肠三叶因子在大肠杆菌中的表达、纯化及其抗体制备

目的:获得肠三叶因子(ITF)的原核表达产物及抗rITF抗体,为深入研究ITF的作用机制及其受体研究奠定基础。方法:常规提取人小肠组织总RNA,用RT-PCR获得ITF编码基因片段,克隆至质粒pET32a获得原核表达栽体,双酶切和测序后转化至Origami B(DE3)用IPTG诱导表达,优化条件获得最大表达产量;用SDS-PAGE、Western blot鉴定表达产物,亲和层析纯化获得的重组蛋白rITF皮下多点注射家兔,制备多克隆抗体,并用此抗体进行大鼠肠组织免疫组化研究。结果:测序证实PCR扩增获得ITF全长基因序列与基因文库中的完全一致,将该基因片段正确插入表达载体pET32a中、优化表达条件后,重组蛋白的表达量达到50mg/L;Western blot证明重组蛋白具有良好的抗原性和特异性;通过Ni-NTA亲和层析、超滤离心后,得到90%纯度的蛋白;收集兔血清,纯化后获得特异性良好的ITF抗体,免疫组化染色肠组织显示ITF表达的部位定位于杯状细胞。结论:成功构建了表达载体pET32a-ITF,在大肠杆菌中表达并纯化获得纯度较高的rITF,并获得了生物活性较高的ITF抗体,ITF主要在肠道杯状细胞分泌表达。     

肠三叶因子表达载体构建及在酵母菌GS115中的表达

目的:构建肠三叶因子(ITF)的真核表达载体,并在酵母菌GS115中表达,为进一步研究ITF的生理和药理功能奠定基础。方法:通过RT-PCR获得ITF cDNA片断,将目的基因插入pPICZαA酵母表达载体,得到重组载体pPICZαA-ITF。经BspHI线性化后氯化锂转化进入GS115,Zeocin筛选转化酵母菌,PCR鉴定目的基因。阳性转化子经摇瓶表达,取上清TCA沉淀后做Tricine SDS-PAGE分析及Western blot检测表达蛋白。结果:经测序及PCR证实ITF cDNA准确插入酵母表达载体pPICZαA中。Tricille SDS-PAGE分析证明ITF的分子量约为14×10~3,表达蛋白具有良好的抗原性和特异性。结论:成功构建了真核表达载体pPICZαA-ITF,在酵母菌GS115中表达,获得重组ITF蛋白。     

杉木叶形态特征与叶面积估算模型

植物叶片是碳水交换和能量平衡过程最重要的场所,是农林生产经营中的模型估算以及物种结构变异-功能适应机制分析的关键参考量。采用游标卡尺和手持叶面积仪,测量杉木(Cunninghamia lanceolata)单叶叶长(LL)、最大叶宽(LW_(max))、最大叶厚(LT_(max))3个直测指标,和叶面积(LA)、平均叶宽(LW_(mean))、平均叶厚(LT_(mean))、叶延长率(LE)和叶周长(LP)5个间接转算指标。分析8个形态学指标的统计分布及其相关性,用多变量线性回归模型和非线性回归指数模型对7个形态学指标和杉木单叶叶面积进行拟合,结果表明:杉木单叶面积大部分值(95%CI)分布在0.758—0.836 cm~2,其叶面积的变异程度最大(CV=0.513),叶长、叶宽与叶面积相关性达到极显著(r=0.896,0.682)。拟合LA的多元线性模型为:Y=-0.388+0.165X_1-0.023X_2+1.453X_3(R~2=0.981,SE=0.053),X_1—X_3分别为LP、LE、LW_(mean)。从简便性上考虑,LL的单变量指数模型适合对LA进行估算:LA=0.1×(1+LL)~(1.398)(R~2=0.77,!~2=0.39)。研究结果为准确估测其他叶片功能性状指标提供了方法,为杉木叶面积估算模型提供了基础数据。     

