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1.
血吸虫新抗原基因SjMF4的克隆、表达及功能分析   总被引:7,自引:0,他引:7  
根据东方田鼠天然抗日本血吸虫病的现象 ,首次利用东方田鼠健康血清结合羊抗小鼠IgG3抗体免疫筛选日本血吸虫 (中国大陆株 )成虫cDNA表达型文库 ,获得两个阳性克隆 ,采用RACE技术对其中一cDNA片段进行扩增 ,获一含ORF的基因片段。序列分析表明该基因为一日本血吸虫新基因 ,命名为SjMF4 (SchistosomajaponicumMicrotusfortis 4 ,SjMF4 )。利用ExPASy的ScanProsite软件对此基因编码的蛋白质结构和功能域进行了分析。把该基因克隆到原核表达载体pET 2 8a( ) ,Western印迹显示表达产物具有良好的抗原性。又构建了真核表达质粒pcD NA3 SjMF4重组DNA疫苗 ,小鼠实验表明可诱导一定的保护作用。  相似文献
2.
日本血吸虫虫卵、童虫和雌雄成虫膜蛋白的双向电泳   总被引:4,自引:0,他引:4  
血吸虫寄生生活复杂,中间宿主和终末宿主转换,有性繁殖和无性繁殖交替,由其感染引起的血吸虫病仍严重危害人畜健康(陈贤义等,2002).研究表明,血吸虫不仅能利用宿主的免疫信号分子伪装自己获得宿主的免疫兼容(Salzet et al.,2000),而且还在血吸虫中克隆到宿主信号分子的受体(Ahmed et al.,2001).  相似文献
3.
日本血吸虫期别差异表达基因文库的构建及分析   总被引:4,自引:0,他引:4       下载免费PDF全文
为从期别差异表达基因分析入手研究血吸虫的生长发育机制,应用抑制性消减杂交 (suppressed subtractive hybridization , SSH) 技术首次构建了日本血吸虫尾蚴、虫卵和成虫的期别差异表达基因文库 . 经消减效率分析和三种文库克隆的 EST 的期别差异性鉴定,表明所建文库质量较高,为在整个基因组水平分离血吸虫的差异表达基因提供了重要材料 . 由三个文库选择 257 个插入片段大于 500 bp 的克隆测定了 EST 序列 . 同源性分析结果表明 257 个 EST 代表 182 种血吸虫基因,其中有 22 种为血吸虫已知基因,有 128 种为血吸虫已知 EST ,有 32 种为新发现的血吸虫基因 . 对 EST 编码蛋白的功能预测结果显示:尾蚴消减文库的基因多与运动、能量代谢、转录调节及致病性相关;虫卵消减文库的基因可能参与信号转导、细胞粘附、蛋白质和碳水化合物的代谢以及抗氧化反应;成虫消减文库的基因多参与蛋白质的合成、转运及分解代谢,参与虫体的运动等 . 大规模分离、分析血吸虫期别差异表达基因将对从分子水平去解读血吸虫的生长发育机制,筛选高效疫苗候选抗原、药物靶标及诊断制剂有重要意义 .  相似文献
4.
寻找保护性效果更好的抗原分子一直是抗血吸虫病疫苗研发领域的热点和难点。国内外筛选日本血吸虫 (Schisto somajaponicum)保护性抗原分子采取的主要策略有 2种 :一是通过构建血吸虫某一生活史cDNA文库 ,采用探针 (核酸或抗体 )从文库或文库表达产物中筛选出特异性抗原基因 ,再逐一评估其保护性效果。该策略的主要缺陷是筛选操作费时费力 ,且效率不高。另一途径则是根据已知的曼氏血吸虫或其它种 (株 )保护性抗原基因序列 ,通过PCR或核酸探针等技术筛选与之同源的相应抗原分子 ,这一方法 (尤其是PCR方法 )尽…  相似文献
5.
由Wnt基因家族产物与其它相关基因产物构成的Wnt信号通路,是细胞发育和生长调节的一个关键途径,对动物的发育特别是生殖系统的发育起重要的调节作用。在人类和小鼠中,Wnt4蛋白是性腺分化过程中主要调节因子,在胚胎发育中起着关键作用。利用RACE技术从日本血吸虫19d童虫中首次扩增到一个Wnt家族基因,序列分析表明该基因的完整编码框含1311bp,编码436个氨基酸,理论分子量49.6kD。同源性分析结果表明,该基因的氨基酸序列具有典型Wnt家族蛋白特征,与日本三角涡虫、人Wnt4的氨基酸序列相似性分别达43%、37%,推测为血吸虫的Wnt4基因,命名为Sjwnt4(GenBank登陆号DQ643829)。实时定量PCR分析显示该基因在14d童虫、19d童虫、31d虫体、44d雌虫及44d雄虫中均有表达,其中19d童虫中的表达量明显高于其它发育阶段,44d雌虫中的表达量明显高于雄虫。构建了该基因的原核表达载体pGEX-4T-2-Sjwnt4,应用大肠杆菌系统进行了表达,表达蛋白以包涵体形式存在,Western印迹显示表达产物能被日本血吸虫成虫粗抗原免疫血清所识别。Sjwnt4基因及其表达产物的获得,为探索Wnt信号通路对血吸虫发育、生殖的调节提供了重要基础。  相似文献
6.
