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1.
【目的】比较恒定链(invariant chain,Ii)CLIP的2个片段(PBS、GBS)影响免疫载体增强体液免疫的效果。【方法】首先,构建了基于小鼠Ii功能片段与新城疫病毒抗原肽F2的6个嵌合体(Cyt/TM/F2、Cyt/TM/F2/GBS、Cyt/TM/PBS/F2、Cyt/TM/F2/TRIM、Cyt/TM/F2/GBS/TRIM、Cyt/TM/PBS/F2/TRIM);其次,定向克隆至原核表达载体pET-32a中,并转化大肠杆菌Rosetta(DE3)诱导表达和纯化目的蛋白;最后,免疫小鼠,经间接ELISA法测定血清抗体效价,以及比较分析不同嵌合体免疫组免疫效果。【结果】一是所构建的含不同Ii功能片段/F2嵌合体的6个免疫组,均比单独F2的免疫组提高抗体水平1.5-4.9倍;二是在上述6个免疫组中,含CLIP的PBS或GBS的免疫组比不含CLIP的免疫组增强1.6-2.4倍;三是含PBS比含GBS的免疫组增强1.5倍。【结论】Ii胞浆区、跨膜区具有增强免疫效果的作用,而CLIP的PBS在Ii免疫载体中的作用优于GBS。  相似文献   
2.
采用改进的饱和硫酸铵盐析和DEAE-52纤维素层析两步法提纯猪血清IgG,并分析了IgG得率低的可能原因。利用Bradford蛋白浓度测定法、SDS—PAGE测得盐析粗提蛋白得率为12.96mg/mL血清,纯度为61.4%;DEAE层析第一峰蛋白纯度达95.7%,得率为3.9mg/mL血清。结果表明两步法能获得免疫实验要求电泳纯IgG,也发现明显分开的两个层析峰含有相同分子量成分IgG,这是纯化得率低的主因。  相似文献   
3.
西北太平洋柔鱼栖息地环境因子分析及其对资源丰度的影响   总被引:11,自引:0,他引:11  
余为  陈新军 《生态学报》2015,35(15):5032-5039
柔鱼(Ommastrephes bartramii)是西北太平洋海域重要的经济头足类,短生命周期的生活史特征决定其资源丰度易受海洋环境变化影响。根据1998—2010年我国鱿钓船生产统计资料和环境资料,包括海表温度(SST)和叶绿素浓度(Chl-a)数据,结合Nio 3.4区海表温距平值(SSTA),分析了SST和Chl-a浓度的季节和年际变化特征,并分别探讨了SST和Chl-a浓度距平值与Nio 3.4区SSTA及柔鱼资源丰度之间的关系。结果表明,产卵场海域Chl-a浓度冬季高夏季低,SST则夏季高冬季低;育肥场Chl-a和SST均呈夏季高冬季低变化,但6—12月份Chl-a浓度波动明显。产卵场和育肥场SST及Chl-a浓度年际变化明显。同时研究发现,厄尔尼诺、拉尼娜和正常年份时Nio 3.4区SSTA对柔鱼产卵场和育肥场环境的调控机制不同:拉尼娜和正常年份产卵场和育肥场温度上升,叶绿素浓度变化幅度小,有利于资源量补充,产量较高;厄尔尼诺年份温度和叶绿素均降低,尤其育肥场叶绿素浓度,对资源量产生不利影响,产量锐减。研究利用多元线性回归分别建立了基于温度和叶绿素的柔鱼资源丰度的预测模型,两者均能很好的预测柔鱼资源丰度(P0.05),但基于叶绿素的预测模型优于温度模型。  相似文献   
4.
研究鸡白细胞介素-2(chicken interleukin-2,ChIL-2)的免疫佐剂功能,构建ChIL-2与新城疫病毒F蛋白多抗原表位(NDV-F)的嵌合基因,以对鸡新城疫疫病进行防治。采用重叠延伸PCR方法通过基因柔性接头将ChIL-2基因和NDV-F多抗原表位基因构建成ChIL-2-linker-NDV-F嵌合基因并克隆入PET-32a载体,经测序鉴定后,转化BL21大肠杆菌,IPTG诱导表达6×His融合蛋白,Ni2~+亲和柱纯化,表达产物经SDS-PAGE、Western blot和间接ELISA检测和鉴定。结果表明,实验成功构建并克隆了ChIL-2-linker-NDV-F嵌合基因,嵌合基因在大肠杆菌中表达的ChIL-2-linker-NDV-F融合蛋白分子量约为48kD,表达量约占菌体蛋白总量的45%,纯化后的ChIL-2-linker-NDV-F融合蛋白能与感染NDV的鸡血清发生反应。上述结果证明ChIL-2-linker-NDV-F嵌合基因在原核细胞中能有效表达,且融合蛋白具有较强的特异性和免疫原性。  相似文献   
5.