大鼠胃肌间神经丛中NOS阳性神经元的组织化学研究

采用ＮＡＤＰＨ┐黄递酶（ＮＤＰ）组织化学技术在整装铺片上对大鼠胃肌间神经丛中一氧化氮合酶（ＮＯＳ）阳性神经元进行定量和定位研究。结果显示：大鼠胃肌间神经丛中ＮＯＳ阳性神经元密度（个／ｍｍ２）分别为：６２．１±３７．７（幽门部）、４３．４±３１．７（胃体）、３１．６±２７．８（胃底）。胃底部神经节内神经元数量较少,神经元胞体较大,染色较深;幽门部神经节内神经元数量较多,胞体大小不等,染色深浅不一;胃体部的则介于两者之间,呈过渡态。结果表明：胃各部肌间神经丛中ＮＯＳ阳性神经元的差异可能与胃的生理功能密切相关     

四川地区孕妇产后子宫内膜炎主要致病菌的检测及其耐药性分析

大肠杆菌(Escherichia coli)、化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes,Arcanobacterium pyogenes)和坏死梭杆菌(Fusobacterium necrophorum)是与子宫内膜病变相关的主要病原体。本研究使用聚合酶链式反应(PCR)直接鉴定四川地区139例孕妇宫颈分泌物中的病原体,而不进行细菌培养。此外,对上述3种病原体的耐药性进行了考察。结果显示,第1次生产后检查发现子宫内膜炎的发生率(35.25%)高于第2次生产后检查(15.53%)。在6个样品中检测到大肠杆菌,在11个样品中检测到化脓隐秘杆菌,并在10个样品中检测到坏死梭杆菌。在第1次检查中,化脓隐秘杆菌和坏死梭杆菌的子宫污染感染高于第2次检查。药敏实验结果显示,大肠杆菌、化脓隐秘杆菌和坏死梭杆菌分别对9种、6种和7种药物产生耐药性。总之,本研究建立了用于诊断孕妇产后子宫内膜炎的3种主要病原体的标准PCR,该方法更简单、成本低和快捷,且对主要细菌检测具有较高的灵敏度。此外,大肠杆菌的耐药性高于另外2个菌种。     

三叶肽家族研究进展

三叶肽是一类由一个或多个“三叶形结构”组成的具有抵卸蛋白酶水解作用的小分子多肽物质。其分子结构中都有一至数段由38－39个氨基酸组成的特定区域,其中的6个半胱氨酸按1－5,2－4和3－6的顺序以二硫键的形式两两相接。三叶形结构的稳定性使三叶肽能在消化道复杂的内环境中保持其生物活性。三叶肽的表达可胃肠道中粘液糖蛋白的合成密切相关,目前已知哺乳动物体内的3类三叶肽都是由胃肠道粘液分泌细胞合成的。而三叶肽在胃肠道炎症周围组织的异位表达使其在保护胃肠粘膜,促进粘膜修复中起重要作用。     

巨大芽孢杆菌对伴矿景天修复镉污染农田土壤的强化作用

伴矿景天(Sedum plumbizincicola)是一种Cd/Zn超积累植物,常用于Cd污染土壤的植物修复。巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)是一种溶磷型细菌,既可以促进植物生长,也可以提高土壤重金属生物有效性,对重金属污染土壤植物修复具有强化作用。本研究采用盆栽试验方法,分析了巨大芽孢杆菌不同接种量(10～60 mL)对伴矿景天修复Cd污染农田土壤效率的影响。结果表明: 在Cd污染农田土壤中接种巨大芽孢杆菌可以提高土壤中Cd的活性,土壤有效态Cd含量较对照(CK)增加15.0%～45.0%。与CK相比,巨大芽孢杆菌提高了伴矿景天地上和地下部的生物量,增幅分别为8.7%～66.7%和13.6%～81.8%,并显著增加了伴矿景天地上部的Cd含量,增幅在29.2%～60.4%。在种植伴矿景天并接种巨大芽孢杆菌条件下,土壤Cd去除率在26.7%～42.9%。这说明接种巨大芽孢杆菌可以促进伴矿景天的生长,增加其Cd含量,从而提高Cd污染农田土壤的修复效率。     

