共生菌Serratia symbiotica对豌豆蚜发育和繁殖的影响

【目的】明确抗生素处理对豌豆蚜Acyrthosiphon pisum专性共生菌的影响,探究共生菌Serratia symbiotica对豌豆蚜生长发育和繁殖的影响。【方法】诊断PCR检测试验所用绿色豌豆蚜成蚜中的兼性共生菌类型;通过注射和饲喂抗生素去除兼性共生菌,建立不含兼性共生菌的豌豆蚜品系;定量PCR检测含有和不含S.symbiotica的豌豆蚜成蚜中专性共生菌Buchnera aphidicola的特异性基因片段的拷贝数;记录含有和不含S.symbiotica的豌豆蚜体重、蜕皮率、死亡率和繁殖力。【结果】试验所用豌豆蚜成蚜中仅含有1种兼性共生菌S.symbiotica。使用注射抗生素的方法能够去除豌豆蚜成蚜中的兼性共生菌S.symbiotica,并且对豌豆蚜中专性共生菌B.aphidicola的含量没有影响。与含有兼性共生菌S.symbiotica的豌豆蚜成蚜相比,不含兼性共生菌的豌豆蚜体重增长缓慢,在出生后9 d时体重不到含有S.symbiotica的豌豆蚜成蚜体重的1/3;不含兼性共生菌S.symbiotica的豌豆蚜1龄若蚜历期延长、死亡率升高,且平均每头成蚜所产后代数降低...     

IBDV丝素蛋白/壳聚糖DNA微球疫苗的制备及免疫原性分析

为了制备传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)DNA微球疫苗,并评价其免疫效果。以丝素蛋白(Silk fibroin,SF)/壳聚糖(Chitosan,CS)为壁材,IBDV的VP2/4/3 DNA疫苗为芯材,通过戊二醛和Na2SO4介导的乳化交联技术,制备出SF/CS复合微球疫苗,然后经肌肉注射14日龄非免疫鸡,2周后加强免疫一次,酶联免疫法(ELISA)定期监测鸡血清的IBDV抗体,以研究微球化疫苗的免疫原性。结果显示:戊二醛介导交联方法影响荷载DNA疫苗的活性,而Na2SO4介导的交联方法操作简单且不影响荷载DNA活性;建立了以壳聚糖浓度0.5%(pH 5.0)、丝素蛋白浓度0.6%,质粒DNA 500μg/mL溶解在2%Na2SO4溶液中的工作条件;SF-CS复合微球DNA疫苗荷载率89.14%,大小1.98μm,对DNaseⅠ的消化有保护作用。免疫后的抗IBDV血清ELISA抗体的检测显示,微球免疫组总体高于质粒疫苗免疫组(P0.05),而且SF/CS复合微球组免疫反应要略高于单纯CS包被的抗原组。研究表明,丝素蛋白/壳聚糖作为微球佐剂能提高IBDV DNA疫苗的临床免疫效果,有很好的应用前景。     

城乡样带景观梯度分析的幅度效应

基于梯度分析与景观格局定量分析相结合的方法,通过改变样带宽度与研究步长,对城乡样带景观梯度分析的幅度效应进行了研究.结果表明:城乡样带景观梯度分析具有尺度依赖性,样带宽度对分析结果的影响大于研究步长;研究步长主要影响各景观指数沿样带波动的剧烈程度,将样带等分为20个样方时的研究步长是分析该样带梯度规律的适宜尺度;样带宽度存在"临界阈"现象,当样带宽度越过临界值时,各景观指数沿样带的梯度规律均发生变化.此外,不同景观指数对城乡样带景观梯度规律的反映存在差异,各景观类型的面积比例、边缘密度和景观Shannon多样性指数沿样带的梯度变化规律明显,而斑块密度和平均斑块分形维数沿样带的梯度变化规律不明显.     

细菌感染后家蚕幼虫中肠差异表达基因的鉴定（英文）

作为遭遇各种微生物的前线, 昆虫的消化道在免疫反应中起到重要的作用。为了研究家蚕Bombyx mori肠道免疫反应, 我们利用基于ACP (annealing control primer)的反转录PCR技术, 从中肠组织中鉴定得到18个在经口器感染绿脓杆菌Pseudomonas aeruginosa 和金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus后的差异表达基因,并利用荧光定量PCR分析了其中4个基因在感染后24 h内的动态变化。结果表明： 肽聚糖识别蛋白-L1（PGRP-L1)和一个丝氨酸蛋白酶前体基因特异性地受绿脓杆菌感染后上调; 30kP蛋白酶A基因受绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌2种细菌感染后上调。我们的研究鉴定了经口器感染后家蚕中肠中参与入侵细菌识别和免疫信号途径的基因, 可为对这些基因进一步的功能研究提供线索。     

