金属螯合亲和层析介质用于六聚组氨酸融合蛋白的纯化研究

以Sepharose CL-6B为载体,环氧氯丙烷为活化剂,羧甲基天冬氨酸(CM-Asp)为螯合配基制备载有Co2 的金属螯合亲和层析介质Co-CM-Asp-Sepharose,并将其用于六聚组氨酸融合蛋白的纯化研究。对纯化200μL细胞裂解液中靶蛋白所需Co-CM-Asp-Sepharose介质用量,Co-CM-Asp-Sepharose与细胞裂解液的孵育时间,介质清洗条件及靶蛋白洗脱时所需咪唑浓度等进行了优化。比较了Co-CM-Asp-Sepharose与Ni-NTA-Agarose(Qiagen公司)两种螯合介质对融合蛋白的纯化效果,开展了从5mL细胞裂解液中放大规模纯化融合蛋白的研究,并通过Bradford法测定了Co-CM-Asp-Sepharose对CD155D1蛋白的纯化量。结果表明:对200μL细胞裂解液纯化体系,Co-CM-Asp-Sepharose(50%悬浮液)的优选体积为60μL,最佳孵育时间为30min,洗脱液最佳咪唑浓度为200mmol/L,纯化得到融合蛋白的量约为200μg。介质用量放大为1.5mL(50%悬浮液)对CD155D1蛋白的纯化量可达4.6mg。与商品化Ni-NTA-Agarose相比,本介质具有选择性好,清洗条件简单,得到的靶蛋白纯度高等优点。     

金属螯合亲和层析介质用于六聚组氨酸融合蛋白的纯化研究

以Sepharose CL-6B为载体,环氧氯丙烷为活化剂,羧甲基天冬氨酸（CM-Asp）为螯合配基制备载有Co2+的金属螯合亲和层析介质Co-CM-Asp-Sepharose,并将其用于六聚组氨酸融合蛋白的纯化研究。对纯化200 μL细胞裂解液中靶蛋白所需Co-CM-Asp-Sepharose介质用量,Co-CM-Asp-Sepharose与细胞裂解液的孵育时间,介质清洗条件及靶蛋白洗脱时所需咪唑浓度等进行了优化。比较了Co-CM-Asp-Sepharose与Ni-NTA-Agarose(Qiagen公司)两种螯合介质对融合蛋白的纯化效果,开展了从5mL细胞裂解液中放大规模纯化融合蛋白的研究,并通过Bradford法测定了Co-CM-Asp-Sepharose对CD155D1蛋白的纯化量。结果表明：对200μL细胞裂解液纯化体系, Co-CM-Asp-Sepharose（50%悬浮液）的优选体积为60μL,最佳孵育时间为30min,洗脱液最佳咪唑浓度为200mmol/L,纯化得到融合蛋白的量约为200μg。介质用量放大为1.5mL（50%悬浮液）对CD155D1蛋白的纯化量可达4.6mg。与商品化Ni-NTA-Agarose相比,本介质具有选择性好,清洗条件简单,得到的靶蛋白纯度高等优点。     

碳离子辐照对四尾栅藻光合色素及抗氧化活性的影响

为了探讨重离子辐照对微藻的生物学效应,实验研究了不同剂量碳离子辐照（10~80 Gy）对四尾栅藻（Scenedesmus quadricauda）光合色素及抗氧化活性的影响,分别测定了辐照后短期内其叶绿素a（Chl a）、叶绿素b（Chl b）和类胡萝卜素含量、脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果显示：(1)较低剂量（10~20 Gy）辐照后,光合色素含量变化较小或无显著变化,中等剂量（40~60 Gy）辐照后,光合色素含量显著升高,之后又回落,恢复至正常水平,高剂量（80 Gy）辐照后,光合色素含量明显降低,不能恢复正常;(2)低剂量（10 Gy）辐照后,丙二醛（MDA）含量显著上升,8 h后出现回落,到24~48 h时,回升至正常水平,较低剂量（20 Gy）辐照后,MDA含量瞬时有所下降,到24~48 h时,回升至正常水平,中等至高剂量（40~80 Gy）辐照后,MDA含量降低,24~48 h时显著升高,不能恢复正常;(3)低剂量（10 Gy）辐照后,超氧化物歧化酶（SOD）活性显著上升,8 h后出现回落,恢复正常,中等剂量（20~60 Gy）辐照后,SOD活性显著上升,到48 h时回落至正常水平,高剂量（80 Gy）辐照后,SOD活性无明显上升,到48 h时,活性明显降低,不能恢复正常。