油田采出水石油烃降解菌分离、鉴定及高通量选育复合诱变菌株

【目的】为解决石油烃类物质(Total petroleum hydrocarbons,TPHs)引起的环境污染问题,提高野生型菌株对TPHs的降解率。【方法】基于微生物修复技术,通过富集培养、初筛和复筛从油田采出水中分离TPHs优势降解菌株,经形态学、生理生化以及16S rRNA基因序列分析确定其种属。采用紫外线与等离子体复合诱变技术,以96孔板发酵法替代摇瓶培养发酵,采用以多功能酶标仪双波长紫外光谱法测定为基础的高通量筛选方法选育TPHs高效降解菌株,并通过方差分析检验突变株的遗传稳定性。【结果】经鉴定,分离自采出水的野生型菌株PW04为多食鞘氨醇杆菌(Sphingobacterium multivorum)。通过复合诱变获得了3株能够高效降解TPHs的突变菌株：S. multivorum PW04-H10、S. multivorum PW04-G9、S. multivorum PW04-A6,降解率分别为85.1%、82.7%、82.9%。遗传稳定性分析结果表明这3株菌遗传性能均稳定。【结论】经分离、诱变选育出的TPHs高效降解菌株其降解率最高达85.1%,与野生型菌株相比提高了48%,可显著降低环境中TPHs含量,有效修复原油污染环境。     

一株扩展青霉拮抗菌的分离、鉴定及抑菌活性物质

【目的】筛选有效抑制扩展青霉(Penicillium expansum)的拮抗菌,并鉴定其所产抑菌物质的主要种类及相对含量。【方法】从苹果表面分离到拮抗扩展青霉的菌株BA-16,经形态学、生理生化及16S r RNA基因序列分析对该菌进行鉴定;根据已知脂肽类抗生素合成相关基因序列设计3对特异性引物对菌株BA-16进行检测,对PCR产物克隆、测序和BLAST分析,采用酸沉淀法从菌株发酵液中制备出抑菌物质粗提液,对活性粗提物进行HPLC和MALDI-TOF-MS分析。【结果】经鉴定,BA-16被鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),所得PCR产物经测序和BLAST分析,证实BA-16带有sfp和fen B基因。HPLC和MS结果显示菌株发酵液中含有Fengycin和Surfactin两种脂肽类产物,Fengycin是拮抗扩展青霉的主要因素。【结论】本研究对于苹果采后青霉病的生物防治具有良好的应用开发前景。     

一株产甘露糖赤藓糖醇脂菌株的筛选及其产物分析

【目的】解决石油长链烃类物质引起的环境污染问题,筛选可以高效降解石油烃的产糖脂类生物表面活性剂菌株。【方法】采用血平板、油平板法,从葡萄皮表面分离到6株产糖脂类的真菌,比较各菌株的排油性能,通过PCR扩增合成糖脂类表面活性剂的关键基因,筛选到一株具有emtl序列的真菌K6。经形态学、生理生化测定和分子系统发育分析(5.8S,ITS1,ITS2)对菌株进行鉴定,而且通过TLC和HPLC分析该菌株的代谢产物。【结果】经鉴定,该菌为Pseudozyma churashimaensis,可产甘露糖赤藓糖醇脂。石油烃降解实验表明,菌株K6具有很强的乳化性能和降解石油烃的能力,其石油烃降解率可达70.17%。【结论】菌株K6具有产生物表面活性剂和降解长链石油烃类的能力,其对石油污染环境的生物修复具有重要的现实意义。     

中国五台山多目涡虫(涡虫纲,三肠目)染色体及核型分析

利用空气干燥法对采自山西茶铺和镇海寺的五台山多目涡虫Polycelis wutaishanica Liu,1996的核型进行分析,结果表明:五台山多目涡虫体细胞有42条染色体,为2倍体,核型公式2n=2x=42 =28m 14sm,其中28条为中部着丝粒染色体, 14条为亚中部着丝粒染色体,第1对中部着丝粒染色体明显比其它染色体长。五台山多目涡虫的核型属于2C型。