细菌感染对家蚕DNA甲基化与组蛋白乙酰化相关基因表达的影响

【目的】探讨DNA甲基化及组蛋白乙酰化是否参与家蚕Bombyx mori免疫反应的调控。【方法】对家蚕与其他生物的DNA甲基转移酶(DNMT)、组蛋白去乙酰化酶(HDAC)与组蛋白乙酰转移酶(HAT)的蛋白序列进行系统进化分析;利用定量PCR检测家蚕5龄第3天幼虫感染病原菌绿脓杆菌Pseudomonas aeruginosa和金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus后Bm DNMT1,Bm HDACI-1,Bm HDACI-2和Bm HAT1在家蚕脂肪体组织中的表达变化;给家蚕5龄第2天幼虫注射DNMT,HDAC和HAT抑制剂,观察它们对家蚕感染细菌后的存活率的影响。【结果】系统进化分析显示,Bm DNMT1在进化上呈现特殊性,独立于其他昆虫DNMT1的进化,而Bm HDACs和Bm HAT在进化上相对保守。定量PCR检测表明,在两种细菌感染后,Bm DNMT1,Bm HDACs和Bm HAT1在家蚕幼虫脂肪体中的表达水平均有不同程度的上升。然而,DNMT,HDAC和HAT抑制剂对家蚕幼虫感染细菌后的存活率并无明显影响。【结论】本研究发现感染绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌后,家蚕幼虫脂肪体中Bm DNMT1,Bm HDACs和Bm HAT1的表达水平有不同程度的上调,推测DNA甲基化和组蛋白乙酰化/去乙酰化可能参与家蚕免疫反应的调控。     

“交通廊道蔓延”视角下山地城市典型样带空间格局梯度分析

空间可达性的强弱在一定程度上决定着土地利用变化的方向和强度,因此交通的廊道作用对城市化进程发挥着重要作用。以重庆市轨道交通三号线沿线双侧各3000 m缓冲样带为研究区,采用面向对象分类方法将四期Landsat TM/ETM遥感影像进行土地利用制图,选择核密度估算、指数分析和梯度分析的空间分析方法,研究交通廊道的变化及其对区域空间格局变化的影响。研究表明,研究期内,样带空间的组分和格局发生了较为明显的变化。道路的空间变化和区域空间格局的变化表现出较为明显的梯度性:道路密度、土地利用的变化强度随距离交通主干道距离的远近依次减弱,道路密度等级范围内的土地利用变化强度随等级的降低出现由弱到强再转弱的特征。     

MicroRNA通路中的关键因子Dicer-1和Argonaute-1对豌豆蚜免疫防御的影响

【目的】研究microRNA(miRNA)通路中两个关键组分Dicer-1和Argonaute-1(Ago-1)在豌豆蚜Acyrthosiphon pisum抵御细菌和真菌侵染中的作用,加深对豌豆蚜免疫防御系统的了解。【方法】用qRT-PCR检测细菌金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus和大肠杆菌Escherichia coli以及真菌球孢白僵菌Beauveria bassiana分别侵染后豌豆蚜成蚜体内Dicer-1和Ago-1的表达量;通过注射法利用RNAi技术对豌豆蚜成蚜Dicer-1和Ago-1进行沉默后,感染金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和球孢白僵菌,检测豌豆蚜体内细菌和真菌的增殖和统计豌豆蚜成蚜存活率。【结果】与0.85% NaCl溶液处理的对照组相比,金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和球孢白僵菌侵染豌豆蚜成蚜后,其体内Dicer-1和Ago-1的表达量发生了一定程度的上调。RNAi干扰Dicer-1后,感染金黄色葡萄球菌36 h时豌豆蚜成蚜中细菌菌落数显著高于对照组(注射dsLTA)的,但感染后7 d时的存活率与对照组无显著差异;感染大肠杆菌12和24 h时豌豆蚜成蚜体内的细菌菌落数均显著高于对照组的,但感染后7 d时的存活率显著低于对照组的;感染球孢白僵菌后6 d,豌豆蚜成蚜体内真菌孢子数显著高于对照组的,但感染后7 d时的存活率显著低于对照组的。RNAi敲降Ago-1后感染金黄色葡萄球菌,豌豆蚜成蚜体内细菌菌落数在36 h时显著高于对照组的,但感染后7 d时的存活率显著低于对照组的;感染大肠杆菌后,在24 h时豌豆蚜成蚜体内细菌菌落数显著高于对照组的,感染后7 d时的存活率略低于对照组的,但无显著差异;感染球孢白僵菌后6 d,豌豆蚜成蚜体内真菌孢子数显著高于对照组的,但感染后7 d时的存活率显著低于对照组的。【结论】豌豆蚜miRNA通路中的两个关键组分Dicer-1和Ago-1参与了豌豆蚜抵御细菌和真菌侵染的免疫防御反应,尤其在抵御真菌的防御反应中有重要作用。     

