大豆转录因子GmERF5的克隆、表达及功能分析

ERF转录因子是植物中特有的转录因子家族之一, 在植物响应生物和非生物胁迫过程中发挥重要的调控作用。通过对大豆(Glycine max)吉林32未成熟胚的表达谱分析, 利用RT-PCR技术从大豆中克隆了1个新的ERF转录因子GmERF5。GmERF5具有237个氨基酸残基, 分子量为26.09 kDa, 等电点为6.85, 其开放阅读框长714 bp。该转录因子蛋白与Gh-ERF2蛋白的同源性最高, 它们同属ERF亚家族的第IV亚类。实时荧光定量PCR分析表明, 该蛋白基因在大豆的根中表达量最高, 且受干旱、高盐、低温及乙烯、脱落酸和茉莉酸甲酯的诱导上调表达。亚细胞定位实验结果表明, GmERF5蛋白定位于细胞核中。转录激活能力分析结果显示, GmERF5可以激活报告基因的表达, 为转录激活子。综合以上结果, 认为GmERF5可能作为转录调控因子参与大豆生物和非生物胁迫的应答。     

植物细胞多倍体诱导实验方法的改进

从植物多倍体诱导实验材料处理的方法上,介绍了改进植物多倍体诱导实验的技术,提高了多倍体细胞的分裂指数。实验用0．1％和0．01％浓度的秋水仙素溶液分别处理大蒜根尖24h、36h、48h、72h,进行多倍体诱导,再在清水中分别培养0h、12h、24h、36h,结果表明经清水培养的多倍体细胞分裂指数高于对照：0．01％浓度的秋水仙素处理的多倍体细胞分裂指数高于0．1％多倍体细胞分裂指数。     

猪传染性胃肠炎病毒S蛋白抗原位点分子特征分析

为了进一步研究猪传染性胃肠炎病毒S蛋白抗原位点的分子特征,选取GenBank中22株TGEV分离株,采用生物信息学方法对抗原位点氨基酸序列进行同源性比对分析。结果表明,不同分离株的A和C位点高度保守,B和D位点则有一些变化。     

复合重金属胁迫对两种藓类植物生理特性的影响

研究混合金属离子(Zn2+,Cu2+,Pb2+和Cd2+)溶液对东亚砂藓(Racomitrium japonicum)和拟垂枝藓(Rhytidiadelphus squarrosus)的膜系统、光合系统的损伤情况及其抗氧化酶系统的变化。结果表明:随着处理重金属浓度的增加,两种藓类植物体中的游离脯氨酸含量先降后升高再下降;丙二醛含量具应激效应;SOD、POD和CAT活性在低浓度下升高(东亚砂藓≤50μmol.L-1,拟垂枝藓≤30μmol.L-1)。在高浓度下降低(东亚砂藓50μmo.lL-1,拟垂枝藓30μmol.L-1);可溶性蛋白含量在东亚砂藓中表现为降低-升高-降低,而拟垂枝藓先升后降;叶绿素含量呈抑制效应。拟垂枝藓的生理变化较东亚砂藓明显,更有利于检测重金属的污染。     

大豆转录因子GmERF5启动子的克隆及活性分析

乙烯响应因子(Ethylene-responsive factors,ERFs)广泛参与植物对生物和非生物胁迫的应答。从大豆吉林32的基因组DNA中分离到GmERF5的启动子片段,全长1 924 bp。该区段含有9种与逆境相关的顺式作用元件,即G-box、GT-1、LTRE-1、W-box、TL1、DPBF、MYB、MYC和BIHD10S。将该启动子构建到植物表达载体pCAMBIA1301上与葡萄糖苷酸酶(GUS)基因融合,注射法转化烟草叶片,并进行干旱、高盐和低温处理,通过GUS组织化学染色和GUS荧光值的测定分析启动子的启动活性。结果表明,在未处理条件下,该启动子能驱动下游GUS基因的表达。干旱和低温处理10 h能明显增强GmERF5P的启动活性。     

异源表达大豆转录因子GmNF-YA19提高转基因烟草抗旱性

核因子（NF-Y）广泛存在于真核生物中,是一类能够在植物非生物胁迫反应中发挥重要调控作用的转录因子。探究大豆GmNF-YA19的抗旱性及作用机制,为GmNF-YA19在抗旱植物育种中的应用奠定基础。运用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)对GmNF-YA19在非生物胁迫下的表达量进行检测,克隆GmNF-YA19,构建GmNF-YA19植物表达载体并转化烟草,对转基因烟草的抗旱性进行鉴定。RT-q PCR结果显示GmNF-YA19在大豆中能够响应干旱、高盐、低温及外源ABA,且干旱胁迫下GmNF-YA19的表达量升高最显著。以大豆叶片cDNA为模板,通过PCR克隆GmNF-YA19。序列分析结果显示,GmNF-YA19编码一个含有213个氨基酸的蛋白质,预测分子量22.99 kD,预测等电点9.40。Gm NF-YA19蛋白序列包含一个保守的CBF结构域。蛋白系统进化分析表明,GmNF-YA19蛋白与OsNF-YA7蛋白、AtNF-YA4蛋白和AtNF-YA7蛋白亲缘关系较近。共获得4棵转基因烟草植株。在干旱胁迫下,GmNF-YA19的异源表达增强了转基因烟草的抗旱性。与野生型烟草相比,...