免疫治疗背景下提高临床肿瘤教学水平的探讨

肿瘤发病率的日益攀升以及临床肿瘤学的迅速发展,对培养专业的临床肿瘤学人才提出了更高的要求。随着第一个细胞免疫治疗药物Sipuleucel-T被美国FDA批准用于晚期前列腺癌的治疗,肿瘤治疗进入免疫治疗的新时代,现有传统临床肿瘤学教学方法及观念已经不能适应目前的要求,因此必须提高临床教学水平。本文在肿瘤免疫治疗迅速发展背景下,对如何提高临床肿瘤教学水平进行思考与探讨,通过加强肿瘤分子生物学及细胞分子免疫学理论教学,以及在教学过程中贯穿循证医学与个体化治疗相结合的理念、引入多学科参与的肿瘤综合治疗模式,并强调心理干预和人文关怀的重要性,兼顾教学理论和临床实践最新进展及趋势,有效地帮助学生树立全面、科学的临床肿瘤治疗理念,掌握改善临床肿瘤治疗的有效方法,切实提升临床肿瘤学的教学质量和水平,培养出能胜任现代临床肿瘤学实践需求的专业人才。     

ncRNA候选基因spt1的克隆与初步分析

在用suc2信号肽捕获系统对小鼠胚胎cDNA文库筛选的过程中,反复获得一个相同的强阳性克隆,命名为spt1。对该克隆的序列分析表明：插入序列由697bp组成,6个开放阅读框中共有37个启始密码子(ATG)和80个终止密码子(TGA、TAG、TAA);没有较大的有意义开放读框存在。经BLAST分析,结果显示该序列定位于小鼠第17号染色体长臂,没有发现同源基因。NortherTl blot和RT-PCR分析表明,该序列仅表达于小鼠卵巢组织,全长约4．5～5．0kb。酵母转化和序列截短实验提示,该序列能够介导蔗糖转换酶向细胞外的分泌。因此,推测spt1很有可能是一个新的非编码RNA的一部分,参与蛋白质的分泌过程。     

ncRNA候选基因sptl的克隆与初步分析

在用suc2信号肽捕获系统对小鼠胚胎cDNA文库筛选的过程中,反复获得一个相同的强阳性克隆,命名为sptl.对该克隆的序列分析表明插入序列由697 bp组成,6个开放阅读框中共有37个启始密码子(ATG)和80个终止密码子(TGA、TAG、TAA);没有较大的有意义开放读框存在.经BLAST分析,结果显示该序列定位于小鼠第17号染色体长臂,没有发现同源基因.Northern blot和RT-PCR分析表明,该序列仅表达于小鼠卵巢组织,全长约4.5～5.0kb.酵母转化和序列截短实验提示,该序列能够介导蔗糖转换酶向细胞外的分泌.因此,推测sptl很有可能是一个新的非编码RNA的一部分,参与蛋白质的分泌过程.     

带有蛋白转导结构域的Bcr/Abl癌蛋白片段的表达及其跨膜转运

HIV 1编码的反式激活蛋白TAT具有将细胞外蛋白转导进入细胞的基序 ,称为蛋白转导结构域 (PTD) .为研究PTD介导的PTD Bcr Abl融合蛋白的跨膜转运 ,合成了编码PTD的基因片段 ,并与PCR扩增的慢性粒细胞白血病癌蛋白bcr abl基因片段融合 .在大肠杆菌中表达纯化了融合蛋白 ,将纯化的融合蛋白加入培养的HL60细胞和C2C12细胞后 ,发现PTD基序可以介导Bcr Abl蛋白自由从细胞外跨膜转导进入细胞内 .研究结果可能为用外源蛋白负载 (loading)免疫活性细胞如抗原提呈细胞提供新的途径 .     

针对uPA的siRNA对人乳腺癌细胞侵袭的抑制作用

目的:通过RNA干涉的方法抑制乳腺癌细胞中uPA的表达,观察uPA的表达抑制后对肿瘤细胞的体外侵袭能力的影响。方法:(1)构建可以表达针对uPA的siRNA的干涉载体,转染高侵袭性人乳腺癌细胞系MDA-MB231,G418抗性筛选,挑选单克隆株;(2)分别通过RT-PCR和WesternBlot的方法检测uPA的表达;(3)平板克隆形成试验检测转染前后肿瘤细胞的克隆形成能力;4BovdenchamberAssay检测肿瘤细胞体外侵袭能力。结果:(1)可以稳定表达针对uPA的siRNA的单克隆株,uPA的表达水平显著下降;(2)转染了针对uPA的siRNA的单克隆株的克隆形成能力降低;(3)转染了针对uPA的siRNA的单克隆株体外侵袭能力与原代细胞MDA-MB231相比明显受到抑制。结论:uPA在人乳腺癌侵袭行为中发挥重要的作用,针对uPA的siRNA可以显著降低uPA的表达,从而抑制肿瘤细胞的侵袭,可望成为抗肿瘤侵袭治疗的一种有效手段。     

