白曲霉工程菌TR12循环转化酒精废液研究

在含固体残渣8％的酒精废液中,加入尿素2g／L、玉米浆2mL／L,经接种白曲霉基因工程菌TRl2菌株,在32℃摇床培养70h后,可获得含糖化酶246U／mL和耐酸性α-淀粉酶13．42U／mL的转化液。转化液直接循环利用于无蒸煮酒精发酵配料工序,不仅不影响酒精生产的产量和质量,而且能有效地减轻环境污染压力,节约水资源,降低生产成本。     

白曲霉工程菌TR12循环转化酒精废液研究*

在含固体残渣 8%的酒精废液中 ,加入尿素 2g/L、玉米浆 2mL/L ,经接种白曲霉基因工程菌TR1 2菌株 ,在 32℃摇床培养 70h后 ,可获得含糖化酶 2 4 6U/mL和耐酸性α 淀粉酶 1 3 42U/mL的转化液。转化液直接循环利用于无蒸煮酒精发酵配料工序 ,不仅不影响酒精生产的产量和质量 ,而且能有效地减轻环境污染压力 ,节约水资源 ,降低生产成本。     

动物乳杆菌的分离鉴定及其抑菌蛋白的特性分析

通过滤纸片法从健康肉猪猪大肠、小肠中分离得到212株抗生物质产生菌, 以杯碟法复筛, 得到1株对溶壁微球菌(Micrococcus lysodeikticus)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)等革兰氏阳性菌和大肠杆菌(Escherichia coli)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)等革兰氏阴性菌以及部分真菌如禾谷镰刀霉(Fusarium graminearum)均有强烈抑制作用的乳酸菌。经形态学、生理生化特征及16S rDNA序列同源性分析等手段鉴定该菌株为动物乳杆菌(Lactobacillus animalis)。排除酸和过氧化氢的干扰后, 该菌株的发酵上清液对指示菌仍有明显抑菌活性; 用蛋白酶处理该菌株的发酵上清液后, 抑菌活性丧失; 发酵液粗提物具有较好的热稳定性(经121°C处理20 min仍有较强抑菌活性)以及较宽的抑菌活性pH值范围(3.5~5.5), 因此初步认为该菌株产生一类具有广谱抑菌活性的类细菌素物质。     

培养和非培养法分析冷藏鸡肉胴体中的细菌多样性

运用纯培养和非培养法对冷藏鸡肉胴体上细菌多样性进行了对比研究。采用培养法从鸡肉胴体中初步分离到45株细菌菌株,16S rDNA-ARDRA分析得到9株代表性细菌,其16S rDNA序列系统发育分析表明,这些菌株隶属于Bacillus sp.、Shigella sp.、Pseudomonas sp.、Citrobacter sp.、Klebsiella sp.和Escherichia sp.6个属。16S rDNA-ARDRA联合PAGE和16S rDNA全序列分析的非培养法结果表明,冷藏鸡肉中细菌主要属于Acinetobacter sp.、Bacillus sp.、Acidovorax sp.、Brochothrix thermosphacta、Lactococcus garvieae和Leuconostoc lactis等16个属。非培养法揭示的细菌多样性比培养法丰富,但二者结合使用能让肉品中微生物多样性得到更全面的展示。     

一株解磷中度嗜盐菌的分离鉴定及解磷特性分析

从四川自贡某盐井壁植物根系土壤中分离得到1株中度嗜盐解磷菌QW1011。该菌细胞呈线状, 大小为0.8 μm×30 μm~100 μm, 革兰氏染色为阳性、最适NaCl生长浓度为10%, NaCl最高耐受浓度15%。好氧生长, 酪素水解、硝酸还原和接触酶阴性。菌株的16S rRNA基因序列(接受号：EF647207)与Bacillus megatherium ATCC 14581的16S rRNA相似性为100%, 其16S-23S rRNA间区(ISR)的PCR扩增片的PAGE指纹图谱与参考菌株Baci     

改良PCA培养基检测鸡肉胴体中的污染细菌

通过添加鸡肉浸液改良经典PCA培养基获得模拟鸡肉营养条件的近自然的CEA培养基,用于检测鸡肉中对营养要求苛刻的污染细菌。根据添加不同浓度的新鲜鸡肉浸液所获得菌落总数的变化获得最佳添加浓度,并利用生化特性及16SrRNA序列对仅生长于CEA培养基的细菌进行了鉴定。在CEA培养基上获得的细菌数量和多样性都显著高于PCA培养基(P0.05),且分离到3株无法在PCA培养基上生长的细菌,经鉴定其与Enterococcus faecalis、Rothia mucllaginosa,Staphylococcus saprophyticus subsp.saprophyticus的相似性分别为99%、96%、99%。E.faecalis因产生生物胺而被认为是肉品中的腐败菌,后两者则均是条件致病菌株,他们的存在对鸡肉产品的安全可能造成隐患。该方法中的近自然培养法能提高对微生物数量和种类的检测灵敏度,特别适于对营养要求苛刻的污染细菌的检出。     

