幽门螺杆菌致病岛CagL重组抗原的可溶性表达及其多克隆抗体的制备和分析*

目的:利用原核表达和蛋白质纯化技术获得高纯度的幽门螺杆菌致病岛CagL重组抗原(rCagL),利用其制备anti-CagL多克隆抗体,并分析抗体的特异性。方法:通过生物信息学软件分析rCagL的抗原结构;利用PCR长片段DNA合成技术合成不含有信号肽序列的幽门螺杆菌致病岛CagL基因,将其插入表达质粒pCzn1中,构建重组质粒pCzn1-rCagL。然后,将pCzn1-rCagL转入大肠杆菌Arctic Express中,经IPTG诱导表达后,通过Ni-IDA镍离子亲和层析纯化重组抗原rCagL,利用Western blot鉴定rCagL与His标签抗体和Anti-H. pylori抗体的免疫反应性;最后,通过rCagL辅以弗氏佐剂免疫BALB/c小鼠,制备anti-CagL多克隆抗血清,通过ELISA方法分析抗血清的特异性。结果:生物信息学软件表明重组抗原rCagL具有较好的抗原性质;重组质粒pCzn1-rCagL经双酶切和基因测序等技术鉴定,证实rCagL核苷酸序列与理论序列完全一致;基因工程菌株pCzn1-rCagL/Arctic Express在低温11℃条件经IPTG诱导表达。 SDS-PAGE实验结果证实:rCagL可实现相对高效地可溶性蛋白表达,可溶性蛋白约占包涵体的62.07%。经Ni-IDA亲和层析柱纯化,可获得高纯度rCagL,纯度约为96.6%。Western blot结果证实:重组抗原rCagL可特异性与His标签抗体和Anti-H. pylori抗体结合。ELISA结果证实:经rCagL免疫小鼠制备的多克隆抗体anti-CagL可特异性识别rCagL和H. pylori裂解物,具有较高的抗体特异性。结论:重组抗原rCagL在低温条件下可实现可溶性表达,经纯化可获得高纯度抗原蛋白;rCagL具有较好的抗原性,制备的多克隆抗体具有较好的免疫特异性,为发展H. pylori相关诊断试剂奠定了实验基础。     

4-羟基异亮氨酸的研究进展

4-羟基异亮氨酸是一种新型胰岛素分泌促进剂,可用于治疗Ⅱ型糖尿病。本文综述了近年来4羟基异亮氨酸的研究进展,包括它的存在形式、活性、提取分离方法和4羟基异亮氨酸及内酯的部分立体异构体的合成方法。     

钮子瓜化学成分研究

从民间药物钮子瓜全草95%乙醇提取物中首次分离得到14个化合物,应用波谱方法及与已知品对照的手段鉴定它们为(2S,3S,4R,10E)2[(2R)2-羟基二十四烷酰氨基]10十八烷-1,3,4-三醇(1)、(2S,3S,4R)2-二十四烷酰胺基十八烷-1,3,4-三醇(2)、胡萝卜苷(3)、swertish(4)、苯甲酸(5)、水杨酸(6)、loliolide(7)、胸腺嘧啶(8)、尿嘧啶(9)、(23Z)-9,19-环阿尔廷-23-烯-3β,25-二醇(10)、(20S,22E,24R)5α,8α-表二氧麦角甾6,22二烯3β醇(11)、十六烷酸1甘油酯(12)、大豆脑苷Ⅰ(13)、(22E,24S)24甲基5α胆甾7,22二烯3β,5α,6β三醇(14)。     

采用磁微粒分离酶联免疫法构建基于KGN细胞的雌激素生物合成筛选模型

雌激素在机体生长发育中发挥着重要作用,其合成代谢紊乱会导致乳腺癌和骨质疏松等疾病发生.目前,基于细胞的雌激素合成筛选模型需用到放射性底物,对环境污染大,成本较高,限制了具有组织特异性调控雌激素合成的药物筛选.我们以高表达芳香化酶的KGN细胞为检测对象,比较基于聚苯乙烯酶联免疫法和磁微粒分离酶联免疫法的雌二醇ELISA试剂盒的交叉反应和灵敏度,发现相对于聚苯乙烯酶联免疫法,磁微粒分离酶联免疫法能够稳定高效的检测雌激素合成.进一步比较培养基中酚红和底物睾酮对雌二醇检测的影响,成功建立通过磁微粒酶联免疫法检测KGN细胞雌二醇合成的筛选模型.     

