流行性乙型脑炎病毒(JEV)全长感染性克隆的制备及恢复病毒的获得

根据JEV病毒减毒株SA14—14—2基因组序列,设计覆盖全长的4对重叠引物,以提取的活疫苗病毒RNA为模板,RT—PCR扩增出4个片段,并克隆到质粒载体中,进一步构建两个半端分子克隆,然后将全长cDNA序列克隆到一个新改造的低拷贝质粒载体pBR—kpn中,构建我国流行性乙型脑炎病毒(JEV)基因组全长cDNA克隆。经过体外转录后得到的转录子转染BHK-21细胞,重新获得JEV的恢复病毒,通过生物学特性、分子生物学水平、蛋白水平等几个方面对恢复病毒进行鉴定。结果获得了稳定的全长cDNA克隆,转录子转染BHK-21细胞后,第4天开始出现细胞病变(CPE),第6～7天时CPE为 ,经过Vero细胞进一步放大培养后,间接免疫荧光实验和RT—PCR实验均为阳性。证实了构建的JEV的全长cDNA克隆有感染性,为进一步的研究奠定了基础。     

臭氧治疗不同类型阴道炎疗效的对比研究

目的:探讨臭氧治疗不同类型阴道炎的临床疗效.方法:采用完全随机法将450例阴道炎病例按1:1分为臭氧液治疗组与常规药物治疗对照组.通过观察患者症状、体征的变化及阴道分泌物实验室检查,对治疗效果进行对比分析.结果:①臭氧液治疗组治愈率与总有效率分别达到82.2%、92.9%,明显大于对照组61.8%治愈率、84.0%总有效率,比较两组显著具有显著性(P<0.01).②臭氧液治疗组细菌性阴道炎、念珠菌性阴道炎治愈率分别为93.8%、84.1%,总有效率分别为98.8%、97.0%,对照组治愈率分别为59.3%、62.4%,总有效率分别为84.0%、85.1%,差异比较具有显著性(P<0.01).③臭氧液治疗组滴虫性阴道炎治愈率、总有效率分别为62.1%、72.4%,小于对照组72.4%治愈率与86.2%总有效率,差异比较具有显著性(P<0.05).④臭氧液治疗组与对照组中混合性阴道炎治愈率分别为42.9%、50.9%,总有效率均为71.4%,差异比较无显著性(P>0.05).结论:臭氧液治疗阴道炎疗效显著,特别是在细菌性或念珠菌性阴道炎治疗中具有明显优势,值得推广应用.     

日本脑炎病毒(JEV)复制子表达载体的构建及其鉴定

在以往构建的JEV疫苗株SA14-14-2感染性克隆pBRkpn-JTF的基础上,构建了去除JEV结构区域基因(prM基因和E基因),保留非结构区域基因的复制子表达载体pCTCJEV、pCTMJEV,转染BHK-21细胞后,通过反转录PCR(RT-PCR)和间接免疫荧光实验(IFA)检测该载体的自主复制能力和蛋白表达情况,结果证实该载体在BHK-21细胞中能够自主复制并且表达非结构蛋白。进一步在该载体中插入报告基因EGFP,检测外源蛋白的表达情况,结果显示在转染复制子载体的24h后,荧光显微镜下能够看见绿色荧光蛋白的表达,阳性信号持续增强,能够维持10d左右,证实了构建的复制子载体pCTCJEV能够有效地表达外源蛋白,这为进一步建立以乙脑病毒复制子为基础的疫苗载体系统打下基础。     

八年制医学生妇产科临床实习教学法探讨

八年制医学生临床实习是理论应用于临床实践的过程,是八年制医学生教学的重点。传统”填鸭式”的教学方法限制了八年制医学生的进一步发展,不能满足高素质教育的要求。PBL教学法是以问题为基础的教学方法。大多研究表明,PBL影响知识的应用而不影响知识的获得,而EBM一循证医学的思维恰好是医学生获取知识的最佳指导思想。本文将PBL教学法和EBM思维结合到八年制医学生妇产科实际临床教学中发现,虽然在理论考试成绩上无明显差异,但在临床病例分析能力、临床证据采集能力、教学方式满意程度等方面均优于仅用PBL或者是仅用EBM的教学组。PBL教学法联合EBM思维更能提高八年制医学生分析问题、解决问题的能力,值得进一步推广应用。     

