杀虫剂敌敌畏和除草剂丁草胺对饰纹姬蛙蝌蚪的急性毒性实验

采用静态换水法研究了杀虫剂敌敌畏、除草剂丁草胺对饰纹姬蛙(Microhyla ornata)蝌蚪的急性毒性影响。结果表明,杀虫剂敌敌畏对饰纹姬蛙蝌蚪的24-h、48-h的半致死浓度(LC50)分别为3．91μl／l和1．97μ/l;除草剂丁草胺对饰纹姬蛙蝌蚪的24-h LC50和48-h LC50分别为3．37μl／1和1．88μl／1,饰纹姬蛙蝌蚪对丁草胺的敏感性稍大于敌敌畏。     

乳杆菌bsh基因的高效表达及高活性酶蛋白获得

目的探讨乳杆菌bsh基因的高效表达及胆盐水解酶(BSH)的高活性酶蛋白获得。方法从本实验室保存的12株乳杆菌菌株中,通过Ca²⁺沉淀法初筛获得具BSH活性的菌株,根据GenBank上公布的16S rRNA同源性最高的乳杆菌的BSH全基因序列,设计特异性引物,PCR扩增获得bsh基因并克隆至表达载体pET28α,构建BL21pET28αbsh原核表达体系。经IPTG诱导后,对表达产物进行SDSPAGE分析及Western blot验证。结果研究表明在分子质量大小约35、37 kD处有预期条带出现,初步表明BSH蛋白表达成功。进而对表达各条件进行优化,最佳酶活条件为IPTG浓度0.1 mmol/L、诱导pH 6.5、诱导温度37 ℃、诱导时间1 h。经镍柱亲和层析纯化制备BSH制剂,邻苯三酚红钼法蛋白浓度测定为1 446 mg/dL,茚三酮法测酶活性最高可达21 248.27 U/(g·prot),为纯化前的635.4倍。结论乳杆菌bsh基因可溶性表达成功且高酶活BSH纯化获取为进一步的研究和药物转化奠定基础。