哺乳动物细胞高效表达载体的优化

目的:优化哺乳动物细胞表达系统,提高目的基因的表达效率。方法:以组织型纤溶酶原激活剂(tPA)为报告基因,利用本实验室建立的CHOfrt/dhfr-细胞定点整合表达系统,对多种表达调控元件(包括hCMV和hEF-1α启动子、hCMV增强子、hEF-1α1st内含子及翻译增强子H213和V163等)及其多种组合的表达效率进行了系统的比较和评价。结果:hCMV启动子与H213组合以及hEF-1α启动子与V163组合的表达效率分别是仅含hCMV启动子的156.6%和139.5%。结论:该研究为构建高效的哺乳动物细胞表达载体奠定了基础。     

亚麻籽木酚素预防乳腺癌的作用及机制研究

目的:探讨亚麻籽木酚素预防乳腺癌的作用及机制。方法:分别采用基础饲料(BD组)和添加亚麻籽木酚素的饲料(FS组)喂养大鼠两周后,通过二甲基苯蒽灌胃复制乳腺癌模型大鼠,连续观察并测定两组大鼠瘤体的体积和重量,采用免疫组织化学技术分别检测和比较两组大鼠乳腺癌组织中PCNA、Her-2、Ki-67的表达。结果:BD组大鼠乳腺癌的发生率及瘤体重量和体积均较FS组更高(P0.05)。FS组乳腺癌组织中Ki-67、Her-2、PCNA阳性表达率均较BD组显著降低(P0.010)。结论:亚麻籽木酚素可发挥预防乳腺癌的效应,该效用可能与其降低Ki-67、Her-2、PCNA的表达有关。     

中国水域瓶鼻海豚的mtDNA控制区序列变异性分析

测定了30头中国水域瓶鼻海豚（Tursiops sp.)mtDNA控制区5′端424bp的序列,结合已发表的中国水域其它瓶鼻海豚的mtDNA控制区序列,共发现54个变异位点,定义了37种单元型。中国水域瓶鼻海豚的两个形态型之间没有共享单元型,且具有8个鉴别位点。基于最大似然法和邻接法的系统发生分析均把单元型聚类为分别代表两个形态型的支系。形态型之间的核苷酸歧异度为5.58%,超过了其它海豚类种间的序列歧异水平,支持把这两个形态型划分为两个独立的种,即T.truncatus和T.aduncus的观点。虽然两种瓶鼻海豚的分布区在台湾海峡一带出现重叠,但相互之间缺乏基因流动,提示两者可能已出现了显著的生殖隔离。     

鲤IGF2b基因5''侧翼区序列克隆及不同鲤该区域GC富集区的甲基化分析

鲤(Cyprinus carpio)胰岛素样生长因子2b(insulin-like growth factor 2b,IGF2b)基因为鲤IGF基因家族重要的成员,已有的研究表明5'侧翼区序列对其功能的发挥有重要作用。因此,采用基因组步移法获取5'侧翼区序列,通过亚硫酸盐修饰的方法分析不同品种该区域GC富集区的甲基化状况。本文成功从鲤基因组DNA中获得695 bp的IGF2b 5'侧翼区序列。已获取的IGF2b 5'侧翼区序列经过TFSEARCH分析后发现了多个转录因子结合位点和TATA框,通过BLAST比对发现,鲤IGF2b 5'侧翼区DNA序列与斑马鱼(Danio rerio)IGF2b基因相比,相似性为87%。检测该区域富含GC的序列17个位点,发现建鲤(C.c.var.jian)有2个个体的3个位点出现甲基化,而黄河鲤(C.c.haematopterus)只有1个个体1个位点出现甲基化,这说明2个品种鲤在这个区域出现甲基化修饰的几率低,也验证了这2品种在该基因该区域GC富集区是稳定的。     

不同稻作方式对稻田杂草群落的影响

运用半试验与调查相结合的方法,以贵州省从江县传统农业区的糯稻和杂交稻为例,研究了在水稻单作（R）、稻-鱼（R-F）和稻-鱼-鸭（R-F-D）3种不同稻作方式下稻田杂草群落的特征.结果表明：糯稻在3种稻作方式下的抑制杂草能力均优于杂交稻;R-F-D显著降低了田间杂草的发生密度,对鸭舌草、节节菜等的抑制效果达到100%,总体抑制杂草效果显著优于其他稻作方式,杂草的物种丰富度及Shannon多样性指数显著降低,Pielou均匀度指数提高,表明群落物种组成发生了很大的改变,降低了原来优势杂草的发生, 是一种较好的可达到抑制杂草效果的稻作方式.     