通过蚀斑形成试验比较鸡源(F48E9株)和鹅源(NA-1株)新城疫病毒在不同细胞的蚀斑形成能力,结果显示F48E9、NA-1两种病毒在Vero细胞、鸡胚成纤维细胞(CEF)和鹅胚成纤维细胞(GEF)上蚀斑形成能力存在明显的差异,在GEF上NA-1株的蚀斑形成能力强于F48E9株,而在CEF上弱于F48E9株,在Vero细胞上NA-1株的蚀斑形成能力稍强于F48E9株,表明病毒蚀斑形成特性与宿主种属特性一致。通过电镜观察两株病毒以相同感染量感染Vero细胞后的病毒形态发生过程。NA-1株和F48E9株病毒在Vero细胞中不同时段的形态发生的进程上存在区别,无论从出芽时间还是出芽后病毒囊膜的完整性上,NA-1株均优于F48E9株,提示NA-1株病毒对宿主环境的适应力较强。  相似文献
7.
摘要:【目的】神经节苷脂是新城疫病毒入侵宿主细胞的受体,但不同动物源性的新城疫病毒利用受体的特性是否存在差异尚不明确。以鹅源新城疫病毒NA-1株和鸡源新城疫病毒F48E9株为研究对象,比较两株病毒受体结合特性的差异。【方法】提取鸡胚和鹅胚成纤维细胞新城疫病毒受体成分——神经节苷脂,用高效薄层层析法比较两种细胞所含神经节苷脂的类型和含量;通过高效薄层层析-病毒覆盖结合法比较两种病毒与不同细胞神经节苷脂的结合特性,最后通过病毒红细胞吸附抑制试验进一步验证神经节苷脂与病毒之间的相互作用关系。【结果】鸡胚和鹅胚成纤维细胞所含的神经节苷脂成分存在明显差异;高效薄层层析-病毒覆盖结合实验结果显示NA-1和F48E9与神经节苷脂的结合模式不同,NA-1主要与神经节苷脂GD1a结合,即包含双SAα2,3Gal末端的神经节苷脂,而F48E9可与更多类型的神经节苷脂结合,从单唾液酸到三唾液酸形式的神经节苷脂如GM1、GD1a、GD1b、GT1b等。【结论】鹅源新城疫病毒NA-1株和鸡源新城疫病毒F48E9株在入侵靶细胞时优先选择利用的受体不同。  相似文献
8.
本文采用Ca~2+指示剂的分光光谱法测定巨噬细胞(Mφ)内Ca~2+浓度([Ca~2+]i)、APAAP桥联酶标法检测Mφ膜上Ⅰa抗原的表达,研究肌醇磷脂代谢中第二信使分子甘油二酯(DG)在去甲肾上腺素(NE)促进MφⅠa表达效应中的作用,以进一步探讨NE效应的跨膜信息传递机制。结果表明:蛋白激酶C(PKC)抑制剂4αPDD(25μg/ml)虽不影响NE(10 ̄-8mol/L)升高Mφ[Ca ̄2+]i的效应,却显著减弱了NE促进MφⅠa抗原表达的效应;而PKC激动剂PMA(10nmol/L)本身促进MφⅠa抗原表达的作用不明显,也不能进一步增强NE促进MφⅠa抗原表达的效应。结果提示:DG激活的PKC系统也参与了NE促进MφⅠa抗原表达的信息传递过程,并与另一第二信使分子肌醇-1,4,5-三磷酸(IP_3)介导的Ca ̄2+途径协同发挥作用。  相似文献
9.
10.
背联体贻贝棘尾虫的每一虫腹面含有相当于正常棘尾虫的腹面纤毛系统,背联两虫任意一侧属于一虫的背面有4列背触毛,它们的排列分布相似于正常棘昆虫的第1—4列背触毛,另一虫背面打2列背触毛,它们相似于正常棘尾虫的第5、6列背触毛。结果表明,背联体棘尾虫是其中两虫各以背面第4列和第5列背触毛之间的皮层区相联接形成的。也有的背联体中背部皮层联接区有变化。无性分裂中背联两虫皮层纤毛结构的形态发生相似于正常棘尾虫,并且两者其皮层纤毛器如口围带、额腹横棘毛、左、右缘棘毛和背触毛等相应结构的发育是同步进行的,推测背联两虫的皮层发育既是相对独立的,又有某种机制控制着相互间的协调。背联体棘昆虫在无性生殖周期中总是经历着一个调节成单体的过程,认为这于背联两虫都具有一套结构功能正常的运动胞器(特别是口围带),而产生向不同方向运动的“不协调”的力有关。  相似文献
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