铜绿假单胞菌Arr基因突变对生物膜和绿脓菌素合成的影响

为了研究铜绿假单胞菌Arr基因对生物膜和绿脓菌素合成的影响,采用抗庆大霉素基因序列(Gentamycin resistance cassette,aacC1)插入失活的策略构建了铜绿假单胞菌Arr基因突变株PA-AG,通过96孔板静止培养、结晶紫染色的方法检测其生物膜的形成量,利用抽提的方法检测绿脓菌素的合成量。结果在KMB或LB培养基中,突变株PA-AG形成生物膜的量均有所减少,野生株约是突变株的2倍,然而突变株合成绿脓菌素的能力却明显加强,约为野生株的2.5倍。由此推测,铜绿假单胞菌Arr基因在一定程度上促进了生物膜的形成,抑制了绿脓菌素的合成。     

gacS基因插入失活对绿针假单胞菌G-05的两种胞外次生代谢物合成的影响

一株来自大棚温室甜椒根际的绿针假单胞菌Pseudomonas chlororaphis G-05,可分泌抗生物质吩嗪-1-羧酸,并具有抑制辣椒疫霉的生物防治功效。【目的】为了系统研究该菌株的生物防治功能及抗生物质合成与分泌机制。【方法】首先通过生化法和16S rDNA同源比对法对该菌株进行系统分类的初步鉴定,再根据基因的同源性从G-05基因组DNA中克隆长1.4 kb的gacS基因的部分保守区段,采用抗庆大霉素基因（gentamycin resistance cassette, aacC1）插入失活的策略构建了该基因突变株G-05S。【结果】在King’ s B（KMB）或PPM培养基中,突变株G-05S合成吩嗪-1-羧酸的能力受到明显抑制。然而,突变株G-05S分泌的吲哚乙酸与野生株相比无显著差异。互补实验表明,gacS基因的表达可以使突变株G-05S的吩嗪-1-羧酸的合成恢复到野生株水平。【结论】由此推测,GacS(Global activator sensor )对不同次生代谢物的调控具有特异性。     

rpoS基因插入突变对铜绿假单胞菌两个吩嗪合成基因簇的调控

【目的】为了研究铜绿假单胞菌rpoS基因对吩嗪(Phenazine)合成基因簇phz1和phz2的调控方式与机制。【方法】采用抗庆大霉素基因(gentamycin resistance cassette,aacC1)插入失活的策略构建了rpoS基因突变株PA-SG;同时利用lacZ的翻译融合表达载体pME6015,构建了phz1′-′lacZ和phz2′-′lacZ翻译融合表达载体pMEZ1和pMEZ2。采用电转化法分别将pMEZ1、pMEZ2和pME6015导入铜绿假单胞菌突变株PA-SG和野生株PAO1,用Miller法检测融合β-半乳糖苷酶活性。【结果】在KMB或PPM培养基中,pMEZ1在突变株PA-SG中的表达均增强,为野生株的4-5倍;而pMEZ2在突变株PA-SG中的表达均降低,野生株是突变株的2-3倍。【结论】由此推测,铜绿假单胞菌rpoS基因对两个不同吩嗪合成基因簇的调控作用具有特异性,在一定程度上,rpoS负调控phz1,正调控phz2。     

鲍曼不动杆菌感染的分布特点及药敏分析

目的了解鲍曼不动杆菌感染分布情况及对20种抗生素耐药性分析。方法送检标本按照《全国临床检验操作规程》（第2版）微生物方法操作,用Vitek—Systems ATB法国生物,梅里埃微生物分析仪,并结合传统手工非发酵微量生化管编码补充试验进行菌种鉴定;药敏试验采用K—B琼脂纸片扩散法及法国梅里埃ATB试条。结果112株鲍曼不动杆菌中有93株（83％）来自于上呼吸道（痰液及咽拭子）：药敏结果显示鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类（阿米卡星、庆大霉索）,喹诺酮类（环丙沙星）,碳青酶烯类（亚胺培南）具有较高的敏感率。对β-呐酰胺类抗生素有较高的耐药性,在检测的112株鲍曼不动杆菌中,多重耐药菌株占54．5％（61／112）,三重耐药株占14．8％,而在这些多重耐药菌株中,大于三重耐药的菌株就占到69％。结论鲍曼不动杆菌对抗菌药物已产生多重耐药性,应重视该菌感染及耐药性监测,阻止多重耐药菌株的播散,预防医院感染的发生。     

玉米子粒中锌及铁铜锰含量的遗传及QLT分析

分别利用三交组合DH8×登海40和DH86×沈137创建F1代DH群体A和群体B,比较2个不同遗传背景下DH群体子粒中锌及铁铜锰含量的变化,并对2个供试群体2年间的试验结果进行了QTL分析。发现玉米子粒中锌及铁铜锰的含量在不同个体间、不同年份间受环境影响比较大,且表现不稳定;群体内呈现连续性数量性状变化,服从于正态分布。对群体A2年子粒中锌及铁铜锰含量进行QTL定位,结果2007年检测到了5个与这些性状有关的QTL,可解释的遗传变异范围为9.41%~43.67%;2008年检测到9个QTL,可解释的遗传变异范围为11.21%~42.96%。2年间末检测到相同的QTL位点。对群体B进行QTL定位,2年间检测到18个QTL位点,分布于除第5染色体以外的其余9条染色体上。其中,2007年检测到12个QTL,2008年获得6个QTL,相同的QTL为2个,控制锌含量的1个位点位于第3染色体的p-umc1399-p-bnlg1605区段,控制铜含量的1个位点位于第2染色体的bnlg1746区段。     

肺-支气管感染患者超声雾化诱导痰培养探讨

目的：提高肺--支气管感染患者疾病原菌的分离率,有效协助临床合理使用抗生素,减少耐药菌株的产生。方法：采用朵贝尔液、3%双氧水及生理盐水濑口后,用5%高渗盐水超声雾化吸入诱导咳嗽,按《全国临床检验操作规程》有关下呼吸道标本的处理方法进行原菌分离鉴定;药敏采用法国梅里埃ATB试条及K-B法。结果：超声雾化诱导痰培养阳性率为70.3%（218/310）,明显高于常规咳痰法42.7%（88/206）。本资料检出病原菌以阴性菌为主占61.1%,优势菌为铜绿单胞菌（18.3%）及克雷伯菌（8.26%）;阳性菌占28.9%,优势菌为A群链球菌（8.27%）及肺炎链球菌(8.26%）;真菌占10.1%。药敏结果提示：大多数病原菌对青霉素类、三代头孢菌素、环丙沙星明显耐药,敏感率仅在13.2%～45.9%之间。结论：超声雾化诱导痰培养方法检出病原菌的阳性率明显高于常规咳痰法,仅次于支纤镜取痰法,在临床中值得应用。