组蛋白去乙酰化酶HDAC2突变体构建及其SUMO修饰E3连接酶功能研究

目的:针对人源HDAC2外显子拼接功能区(CDS)基因,运用双管法突变体构建技术,构建HDAC2去乙酰化酶功能失活的片段缺失与关键位点突变体,检测突变体的SUMO化修饰E3连接酶功能活性,探究此HDAC2新功能是否受到其固有的去乙酰化酶功能的影响.方法:设计HDAC2 100-322位氨基酸密码子缺失的片段突变体引物与142位H→A点突变体引物,利用HDAC2的pcDNA3.1真核表达质粒为模板,通过耐热Fusion酶PCR反应双管扩增相应的单链DNA,并经退火、模板酶切、乙醇纯化、感受态转化、抗性平板筛选、测序鉴定获得两种HDAC2去乙酰化酶功能失活的pcDNA3.1真核表达质粒.免疫印迹检测突变体质粒在细胞中的表达,荧光素酶(LUC)报告基因实验检测其SUMO化修饰E3连接酶功能活性.结果:成功构建HDAC2去乙酰化功能失活的片段缺失突变体pcDNA3.1/HDAC2 (DEL 100-322AA)与关键位点突变体pcDNA3.1/HDAC2(142 H→A).C-myc标签的免疫印迹检测显示两种突变体在细胞中可稳定表达.将突变体转染进入三种细胞,LUC报告基因分析结果显示突变体仍具有E3连接酶功能活性.结论:HDAC2的E3连接酶功能不依赖于其去乙酰化酶活性,并且E3连接酶功能结构域位于其序列C端.     

菊头蝠耳廓方位对障碍回避能力的影响

实验在24只鲁氏菊头蝠(Rhinolophus rouxi)中进行。使用障碍回避测定法,观察了蝙蝠耳廓方位对其回避障碍能力的影响。发现动物耳廓呈自然状态时,回避障碍成功率最高,平均为86.64±8.29％。当将一侧耳廓向头部后方翻转后,其障碍回避的成功率降为71.37±6.59％,平均下降了15.27％。差异非常显著。当将双侧耳廓同时翻向头部后方,动物回避障碍能力进一步下降。较改变单侧耳廓方位的回避障碍成功率又平均下降11.08％,差异显著。实验结果提示,食虫蝙蝠的耳廓方位,在其回声定位中起着重要作用。文中还从听觉神经生理学方面,对论了耳廓方位影响回声定位行为的可能机理。     

SDF-1/CXCR4信号通路介导的低浓度过氧化氢对间充质干细胞促增殖、迁移作用及其机制

该文探讨了低浓度过氧化氢(H_2O_2)对骨髓间充质干细胞增殖、迁移及其相关信号通路的影响,阐明了低浓度H_2O_2发挥生物学效应的分子机制,为临床应用提供了可靠的实验证据。通过差速贴壁分离培养小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)。流式细胞术鉴定第三代BMSCs表面标志物。采用随机数字表法分组,以不同低浓度H_2O_2(0、25、50、100、150、200μmol/L)处理BMSCs 24 h,应用甲氮甲唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测干细胞表面标志物以及凋亡率,划痕实验和Transwell实验检测H_2O_2对细胞迁移能力的影响。Western blot检测细胞老化相关蛋白质p16和Cyclin D1、基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)与其受体CXCR4(CXC chomekine receptor 4)的表达以及相关下游信号通路PI3K/AKT/mTOR关键蛋白质的表达。流式细胞术检测结果显示,BMSCs细胞表面分化抗原CD29、CD44为阳性,CD34、CD45为阴性。MTT检测结果显示,与对照组相比,25和50μmol/L H_2O_2能有效促进BMSCs增殖(P0.05)。划痕实验和Transwell实验检结果显示,50μmol/L H_2O_2处理细胞能促进其迁移能力。流式细胞术检测显示,25、50和100μmol/L H_2O_2对干细胞凋亡无影响,150和200μmol/L H_2O_2则显著促进细胞凋亡(P0.01);25和50μmol/L低浓度H_2O_2处理干细胞能抑制老化相关蛋白质p16表达下降(P0.05,P0.01),相反,细胞周期蛋白Cyclin D1表达则显著升高(P0.05,P0.01),H_2O_2为200μmol/L时,p16表达上调(P0.01),而Cyclin D1下调(P0.01);同样,25~100μmol/L H_2O_2能增强细胞SDF-1和CXCR4的表达(P0.05)以及上调下游信号通路关键蛋白质PI3K、AKT、mTOR的磷酸化水平(P0.05)。结果表明,低浓H_2O_2度通过活化干细胞SDF-1/CXCR4信号轴,活化其下游PI3K/Akt/mTOR信号通路,促进干细胞增殖和迁移。     

兔坐骨神经火器伤模型的建立与选择

目的　建立并评价兔坐骨神经火器伤模型。方法　实验用大耳白兔 2 6只根据致伤钢珠质量和装药量随机分为 5组 ,其中A、B、C组用 0 3 8g钢珠 ,装药量分别为 0 3 5g、0 65g和 1 2 0g ;D、E组用 1 0 3g钢珠 ,装药量分别为 0 3 5g和 0 65g。致伤靶点为兔右后肢外侧坐骨神经体表投影线中点。观察指标有致伤钢珠入出口速度、传递能量、伤道入出口大小、骨折与血管伤发生情况、坐骨神经干损伤长度、坐骨神经病理变化。结果　A组 ( 62 1 6m s)和D组 ( 5 94 6m s)的致伤速度偏低 ,C组的 ( 12 99 8m s)偏高 ,B组 ( 93 9 8m s)和E组 ( 816 1m s)的较接近。A组 ( 18 7J)和D组 ( 4 4 2J)的传递能量较小 ,未合并骨折和血管伤 ,伤情较轻。C组 ( 183 2J)和E组 ( 165 2J)的传递能量较大 ,合并骨折和血管伤机率高 ,伤情较重。B组的传递能量适中 ( 80 0J) ,合并骨折和血管伤机率小。B、C、E组均可见典型坐骨神经火器伤病理改变 ,A、D组坐骨神经损伤程度较B、C、E组的轻。结论　在B组致伤条件下 ,既易造成典型的兔坐骨神经火器伤 ,也适于周围神经火器伤需长期观察的实验要求。