CRISPR/Cas9编辑雪兔Corin基因载体的构建

[目的]通过CRISPR/Cas9系统构建雪兔Corin基因编辑载体。[方法]通过在线CRISPR设计工具设计2个靶点,退火制备sgRNA双链,用BbsⅠ酶得到线性p X330载体后,经重组酶连接得到重组质粒。将重组质粒转化到DH5α感受态细胞,再对其进行PCR鉴定及测序比对分析。[结果]通过特异性扩增以及测序结果表明sgRNA准确地连入载体,插入序列无突变,与预期序列高度一致,重组子阳性率为100%。[结论]成功构建了雪兔Corin基因敲除载体,为进一步利用CRISPR/Cas9技术进行雪兔Corin基因编辑工作提供了研究基础。     

山羊KAP6-1.2基因的克隆表达及分析

目的：研究角蛋白关联蛋白KAP6-1.2对不同品种羊绒和羊毛在核苷酸和氨基酸水平上的影响及在山羊皮肤中的定位表达。方法：以阿尔巴斯白绒山羊KAP6-1.2 cDNA设计特异引物,扩增5种山羊的KAP6-1.2基因的编码区,克隆并测序。制备KAP6-1.2 cRNA探针,通过组织切片原位杂交在皮肤中进行定位表达分析。结果：6种山羊的KAP6-1.2在核苷酸和氨基酸水平上高度同源,仅吐根堡奶山羊的编码区有2个碱基与其他5种山羊不同,导致编码的两个氨基酸残基也发生了改变。原位杂交结果显示,KAP6-1.2 mRNA在10月份皮肤、胚胎125d皮肤、胚胎115d皮肤初级和次级毛囊的皮质层均有强烈的表达。结论：KAP6-1.2的核苷酸序列和氨基酸序列在不同地区、不同品种山羊中高度保守,在胚胎和成年山羊皮肤的初级和次级毛囊的皮质层均有强烈的表达。     

阿尔巴斯白绒山羊KAP6家族cDNA的特征分析

在构建内蒙古阿尔巴斯白绒山羊次级毛囊兴盛期皮肤组织cDNA文库的基础上,随机挑取636个克隆从5’端开始测序,对序列进行特征分析。分析结果表明有41个ESTs与绵羊KAP6-1基因同源性大于95％,且期望值小于1e-10,进一步分析可被分为6个Qusters。从每个Cluster中挑取一个全长cDNA序列,其核苷酸序列和预测编码的蛋白质序列表明AY310753与绵羊KAP6-1最为相似、AY310750差别最大,AY310751和AY310752在编码区分别缺少36个的核苷酸或12个的氨基酸。     

女性冠心病患者的危险因素分析及与冠脉病变严重程度的关系

目的:了解女性冠心病患者的危险因素及与冠脉病变严重程度的关系。方法:随机选取本院2012年至2014年心血管科住院治疗的疑似冠心病女性患者150例,经冠脉造影确诊冠心病患者105例,非冠心病患者45例。对患者的临床资料和冠脉病变严重程度进行单因素和多因素分析。结果:冠心病患者高血压与糖尿病百分比、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)及纤维蛋白原水平均高于非冠心病患者,而高密度脂蛋白(HDL-C)和血红蛋白水平均低于非冠心病患者(P0.05);年龄、高血压与糖尿病百分比、血脂上升百分比(高TC、高TG、低HDL-C、高LDL-C)、高尿酸百分比和纤维蛋白原水平均随冠状动脉病变支数及Gensini积分的增加而增加(P0.05);多因素分析发现女性冠心病的影响因素分别为高LDL-C、糖尿病、低HDL-C、TG和高血压,其中高LDL-C的影响最为显著(P0.05)。结论:高血压、糖尿病史、血脂水平为女性冠心病的影响因素,其中高LDL-C的影响最显著,各影响因素均与冠脉病变程度紧密相关。     

冷蒿种群在放牧干扰下遗传多样性的变化

通过随机扩增多态性 DNA(RAPD)方法检测了放牧干扰下冷蒿种群遗传多样性的变化。 17条 (组 )引物进行 RAPD分析 ,扩增共产生 2 5 4条带 ,其中 2 4 0条为多态性带 ,多态位点百分率达 94 .4 9%。随着放牧强度的增加 ,冷蒿种群多态位点百分数 ,Nei遗传多样性指数、Shannon信息指数均下降 ,种群内个体平均遗传一致度增加。放牧梯度上 4个冷蒿种群 H t=0 .2 116 ,Hs=0 .170 0 ,Dst=0 .0 4 16 ,种群间基因分化系数 Gst=0 .196 5 ,基因流 N*m=2 .0 4 5 1;同时随着放牧强度的增加 ,种群间的 Dst、Gst增加 ,N*m 降低。说明放牧限制了种群间的基因交流 ,使种群发生遗传分化。放牧梯度上的 4个冷蒿种群的遗传距离很小 ,但是随着放牧强度的增加 ,遗传距离在缓慢的增加 ,种群间的遗传一致度降低。根据遗传距离所构建的 U PGMA聚类图中冷蒿 4个种群随着牧压的增加 ,逐级聚在一起。这表明冷蒿种群的遗传分化与放牧强度的关系     