摘要:【目的】比较恒定链(invariant chain,Ii) CLIP 的2个片段(PBS、GBS)影响免疫载体增强体液免疫的效果。【方法】首先,构建了基于小鼠Ii功能片段与新城疫病毒抗原肽F2的6个嵌合体(Cyt/TM/F2、Cyt/TM/F2/GBS、Cyt/TM/PBS/F2、Cyt/TM/F2/TRIM、Cyt/TM/F2/GBS/TRIM、Cyt/TM/PBS/F2/TRIM);其次,定向克隆至原核表达载体pET-32a中,并转化大肠杆菌Rosetta(DE3)诱导表达和纯化目的蛋白;最后,免疫小鼠,经间接ELISA法测定血清抗体效价,以及比较分析不同嵌合体免疫组免疫效果。【结果】一是所构建的含不同Ii功能片段/F2嵌合体的6个免疫组,均比单独F2的免疫组提高抗体水平1.5-4.9倍;二是在上述6个免疫组中,含CLIP的PBS或GBS的免疫组比不含CLIP 的免疫组增强1.6-2.4倍;三是含PBS比含GBS的免疫组增强1.5倍。【结论】Ii胞浆区、跨膜区具有增强免疫效果的作用,而CLIP的PBS在Ii免疫载体中的作用优于GBS。  相似文献   
6.
禽流感病毒血凝素蛋白的结构、功能与表达   总被引:1,自引:0,他引:1  
血凝素蛋白(HA)既是一种重要吸附蛋白,介导禽流感病毒吸附和穿入宿主细胞而发挥致病作用,也是一种良好的保护性抗原,对宿主抵抗禽流感起到了决定性保护作用。研究HA蛋白对揭示禽流感病毒的致病机理和免疫防治禽流感均具有重要意义。本文重点概述了HA蛋白的结构、功能和蛋白表达方面的研究进展,并对HA蛋白在禽流感疫苗中的应用进行了探讨。  相似文献   
7.
传染性法氏囊病毒VP2 蛋白的分子生物学研究进展   总被引:4,自引:0,他引:4  
本文综述了IBDV的保护性抗原蛋白VP2与病毒形态、毒力变异、抗原变异间的关系及在诱导宿主细胞凋亡中的作用。同时也探讨了其在新型疫苗开发中的应用等方面的研究进展。  相似文献   
8.
应用RACE法克隆鸽恒定链基因的研究   总被引:1,自引:0,他引:1       下载免费PDF全文
刘岗  仲大莲  刘雪兰  余为一 《遗传》2008,30(1):77-80
为比较禽类恒定链的结构和功能, 应用RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends) 技术首次克隆并鉴定了鸽恒定链基因。首先用一对含高度保守的DNA片段的简并引物, 从鸽脾细胞RNA扩增部分恒定链片段, 接着测序并设计新引物分别从5′和3′RACE扩增延长该片段。最后根据全基因的序列设计上、下游引物,获得大小为1 050 bp的全长cDNA。比较核苷酸序列, 鸽与鸡的Ii链同源性达到82.8%, 而与人等其它动物的同源性则在52.0%以上; 其中633 bp的开放阅读框编码211个氨基酸残基的前体蛋白。推导和分析氨基酸序列表明, 分子结构与鸡恒定链相似, 其中有些氨基酸残基表现出较高的保守性。  相似文献   
9.
B-LB基因编码的鸡MHC(major histocompatibility complex)II类分子B链在MHCII类分子递呈抗原中起重要作用。应用RT-PCR方法从鸡淋巴细胞中扩增了全长B-LB基因,其大小为792bp。进~步经脂质体法,将其分别转染COS7和P815。B—LB基因表达在COS7的浆膜。经G418的筛选(0.6ms/mL)得到稳定表达的B-馏的细胞株P815(B-LB)。将其培养10代次后,在RT-PCR中能获得相应DNA片段。上述结果表明B—LB基因能够在动物真核细胞中表达,并成功建立了能够稳定表达B-曲基因的P815(B-LB)细胞株,为进一步研究MHCII类分子B链在免疫应答中的作用奠定了基础。  相似文献   
10.
目的了解安徽省水产动物常见病原菌的耐药现状和耐药机制,探讨27种单味中草药和5个中草药复方配伍对耐药菌株的体外抑菌活性。方法分别采用K-B纸片琼脂扩散法和双纸片增效法检测常见病原菌的耐药性和ESBLs,同时使用平板打孔法和改良微量稀释法检测中草药的体外抑菌活性。结果4种常见病原菌的23个分离株对常用的5类抗生素均呈现不同程度的耐药性,其中铜绿假单胞菌的耐药谱最广,对14种抗生素的耐药率均为100%。供试菌中仅检出2株铜绿假单胞菌为产ESBLs株,检出率为8.69%。黄连、大黄、金银花、夏枯草、地锦草、丹皮、马齿苋和连翘8种中草药对供试耐药株均有较强的抑制活性,其中黄连、大黄和金银花的抑菌活性尤为明显,其MIC值分别介于1.96~125 g/L、7.84~125 g/L和15.68~250 g/L。5个复方配伍中以复方5的配伍效果最好,其MIC值为1.96~15.68 g/L,抑菌活性显著优于单味药;其次是复方1和复方3,其MIC值为1.96~62.72 g/L;复方2和复方4的配伍效果差,其MIC值为31.36~125 g/L。结论4种23株常见病原菌均为耐药菌株,产生ESBLs是铜绿假单胞菌高度多重耐药的主要机制之一。黄连、大黄、金银花和复方5配伍对常见病原菌耐药株具有良好的抑菌活性。  相似文献   
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