淡水豚类线粒体DNA 12S rRNA基因的序列变异及其分子系统学研究

淡水豚类４个代表属「白暨豚（Ｌｉｐｏｔｅｓ）、恒河豚（Ｐｌａｔａｎｉｓｔａ）、弗西豚（Ｐｏｎｔｏｐｏｒｉａ）和亚河豚（Ｉｎｉａ）」ｍｔＤＮＡ １２Ｓ ｒＲＮＡ基因的序列差异水平,高于其他齿鲸类科间的差异,特别是远远高于海豚总科内的科间差异。研究结果支持它们应归属于不同的科,即白暨豚科（Ｌｉｐｏｔｉｉｄａｅ）、恒河豚科（Ｐｌａｔａｎｉｓｔｉｄａｅ）、弗西豚科（Ｐｏｎｔｏｐｏｒｉｄａｅ）和亚河豚科（Ｉ     

亚麻籽木酚素预防乳腺癌及与雌激素的关系

目的通过卵巢切除术建立雌性大鼠去势模型,探究亚麻籽粉木酚素预防乳腺癌的功能及与雌性激素的关系。方法将48只雌性Wistar大鼠随机分为基础饲料组（BD）、基础饲料去势组（BDC）、亚麻籽粉组（FS）和亚麻籽粉去势组（FSC）,每组12只,对全部大鼠进行二甲基苯蒽（DMBA）一次性灌胃（2mg/kg体重）建立诱发的乳腺癌实验动物模型;一周后对BDC组、FSC组大鼠行去势手术,连续观察21周,测定瘤体的体积和重量,并取乳腺组织进行病理学检查。结果实验期间动物一般状况良好,实验组大鼠未出现明显毒副作用;亚麻籽粉组（FS和FSC组）大鼠发生可触及肿瘤的时间较相应对照组晚2到4周;亚麻籽粉组大鼠单纯性增生和不典型增生以及乳腺癌发生率和病灶数均显著低于相应对照组（单纯性增生：FS vs BD,P=0.006＊＊;FSC vs BDC,P〈0.001＊＊;不典型增生：FS vs BD,P=0.048＊;FSC vs BDC,P=0.014＊;乳腺癌：FS vs BD,P=0.028＊;FSC vs BDC,P〈0.047＊）;亚麻籽粉组大鼠肿瘤体积和重量均小于基础饲料组;FS和FSC组研究结果提示亚麻籽粉木酚素抑制增生发生及肿瘤细胞的生长的能力与实验动物体内雌性激素水平有关（单纯性增生：P=0.008＊＊;不典型增生：P=0.042＊;乳腺癌：P=0.033＊）。结论亚麻籽粉木酚素可有效预防和降低化学诱癌剂DMBA所诱发的乳腺癌、癌前病变和单纯性增生的发生,预防乳腺癌的功能和效果受到体内雌性激素影响。本研究结果对未来实施木酚素预防乳腺癌及有效人群的筛选具有参考价值。     

日本脑炎病毒C蛋白对其复制子载体自主复制活性的影响

为了研制具有高效自主复制能力的日本脑炎病毒 (JEV) 复制子载体,验证其作为新型复制子疫苗载体的可能性。以保留全长核心蛋白C基因的JEV复制子载体pCTCJEV为基础,通过PCR的方法减短C蛋白的部分基因序列,分别保留C23和C68位氨基酸,以Lac Z基因作为报告基因,构建了C基因长短不同的JEV复制子载体pCMW-2M-1LACZ、pCMW-2M-3LACZ。将复制子载体转染表达JEV结构蛋白的细胞系CME-4,通过Lac Z的表达检测JEV复制子载体表达外源蛋白的能力,反映了JEV的系列复制子载体的自主复制能力。结果保留C基因全长,C68、C23的复制子载体表达外源蛋白的能力相当,以上结果说明仅仅保留C蛋白的69个核苷酸即可保留JEV复制子载体的自主复制能力,为进一步优化JEV复制子载体,将该载体开发研制成为高效表达外源蛋白的疫苗载体提供了依据。     

细胞因子在1型糖尿病中的作用

1型糖尿病是T细胞介导的以胰腺β细胞特异性损伤为特征的炎症性自身免疫疾病,侵润胰岛的巨噬细胞,淋巴细胞等产生的细胞因子如白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α、干扰素-α、干扰素-γ、肿瘤坏死因子-β和白细胞介素-2等通过诱导胰腺β细胞凋亡/坏死和胰岛素分泌缺陷、调节T细胞的活化和种群比例,以及调控T细胞对β细胞的免疫识别和杀伤等,在1型糖尿病的发生和发展中起关键作用。