利用微卫星DNA标记研究绒山羊群体遗传多样性

利用7个微卫星标记对4个绒山羊品种共计18个个体的遗传多样性进行了分析和研究。计算了有效等位基因数、遗传杂合度、遗传距离等,分析了群体相关的遗传变异。结果表明,辽宁多绒山羊的有效等位基因数最大,杂合度最高;而辽宁绒山羊的有效等位基因数最小,杂合度最低。奈氏遗传距离表明,库布齐杂种绒山羊和辽宁多绒山羊的亲缘关系最近,而和阿尔巴斯绒山羊的亲缘关系最远。     

微卫星DNA标记在绒山羊群体中的初步研究

利用7个微卫星标记对4个绒山羊品种共计18个个体的遗传多样性进行了研究。计算了有效等位基因数、遗传杂合度、遗传距离等,分析了群体相关的遗传变异。结果表明：辽宁多绒山羊的有效等位基因数最大,杂合度最高,而辽宁绒山羊的有效等位基因数最小,杂合度最低;奈氏遗传距离说明：库布旗杂种绒山羊和辽宁多绒山羊的亲缘关系最近,而和阿尔巴斯绒山羊的亲缘关系最远。     

用rDNA的ITS序列探讨绵刺属的系统位置

绵刺属由于其特殊的形态特征,其系统位置至今仍存在争议。本文选定了蔷薇亚科6种植物和李亚科1种植物,扩增并测定了其核糖体DNA的ITS序列(不包括5．8S片断)。分析时又从GenBank中选取了蔷薇科另外5种植物的ITS序列共同分析。比较这12种植物的ITSI ITS2,发现不同植物间序列长度变异较大。ITSl的长度范围为224～266bp,ITS2的长度范围为202～22lbp。用PAUP3．1．1软件对12种植物的ITSl ITS2进行分析,结果表明蔷薇亚科中和绵刺属亲缘关系最近的属为金露梅属,其次为地蔷薇属,再次为山莓草属,而这4个属均具有花柱基侧生的特点,这与传统上依据花托杯状或坛状将绵刺属放在蔷薇属和龙牙草属附近的处理不符。系统树上李亚科的2种植物明显地聚为一个单系类群,说明绵刺与蒙古扁桃关系相对甚远。研究结果还表明绵刺这一蒙古高原旱生植物区系成分是由东亚中生植物区系成分的银露梅演化而来;绵刺的各种形态特征和生态习性是长期适应荒漠干旱气候环境的结果。这一植物起源及其迁移路线的发现,为深入研究亚洲中部荒漠植物区系和植被的形成提供了新的证据。     

内蒙古白绒山羊若干数量性状遗传参数的研究

本研究应用女母回归法、公畜内女母回归法、半同胞相关法和单元内半同胞相关法对内蒙古阿尔巴斯白绒山羊的产绒量、绒厚、毛长、体重、绒伸直长度和细度等六个性状的遗传参数进行了估测。结果表明：（1）绒量遗传力介于0.26～0.45之间;绒厚遗传力介于0.33～0.56之间;毛长遗传力介于0.23～0.32之间;体重的遗传力介于0.1 6～0.36之间;绒伸直长度遗传力为0.24;绒细度的遗传力为0.14。（2）产绒量与绒厚、绒厚与毛长、长度与绒厚、长度与毛长的遗传相关分别介于0.33～0.79、0.51～0.69 、0.38～0.60、0.74～0.90之间,存在较强的正向遗传相关;绒量与毛长、绒量与体重、绒厚与体重、细度与绒厚、细度与绒量、细度与体重的遗传相关分别为0.11～0.38、0 .06～0.17、0.15～0.36、0.02～0.11、0.24～0.35、0.13～0.32之间,存在较弱的正向遗传相关;毛长与体重、长度与绒量、长度与体重、长度与细度、细度与毛长之间的遗传相关介于-0.14～-0.28、-0.09～-0.20、-0.18～-0.23、-0.27～-0.31、-0 .17～-0.28之间,存在中等偏弱的负向遗传相关。（3）绒量、绒厚、毛长、体重的重复率分别为0.42、0.27、0.59、0.18。     

绒山羊70d胚胎皮肤小分子RNA文库构建及miRNA鉴定

目的:miRNA是一类21~23个核苷酸的单链小分子RNA,最近发现miRNA对哺乳动物毛囊的发育和维持具有重要作用。为了研究miRNA在绒山羊次级毛囊发育中的作用,可以为人工调节绒毛生长和提高羊绒产量提供新的线索。方法:该文构建了绒山羊70 d胎儿胚胎体测部皮肤小RNA文库,库容量为2.5×107。随机挑选192个克隆提取质粒进行序列分析,序列经GenBank Blastn和mirBase搜索比对。结果:结果显示有32个序列和绒山羊及其它动物的miRNA高度同源,可以确定是山羊的miRNA。这些miRNA代表19个不同的miRNA序列,其中9个已注册,其余10个代表新的绒山羊miRNA。在克隆的miRNA中,miR-199a*和miR-424的拷贝数最高,分别达到6个和3个,表明它他们在绒山羊次级毛囊发育期间的皮肤中非常活跃,可能有重要的生物学功能。结论:从绒山羊70d胚胎皮肤中鉴定了19个miRNA,这些miRNA可能参与绒山羊次级毛囊发育的调控。