日本脑炎病毒C蛋白对其复制子载体自主复制活性的影响

为了研制具有高效自主复制能力的日本脑炎病毒 (JEV) 复制子载体,验证其作为新型复制子疫苗载体的可能性。以保留全长核心蛋白C基因的JEV复制子载体pCTCJEV为基础,通过PCR的方法减短C蛋白的部分基因序列,分别保留C23和C68位氨基酸,以Lac Z基因作为报告基因,构建了C基因长短不同的JEV复制子载体pCMW-2M-1LACZ、pCMW-2M-3LACZ。将复制子载体转染表达JEV结构蛋白的细胞系CME-4,通过Lac Z的表达检测JEV复制子载体表达外源蛋白的能力,反映了JEV的系列复制子载体的自主复制能力。结果保留C基因全长,C68、C23的复制子载体表达外源蛋白的能力相当,以上结果说明仅仅保留C蛋白的69个核苷酸即可保留JEV复制子载体的自主复制能力,为进一步优化JEV复制子载体,将该载体开发研制成为高效表达外源蛋白的疫苗载体提供了依据。     

稳定表达乙脑病毒结构蛋白的细胞系的建立

以乙型脑炎病毒SA14-14-2疫苗株全长基因组克隆质粒pBR-JTF为模板,通过PCR分别扩增prM-E及C-prM-E基因片段,构建表达乙型脑炎病毒结构蛋白的真核表达质粒pCJE-ME及pCJE-CME。将这2种重组质粒用脂质体法转染BHK-21细胞后,质粒pCJE-ME表现明显的细胞毒性,转染细胞不能存活;质粒pCJE-cME可导致筛选到表达JEV结构蛋白的稳定细胞系,这种稳定表达JEV结构蛋白的细胞系通过PCR扩增细胞系基因组、ELISA、Western Blot、间接免疫荧光等方法得到鉴定。研究结果表明在C蛋白存在下,乙型脑炎病毒C-prM-E蛋白可以在BHK细胞中稳定表达,为研制JEV新型复制子颗粒疫苗提供了便利工具。     

重组黄热病毒E蛋白结构域Ⅲ作为亚单位疫苗的抗原性和免疫原性

目的：表达纯化黄热病毒（YFV）囊膜蛋白（E蛋白）结构域Ⅲ,研究其作为亚单位疫苗预防YFV、日本脑炎病毒（JEV）感染的可能。方法：扩增YFVE蛋白结构域Ⅲ（YFDⅢ）的cDNA片段333bp,将其连接到原核表达载体pET-32a（＋）中,构建原核表达载体pET-YFDⅢ,转化感受态大肠杆菌Rosetta（DE3）,IPTG诱导表达重组YFDⅢ;用纯化的YFDⅢ免疫新西兰兔和BALB/c鼠,检测相关抗体滴度。结果：在大肠杆菌中可溶性表达了YFDⅢ融合蛋白,表达量约占菌体蛋白的50%;Western印迹及ELISA分析表明,纯化的YFDⅢ具有良好的抗原性和免疫原性;利用纯化的YFDⅢ免疫新西兰兔,获得了高达1∶4×105滴度的抗YFV抗体和1∶2×104滴度的抗JEV抗体;利用纯化的YFDⅢ免疫BALB/c鼠,获得了1∶7×104滴度的抗YFV抗体和1∶2×103滴度的抗JEV抗体。结论：重组YFDⅢ有较好的免疫原性,具有开发成亚单位疫苗的潜能。     

乙型脑炎疫苗研究进展

乙型脑炎（乙脑）的流行是世界性的公共卫生问题之一,其流行范围正逐步扩大。目前对于乙脑尚无特效治疗手段,因此预防乙脑的发生尤为重要。随着对日本脑炎病毒研究的深入,利用基因工程技术研制新型候选疫苗已成为预防乙脑新的发展方向。我们简要综述了乙型脑炎病毒的基因组结构及其蛋白功能,以及国内外乙型脑炎疫苗研发的新进展。     

孕妇血中细胞粘附因子-1、白介素-6与胎膜早破的关系

胎膜早破的确切病因尚不清楚,胎膜早破可能是由单一或多种因素共同作用的结果[1].近年来的研究不断证实感染是胎膜早破发生发展的重要因素之一,提示细胞粘附因子-1、白介素-6等细胞因子可能是预测胎膜早破,尤其是合并感染的胎膜早破的可信指标.