信号肽捕获系统的建立

细胞分泌蛋白的分泌有赖于蛋白质N端的信号肽的存在,利用酵母建立了从cDNA文库中筛选编码信号肽的基因片段的遗传系统,为此,用一步基因破坏法对酿酒酵母EGY48基因组中的suc2基因（编码酵母蔗糖转换酶）进行了定位突变,获得了无蔗糖转换酶表达的酵母株EGY48－suc。将无信号肽的suc 2成熟肽基因克隆于酵母乙 氢酶（ADHI）基因启动子下游,得到用于文库筛选的酵母真核表达工体,启动子与成熟肽基因之间为多克隆位 ,用于插入待筛选的CDNA文库,用此载体转化酵母EGY48－suc,所得克隆可以在葡萄糖为碳源的培养基上生长,但不能在以棉子糖为碳源的培养基上生长,在suc 2成熟肽基因前分别插入suc 2信号肽基因片段或人IL－2受体α链信号肽基因片段,然后转染EGY48－suc,所得克隆既能在以葡萄糖为碳源的培养基上生长,也能在以棉子糖为碳源的培养基上生长,表明构建的系统可用于筛选插篱多克隆位点cDNA片段是否具有编码信号肽的功能。     

眼科以咽部瘙痒为首发症状的心肌梗死1 例- 附文献复习

目的:提高异位疼痛为首发症状心肌梗死的临床警惕性与确诊率。方法:通过我院不典型心肌梗死病例1例就诊过程进行回顾性追溯分析,进行相关文献复习,总结提高诊断准确性,减少误诊的经验方法。结果:因诊断及时,患者经积极的抢救治疗,症状改善,治愈出院。结论:提高对异位疼痛为首发症状心肌梗死的警惕,拓宽诊断思维,全面体检,尤其注意心电图:动态心电图、心肌酶谱的监测,及时确诊,以尽量减少不典型心肌梗死的误诊。     

用suc2信号肽捕获系统筛选小鼠胚胎cDNA文库基因

PCR扩增 1 1d小鼠胚胎cDNA文库插入片段 ,将 0 .5～ 2 0kb的扩增产物插入筛选载体的多克隆位点 ,转化suc2基因缺陷酵母宿主菌 .然后将约 1 0 5个酵母菌落接种于选择性平板上进行筛选 ,得到了 1 82个可在选择性培养基上生长的菌落 .PCR扩增显示 ,插入片段大小分布于 0 1～ 1 5kb之间 .对其中 1 4个阳性菌落的重组子进行序列测定 ,分别代表 6种不同的基因序列 ,与报告基因都有正确的读框内融合 .其中两种基因序列反复被筛到 ,分别命名为spt1、spt2 .spt1 [gi:2 772 876 6 ],可能以非编码RNA的身份参与蛋白质向细胞外分泌的过程 ,而spt2编码多个连续的赖氨酸 ,可能通过非经典途径介导蛋白质的分泌     

LIM蛋白KyoT2与人类紧密连接蛋白2的相互作用

KyoT是一种LIM结构域蛋白,是以RBP－J为诱饵蛋白通过酵母双杂交系统得到的新分子,KyoT2可以抑制RBP－J介导的转录,以KyoT2为诱饵蛋白,通过酵母双杂交筛选得到了人类紧密连接蛋白2（ZO－2）,的一种新的剪接体ZO－2－i3,序列分析表明,新的剪接体有19个外显子,与已发表序列比较,见ZO－2－i3分子的激酶后区发生了改变,为排除酵母双杂交实验的假阳性,实验首先在酵母中验证KyoT2与ZO－2-i3的体外直接相互作用并得到阳性结果,进而在大肠杆菌中原核表达纯化带有His标签的KyoT2蛋白,使用抗His标签的抗体,通过GST pull-down assay验证KyoT2与ZO－2－i3的体外直接相互作用,也获得阳性结果,并通过酵母实验初步确定了其作用位点,即KyoT2通过LIM2结构域与ZO－2-i3相互作用,本实验验证了KyoT2与Z－2－i3的相互作用,并初步确定其相互作用位点,对探讨KyoT的功能具有重要意义。     

LIM蛋白KyoT在小鼠胚胎发育中的表达

LIM结构域蛋白KyoT可与转录因子RBP-J相互作用而修饰Notch信号途径.以往发现KyoT在成年小鼠肺脏、肾脏和睾丸中有特异性表达,为进一步明确KyoT在小鼠胚胎阶段的表达,故分析了KyoT在小鼠不同胚胎阶段的表达水平变化和胚胎17天时各组织的表达分布.采用RNA印迹发现KyoT在小鼠胚胎的各阶段均表达,而且胚胎17天时表达水平最高.进一步RNA印迹和免疫组织化学检测发现,KyoT mRNA和蛋白质在胚胎17天小鼠的肺、肾以及肌肉中均有高水平的表达.上述结果提示,KyoT在小鼠胚胎发育过程中有特异性表达,且在胚胎17天时KyoT表达器官分布与成年小鼠相似,特异性定位于肺、肾和肌肉等脏器.