一种新的延胡索酸水合酶抗体的制备及功能研究

延胡索酸水合酶(fumarate hydratase,FH)是三羧酸循环(tricarboxylic acid cycle,TCA)中的一个关键性酶。FH的基因突变将导致延胡索酸合酶缺乏症、遗传性平滑肌瘤和肾细胞癌(hereditary leiomyomatosis and renal cell carcinoma,HLRCC)等疾病。FH缺失导致HLRCC分子的确切生物学机制尚不明确。作者将FH基因片段克隆到原核表达载体上,在大肠杆菌中表达GST-FH(400-510)融合蛋白。该融合蛋白为抗原免疫小鼠获得抗体,通过免疫印迹实验证明了该抗体的特异性并发现FH在心脏和肝脏中的含量较高。通过免疫共沉淀实验发现,在大鼠肝脏组织中FH可能与多个蛋白形成蛋白复合物。     

去甲基万古霉素菌种低温冷冻、冷干保藏条件优化及10 年菌种保藏效果

【目的】针对去甲基万古霉素产生菌不耐保藏的问题,改进菌种保藏方法,对超低温液氮保藏、-80°C低温冷冻保藏、冷干保藏方法跟踪考察10年保藏稳定性,评价不同保藏方法对去甲基万古霉素产生菌的保藏适用性。【方法】采用甘油作基础保护剂进行超低温液氮保藏和-80°C低温冷冻保藏,采用脱脂牛奶作基础保护剂进行冷干保藏,针对超低温液氮保藏进行降温速率考察,研究非渗透性冷冻保护剂海藻糖、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等对3种保藏方法的冻存影响,对优选出的保藏方法进行10年跟踪考察。【结果】3种保藏方法冻后菌种存活率依次为:-80°C低温冷冻保藏超低温液氮保藏冷干保藏。液氮保藏最适降温速率为快速冷冻。优选出最佳保护剂配方:超低温液氮保藏为甘油8.0%,海藻糖3.5%;-80°C低温冷冻保藏为甘油6.0%,PVP 5.0%;冷干保藏为脱脂牛奶,6.0%海藻糖。采用优化保藏条件,液氮保藏10年存活率稳定在70.6%,菌种发酵水平为入藏水平的92.9%。【结论】在优化条件下,尤以超低温液氮保藏适合于去甲基万古霉素产生菌长期保藏。     

氨基酸前体对棘白霉素B发酵合成的影响

以构巢曲霉(Aspergillus nidulans)发酵生产酯肽类化合物棘白霉素B,研究棘白霉素B己肽环结构的前体性氨基酸对产物的代谢影响,显示出脯氨酸、鸟氨酸、苏氨酸在发酵48 h 补入,对发酵代谢有促进作用.利用响应面统计学方法进行前体及有机氮源配方优化,得出优化配方:脯氨酸4.55 mg/mL,鸟氨酸1.85 mg/mL,苏氨酸0.97 mg/mL,棉籽粉2.62％,摇瓶发酵水平达到3 270μg/mL,较原水平提高30.2％.新工艺在50 L罐上放大,发酵水平进一步提高至3 520 μg/mL,显示出良好的工业应用前景.