简单、快速、高效扩增和标记目的基因技术的研究

从固体平板挑取转化带有目的基因的单菌落 ,用特异引物通过聚合酶链式反应可直接扩增和标记目的基因 ,不需经过菌的液体培养、质粒提取和酶解反应等复杂过程 ,能快速获得目的基因扩增产物和进行目的基因探针的标记。     

四种草本花卉的染色体核型分析北大核心CSCD

采用常规制片方法对4种草本花卉的染色体数目、核型等进行了研究。结果分别为石竹(Diranthus chinensis)染色体数2n=14,核型公式为K(2n)=14=12 m+2 sm,其核型为"1A";裂叶花葵(Lavatera trimestrisLinn.)染色体数2n=14,核型公式为K(2n)=14=6 m+8 sm,核型为"2A";观赏椒(Capsicum frutescans)染色体数2n=24,核型公式K(2n)=24=24 m,核型为"1B";凤仙(Impatiens balsamina)染色体数2n=14,核型公式为K(2n)=2x=14=10 m+4 sm,核型为"1B"。此4种植物的染色体核型均为首次报道,可为花卉的良种选育和分类提供必不可少的依据。     

Ri质粒介导的几丁质酶基因转化小麦的研究

采用L₉（3⁴）的正交试验,以带有pMLH7133-Chi质粒的发根农杆菌为介导,对栽培品种春小麦东农7742、龙麦9814和Hite的幼胚愈伤组织进行了遗传转化研究。结果表明：基因型为东农7742、菌液浓度OD₆₀₀=0.8、共培养时间2 d、乙酰丁香酮（As）浓度为100 μm是最佳的试验组合;各影响因素的主次顺序是：基因型＞乙酰丁香酮的浓度＞菌液浓度＞共培养时间。共获得138株Hyg抗性植株,经PCR及PCR-Southern检测初步证明,外源几丁质酶基因已整合到其中5株的基因组中,又对3株阳性植株进行了RT-PCR扩增和几丁质酶活力测定,证明外源几丁质酶基因已在小麦基因组中稳定表达。     

发根农杆菌介导几丁质酶基因和β-1,3-葡聚糖酶基因转化烟草的研究

用冻融法和三亲交配法将具有几丁质酶基因、β—1,3—葡聚糖酶基因和卡那霉素抗性标记基因的质牲pBLGC导入具有Ri质粒的发根农杆菌中。用叶盘法转化烟草的三个品种,经Kan抗性筛选获得126株再生植株,对119株再生植株分别以启动子CaMV35S、几丁质酶基因和β—1,3—葡聚糖酶基因的引物进行PCR检测,其中几丁质酶基因至阳性的植株有72株,β—1,3—葡聚糖酶基因至阳性的有47株,具有几丁质酶基因和β—1,3—葡聚糖酶基因的植株有36株。对转化的24株转基因经PCR-Southern杂交,结果均至阳性。实验结果表明,外源基因的转化频率与植物品种、外源基因片段的大小有关,几丁质酶基因和β—1,3—葡聚糖酶基因分别或共同整合到植物基因组中。     

影响小麦成熟胚培养及植株再生因素的研究

对3个不同栽培品种小麦的成熟胚进行离体培养,研究影响小麦愈伤组织诱导和植株再生的一些因素。结果表明,东农7742的苗分化率明显高于龙麦9814和龙麦26;高浓度的玉米素可明显提高芽的分化率;附加低浓度NAA的1/2 MS培养基可有效促进生根。可见,基因型对小麦愈伤组织的分化有很大的影响,附加一定的外源激素有利于提高植株的再生频率。     

转几丁质酶基因的小麦后代遗传分析和抗病性鉴定

转Chi基因小麦的T1、T2及T3代植株的遗传分析、抗白粉病鉴定和考察外源基因影响植株农艺性状的结果表明,T1和T2代中外源Chi基因的分离比均接近3：1,符合孟德尔遗传规律,Southern blot检测外源基因均为单拷贝整合。导入Chi基因的小麦对白粉病田间混合菌种的抵抗能力增强。除了株高和生育期以外,转基因植株的其他性状与未转基因的植株基本上相同。     

拟南芥CBF2基因的抗旱性研究

以拟南芥为材料,根据已报道的序列设计引物克隆了CBF2基因及rd29A基因启动子,并构建了植物表达载体pBI-rd-cbf,用以转化烟草。转基因烟草的Northern杂交检测显示,30%PEG诱导条件下CBF2基因在诱导30 min之后持续较高的表达水平,且表达水平受胁迫诱导程度的影响。抗旱生理指标测定显示,干旱条件下转基因烟草植株的脯氨酸含量迅速增高,远超于野生型;而丙二醛含量的增长幅度要比野生型植株小很多,且随着胁迫时间的延长,转基因植株体内的丙二醛含量逐步趋于稳定。试验证明,CBF2基因在提高农作物的抗旱性方面具有极大的利用价值。     

快速克隆DNA大片段的方法

文章采用菌落PCR的技术,快速扩增发根农杆菌Ri质粒rol（包括rolA、rolB、rolC）基因的DNA片段并用于测序分析。克服了由于Ri质粒过大,提取困难等问题。     

影响大白菜高效离体培养再生的因素

大白菜的4日龄子叶和6日龄下胚轴外植体在MS 4～6 mg*L-1 6-BA 0.5 mg*L-1 NAA 5～10 mg*L-1 AgNO3培养基上3～4周后分化出不定芽,带柄子叶和子叶圆片最高再生频率均可达到80%～90%,下胚轴再生频率为40%～55%,在1/2MS 0.2 mg*L-1 IBA培养基上100%生根,据此建立了大白菜离体培养再生系统.