农杆菌转化获得转B.t.基因水稻及其生物学鉴定

以水稻主栽品种“秀水１１”和“春江１１”预培养４ｄ未成熟胚为转化受体,经农杆菌ＬＢＡ４４０４／ｐＧＢＩ４Ａ２Ｂ（含Ｂ．ｔ．基因）感染后,筛选出抗性愈伤组织并获得转化植株。其中抗性愈伤组织产生频率达４４％￣７０％,转化植株产生频率达２７％￣６４％。转基因植物总ＤＮＡ经ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分子杂交试验表明,Ｔ－ＤＮＡ上的外源基因已整合到水稻的基因组里。对转Ｂ．ｔ．基因水稻植株进行了两种水     

利用Inverse PCR快速筛选单个T-DNA拷贝转基因水稻植株的方法

为了获得单个T-DNA插入拷贝的植株, 我们建立了一套利用Inverse PCR(IPCR)快速检测转基因水稻中T-DNA拷贝数的方法。用IPCR的方法可以扩增出与已知T-DNA序列相邻的水稻基因组DNA未知序列,由此推测转基因水稻植株中T-DNA的拷贝数。我们共对15个转化株系20棵不同植株的DNA进行了IPCR检测。其中12株表现为T-DNA单拷贝插入,3株为双拷贝插入,1株为三拷贝插入。另外4株未检测到T-DNA插入拷贝。IPCR分析结果经过Southern杂交和测序的验证。     

青菜的高效再生和农杆菌介导B.t.及CpTI基因的转化

分别对培养基中适宜的激素组成和AgNO3 添加浓度进行研究 ,建立了青菜下胚轴和子叶外植体的高效再生系统 ,青菜品种“矮抗青”的最高芽分化频率下胚轴可达 6 5 % ,子叶为 5 2 %左右。在此基础上 ,对影响转化频率的不同因素进行了探讨 ,共获 94株卡那霉素抗性植株。对转基因植株总DNA的Southernblot ting分析证明 ,B .t .基因和CpTI基因已整合到青菜植株的细胞核基因组中。经过抗虫性筛选试验 ,从转基因植株的T3 代筛选到 7个转B .t.基因的抗虫纯合株系和 5个转CpTI基因的抗虫纯合株系 ,并进入田间小区青菜抗虫新品种试验     

根癌土壤杆菌介导的水稻高效转化和转基因植株的高频再生

利用根襄封杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ（Ｓｍｉｔｈ ｅｔ Ｔｏｗｎｓｅｎｄ）Ｃｏｎｎ）介导的转化方法对４个粳稻（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ Ｌ．ｓｓｐ．ｊａｐｏｎｉｃａ）品种和２个灿稻（Ｏ．ｓａｔｉｖａ ｓｓｐ．ｉｎｄｉｃａ）品种进行了转化。在对影响根癌土壤杆菌转化水稻效率的多种因素进行比较研究后,建立了根癌土壤杆菌介导的水稻高效转化和再生系统。将水稻成熟胚和未成熟胚来源的     

针叶树体细胞胚胎发生的研究进展

简要回顾了针叶树体细胞胚胎发生的研究历史,并对针叶树体细胞胚发生的基本程序、影响因素及应用前景了综述。     

针叶树体钿胞胚胎发生的研究进展

简要回顾了针叶树体细胞胚胎发生的研究历史,并对针叶树体细胞胚胎发生的基本程序、影响因素及应用前景作了综述。     

马尾松成熟合子胚的体细胞胚胎发生和植株再生

采用马尾松（Ｐｉｎｕｓｍ ａｓｓｏｎｉａｎａ Ｌａｍ ｂ．）成熟合子胚为起始外植体,在含２,４－Ｄ １０ ｍ ｇ／Ｌ,ＫＴ和ＢＡ 各４ ｍ ｇ／Ｌ的ＤＣＲ培养基上得到胚发生培养物。将白色半透明的愈伤组织（含早期原胚）在含２,４－Ｄ１．０ ｍ ｇ／Ｌ,ＫＴ和ＢＡ 各０．４ ｍ ｇ／Ｌ的ＤＣＲ培养基上保持并增殖。在附加９０００ ｍ ｇ／Ｌ肌醇的ＤＣＲ高渗培养基上得到粗壮的后期原胚。ＡＢＡ 和活性炭同时使用能促进子叶胚的形成,最高频率为３５．１％ 。在无激素培养基上,成熟体细胞胚萌发并进一步形成完整小植株     

云南松成熟胚的体细胞胚胎的发生研究

云南松（Ｐｉｎｕｓ ｙｕｎｎａｎｅｓｉｓ Ｆｒａｎｃｈ）是我国特产的一种优良森林树种。本研究采用云南松成熟合子胚为起始外植体,在含２,４－Ｄ１０ｍｇ／Ｌ,ＫＴ和ＢＡ各４ｍｇ／Ｌ的改良Ｐ６培养基上得到胚发生培养物。将白色半透明的胚性愈伤组织（含早期原胚）在含２,４－Ｄ１．０ｍｇ／Ｌ,ＫＴ和ＢＡ各０．４ｍｇ／Ｌ的培养基上保持并增殖。在附加９,０００ｍｇ／Ｌ肌醇的高渗培养基（含ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ,ＫＴ     

影响农杆菌介导的大豆子叶节遗传转化的因素

利用携带pCAMBIA1301质粒（含hpt和gus基因）的超毒根癌农杆菌菌株EHA105对大豆子叶节外植体进行遗传转化,研究了影响农杆菌介导的大豆子叶节遗传转化的因素。研究结果表明．农杆菌侵染液和共培养培养基中添加200μmok/L乙酰丁香酮和50mg／L抗坏血酸可以有效促进农杆菌对大豆子叶节的转化。农杆菌与子叶节共培养后羧苄青霉素（250mr／L）和头孢霉素（100mg／L）结合使用能有效抑制农杆菌过度繁殖并提高转化芽诱导频率;在转化细胞的分化和转化芽伸长过程中,改进的筛选策略可以明显改善对转化芽的筛选效果,从而提高转化频率。应用优化后的转化体系．获得了3个国内大豆主栽品种的转基因植株,PCR阳性植株频率为3．8％～7．6％。转化植株叶片总DNA的PCR和Southern blot实验表明,T-DNA上的外源基因已经整合到大豆基因组中。