人三叶因子1大肠杆菌及毕赤酵母表达载体的构建与鉴定

目的:构建人三叶因子1(hTFF1)的大肠杆菌及毕赤酵母表达载体。方法:从人胃窦部提取总RNA,经RT-PCR得到hTFF1 cDNA,用PCR方法扩增hTFF1基因,并将其分别克隆到大肠杆菌的表达载体pET32α及毕赤酵母的表达载体pCAPZαA中,构建原核及真核重组表达质粒pET32α-hTFF1和pGAPZαA-hTFF1。结果:通过双酶切和基因序列分析确定插入pET32α和pGAPZαA中的片段为hTFF1基因片段。结论:重组质粒pET32α-hTFF1和pGAPZαA-hTFF1成功构建,为在比较原核和真核细胞中hTFF1高效表达的情况及下一步的功能研究奠定了基础。     

基于叶干质量比的杉木比叶面积估算模型的构建

随着叶片功能性状研究的不断深入,通过简单易测量的叶片指标,同时探究植物生活史权衡对策和估算林分生产力的研究需求日益增长,例如叶干质量比(LDMC)和比叶面积(SLA)的相互转换。杉木(Cunninghamia lanceolata)是亚热带重要的常绿针叶树种,基于LDMC对杉木SLA进行估算,能够为核算SLA提供途径,为机理解释和生产估算构建连接途径,为小区域到大尺度、精算到估算搭建桥梁。该研究在湖南会同和河南信阳两个杉木生长区,对处于不同小生境(坡向、坡位和冠层深度)以及不同生活史(林龄和叶龄)的叶片进行抽样和采集,通过测得不同叶龄的单叶LDMC和SLA,初步探究在不同因子下两个性状值的分布差异,进一步基于LDMC构建SLA估算模型并讨论以叶龄为差分因子对模型的影响。结果表明:1)杉木SLA平均值为(103.15±69.54)cm~2·g~(–1),LDMC为0.39±0.11;2)杉木LDMC和SLA可用非线性模型进行估算,模型符合估算要求;3)其中一年生叶的拟合效果最好,老叶(大于二年生叶)的拟合优度较低,老叶较低的SLA(52.28–75.74 cm~2·g~(–1))可能暗示LDMC的变化保持相对独立性。该研究基于杉木LDMC的SLA估算模型可信且有效,且不同叶龄对LDMC和SLA的影响可能预示着杉木叶片的响应敏感性和生活史权衡策略。     

太空诱变对金钗石斛光合特性和生长的影响

为了解太空诱变对金钗石斛(Dendrobium nobile)生长发育的影响,对太空诱变和野生金钗石斛的叶片结构、光合特性和生长指标进行了比较研究。结果表明,太空诱变后的金钗石斛叶片较厚,叶气孔密度大、气孔器长轴和短轴长度均变长。两种金钗石斛的光合速率日变化趋势相似,均为双峰型曲线,但太空诱变的净光合速率低于野生的。太空诱变和野生金钗石斛最大净光合速率分别为4.6和6.8μmol m~(–2)s~(–1),光补偿点分别为18.3和12.6μmol m~(–2)s~(–1),光饱和点分别为1180和720μmol m~(–2)s~(–1)。太空诱变和野生金钗石斛的CO_2补偿点分别为100和102μmol mol(–1),CO_2饱和点分别为2215和2090μmol mol(–1)。太空诱变的金钗石斛单茎鲜重和干重均低于野生种,但由于其分蘖数增加,每盆的总生物量反而增加;太空诱变的金钗石斛生物碱和石斛多糖含量显著高于野生种。因此,太空诱变为金钗石斛育种和品质改良提供了新途径。