类产碱假单胞菌核心杀虫蛋白基因的转化及杀虫活性

[目的]利用类产碱假单胞菌核心杀虫蛋白基因(Core Pseudomonas pseudoalcaligenes insecticidal protein gene,cppip)构建植物表达载体并转化烟草,以研究cppip在高等植物体内表达产物的活性.[方法]cppip在烟草基因组中的整合及转录通过烟草转化系T0代种子发芽的抗生素抗性分离及其T1代株系的分子检测来证明;烟草转化系后代表达产物的杀虫效果通过测定蝗虫死亡率来分析.[结果]证明了cppip能以一定拷贝数插入到烟草基因组内,并按照孟德尔遗传方式传递给后代;比较含信号肽(signal peptide sequence,SPS)和不含信号肽的类产碱假单胞菌杀虫蛋白基因(Pseudomonas pseudoalcaligenes insecticidal protein gene,ppip)表达产物的杀虫活性,发现不含SPS的ppip烟草转化系蛋白表达产物对2～3龄蝗虫幼虫的平均致死率为83.37%,并对幼虫的生长发育有明显抑制作用,而含有SPS的ppip烟草转化系蛋白表达产物对2～3龄蝗虫幼虫的平均致死率为15.65%,两者之间有着显著的差异.[结论]推测ppip的SPS会影响该基因在高等植物体内表达产物的活性,本研究结果对于高效利用ppip进行植物转化及抗虫具有重要参考价值.     

四川大公古盐井中可培养中度嗜盐菌的初步分析

以四川自贡大公古盐井盐卤为研究对象,分离获得112株中度嗜盐菌.经形态特征、生理生化特征和16S rRNA同源序列分析表明:112菌株分属于细菌域的Planococcus、Halomonas、Halobacillus、Oceanobacillus和Virgibacillus 属,与P. rifitiensis和H.venusta、H.trueperi、H.blutaparonensis、V. picturae在16S rRNA基因水平分别有100%和99%的高相似性.但菌株QW06、QW12、QW15和QW18分别与O.profundus、H. trueperi和H. blutaparonensis在菌落形态、革兰氏染色、产酸、明胶水解和淀粉水解等表型特征上有明显的差异.同时,16S-23S rRNA ISR-PCR基因指纹图谱也表明QW06、QW12、QW15和QW18不同于参考菌株O.profundus KCCM 42318和H. trueperi DSM 1040T、H.blutaparonensis ATCC BAA 1217T,说明QW06、QW12、QW15和QW18分类地位有待进一步确定.实验结果不仅揭示了大公古盐井中可培养中度嗜盐菌的多样性和系统发育关系,而且也表明了16S rRNA高度相似菌的16S-23S rRNA ISR在进化的过程中发生了某些突变.     

甲基营养型芽孢杆菌拮抗玉蜀黍尾孢菌、链格菌和灰葡萄孢菌及环脂肽分析

【目的】探究甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)对植物病原菌玉蜀黍尾孢菌(Cercospora zeae-maydis Tehon et Daniels)、链格菌(Alternaria alternate)和灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)的拮抗作用并鉴定抗菌物质,为其病害防治提供优良生防菌。【方法】平板对峙法初筛和杯碟法筛选拮抗菌株;微生物形态学和16S rRNA基因鉴定拮抗菌株;薄层色谱(TLC)和编码基因分析鉴定抗菌物质;玉米田间生防试验评估拮抗菌对3种病原菌的防治效果。【结果】筛选到一株能够明显拮抗玉蜀黍尾孢菌、链格菌和灰葡萄孢菌的甲基营养型芽孢杆菌B-1841,抑制率分别为65.95%、71.04%和46.69%,抑菌物质为伊枯草菌素类脂肽。玉米田间生防试验表明,菌株B-1841对玉蜀黍尾孢菌、链格菌和灰葡萄孢菌感染的玉米病害均有防治效果,相对防效分别为60.25%、69.89%和45.21%。【结论】甲基营养型芽孢杆菌B-1841对玉蜀黍尾孢菌、链格菌和灰葡萄孢菌引起的病害有防治作用,在农作物真菌病害防治方面具有潜在应用价值。