栝楼籽核糖体失活蛋白的纯化、性质及晶体生长研究

栝楼（Ｔｒｉｃｈｏｓａｎｔｈｅｓｋｉｒｉｌｏｗｉ）籽经粉碎抽提、硫酸铵沉淀、阳离子交换及凝胶过滤柱层析等步骤,得到一种单链核糖体失活蛋白－Ｔｒｉｃｈｏｋｉｒｉｎ（ＴＣＫ）．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＩＥＦ显示为单一条带,其分子量为２９ｋＤ,ｐＩ≥９．３,含糖量约为１．７５％．该蛋白对兔网织红细胞裂解液系统的蛋白质合成具较强的抑制活性,ＩＣ５０为６．７×１０－１０ｍｏｌ／Ｌ．改进了纯化方法,提高了产率,并培养出晶体．     

龙牙楤木总皂苷含量测定及其抗炎镇痛活性评价

建立了一种龙牙楤木中总皂苷的含量测定方法,比较了龙牙楤木根皮和茎皮中总皂苷含量,并研究了龙牙愡木的抗炎镇痛作用。采用超声辅助提取,用紫外-可见分光光度法,以齐墩果酸为对照品建立标准曲线;以5%香草醛-冰醋酸为显色剂,检测波长550nm,用比色法测定总皂苷含量。结果显示所建立的方法稳定可靠,龙牙楤木不同部位皂苷含量差异较大,根皮总皂苷含量为43.50mg/g,而茎皮为24.38mg/g。总皂苷在0.02~0.10mg/mL(R~2=0.999 6)质量浓度范围内呈良好线性关系,根皮和茎皮的平均回收率分别为100.12%(RSD=1.10%)和99.84%(RSD=1.77%)。采用醋酸致小鼠扭体试验和耳廓肿胀试验研究龙牙楤木总皂苷抗炎镇痛活性,结果表明龙牙楤木总皂苷能显著减轻醋酸对试验小鼠内脏所致的疼痛(P<0.05)和降低由二甲苯所致实验小鼠耳廓的肿胀程度(P<0.05),显示出较强的抗炎镇痛作用,且根皮的作用效果比茎皮好。龙牙愡木抗炎镇痛活性可能与其总皂苷含量呈正相关。建立的总皂苷含量测定方法简便、准确、重现性好,可作为龙牙楤木根皮与茎皮中总皂苷的含量测定方法。     

不同性别桑树幼苗对镉与酸雨复合处理的生长响应及镉积累差异

为研究不同性别桑树在镉(Cd)与酸雨(AR)复合处理条件下的生长与镉积累差异,本试验以‘强桑1号’(雌株)和‘农桑14号’(雄株)两种不同性别桑树为材料,研究重金属镉(100 mg·kg^-1干土)和模拟酸雨(pH 3.0)处理下,两者生物量积累和分配、最大净光合速率(A_max)和叶绿素荧光参数,以及Cd积累与分配的差异.试验共设置无Cd和AR(对照)、单独Cd、单独AR、Cd+AR复合4个处理.结果表明:单独Cd处理虽然显著增加了雌株和雄株根茎叶中Cd含量,而且雌株各部分Cd含量显著高于雄株,但是只有雄株根、茎和总生物量、最大净光合速率显著下降,而雌株除了A_max显著下降外,各部分生物量积累下降均不显著,且两者的最大光化学效率(F_v/F_m)、光化学淬灭系数(q_P)和非光化学淬灭系数(q_N)均未发生显著变化.复合处理下,雄株和雌株的总生物量、A_max均显著降低,与单独镉处理相比,雌株根和叶中的Cd含量显著升高,但雄株没有明显变化,两者的F_v/F_m、q_P没有显著变化,但q_N均显著降低.短时间处理下桑树雌株对单独镉胁迫的耐受性高于雄株,但是酸雨的加入会降低雌株对镉的耐受性,可能是因为酸雨促进雌株根系对镉的吸收,并导致叶片积累了更多的镉.