加替沙星注射液无菌检查方法的验证

目的:建立加替沙星注射液无菌检查方法。方法:根据《中国药典》2010年版二部附录XIH无菌检查法验证试验指导原则,采用薄膜过滤法和添加硫酸锰中和剂去除加替沙星抑菌活性的实验方法和条件进行了验证,建立了加替沙星注射液无菌检查的方法。结果:采用薄膜过滤法用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液进行冲洗,每桶5×100mL的冲洗量,每桶(100mL)培养基中加入硫酸锰溶液可去除加替沙星对各菌株的抑菌作用。结论:加替沙星注射液的无菌检查可采用上述方法。     

中药金樱子的化学成分

从中药金樱子（Rosa laevigata Michx.）的果实是分离到7个化合物,经理化性质和波谱分析分别确定为β－谷甾醇（1）、胡萝卜甙（2）、乌苏酸（3）、2α,3β,19α,23－四羟基乌苏－12－烯－28酸（4）,2α,3β,19α,23－四羟基乌苏－12－烯－28酸28－O-β-D-吡喃葡萄糖苷（5）,2α,3β,19α,23－三羟基乌苏－12－烯－28酸（6）和4',5,7－三羟黄酮醇－3－O－β-D-（6”－O－（E）－p－羟基苯丙烯酰）吡喃葡萄糖苷（7）,其中化合物4、5、7为首次从金樱子果实中分离得到。     

马蹄荷化学成分研究

从马蹄荷(Exbucklandia populnea R.W.Br.)茎皮中首次分离得到6个化合物,通过波谱分析鉴定为β-谷甾醇(I)、胡萝卜甙(Ⅱ)、樱桃甙(Ⅲ)、芒花甙(Ⅳ)、圣草酚(V)和白藜芦醇(Ⅵ)。     

红花绿绒蒿的非生物碱成分

本文对红花绿绒蒿的非生物碱成分进行了研究。分离并用波谱法鉴定了的其中6个成分为:21α-羟基熊果酸(1),肉豆蔻酸2,3-二羟基丙酯(2),豆甾醇(3),β-香树精(4),熊果酸(5)及胡萝卜甙(6)。     

圆萼刺参的化学成分研究

自圆萼刺参[Morina chinesis(Botal.ex Diels]的乙醇提取物中分离到8个化合物。经波谱分析及TLC对照鉴定为新化合物4-O-α-D-呋喃阿洛酮糖-α-D-吡喃葡萄糖(1)和已知化合物芦丁(2),积雪草酸(3),胡萝卜甙(4),芥子醇(5),6α,23-二羟基熊果酸(6),熊果酸(7)及葡萄糖(8)。     

冬青叶兔唇花地上部分非极性成分的GC-MS分析

兔唇花属植物具有良好的止血活性,该属植物的化学成分研究也比较深入,但未见对冬青叶兔唇花化学成分的报道。为明确冬青叶兔唇花的化学成分,我们首次对其地上部分的非极性成分进行了GC-MS分析,并利用峰面积归一化法确定各成分的相对含量。从冬青叶兔唇花地上部分的非极性成分中,我们分离、鉴定了52种成分,占非极性成分总量的92.61%,主要包括脂肪酸酯、长链烷烃、单萜、倍半萜、甾体及芳香化合物等。本研究为兔唇花属植物资源的合理开发利用奠定了基础。