR)。根据cDNA序列推导的日本蟾蜍CLU前体蛋白由443个氨基酸残基组成,其中含20个氨基酸残基组成的信号肽,6个糖基化位点,10个可形成二硫键的半胱氨酸残基和2个卷曲螺旋区域。氨基酸序列同源性分析显示,日本蟾蜍CLU与非洲爪蟾(Xenopus laevis)的同源性为65%,与其他7种动物的同源性则介于41%-48%之间。     

冬季清凉峰山区小麂和野猪的生境选择及差异

从2005年11月5日至2006年1月21日,为了评估小麂和野猪的生境选择及其差异,我们在浙江清凉峰国家级自然保护区核心区共设置了248个样方群。研究发现,两者都选择平缓坡的灌丛植被、草本密度小、离住宅较近和离隐蔽物距离适中的生境,表现了它们的生境选择有一定的重叠性。但是它们也表现出生境选择的一些差异,小麂选择乔木密度适中、灌丛密度大和郁闭度适中的生境,而野猪选择乔木密度小的生境,随机地使用各类灌丛密度和郁闭度的生境。小麂还选择北坡、离水源距离较远的生境,野猪只是随机地使用不同的坡向和离水源距离的生境。分析两者共存的机制,我们发现小麂采取隐藏策略而野猪采取逃跑策略来避敌和利用资源,即它们之间存在与反捕食策略相关的生境选择差异。     

利用铁葡聚糖分离纤毛虫接合对的方法

介绍一种制备微小铁葡聚糖颗粒以及利用微小铁葡聚糖颗粒分离纤毛虫接合对的方法,通过本方法可以获得接合率达95%以上,且发育基本同步的实验材料。