黄酮类化合物清除羟自由基(HO·)功能及其构效关系研究

本文采用体外实验的方法,系统地研究了八种黄酮类植物化学物槲皮素、异槲皮素、芦丁、橙皮素、橙皮苷、柚皮素、柚皮苷和淫羊藿苷对羟自由基(HO.)的清除作用及构效关系。结果表明,八种黄酮类化合物中,只有槲皮素、芦丁和异槲皮素对HO·有明显的清除作用,在浓度为260μM时其对HO·清除率分别为30.69%±0.06、13.70%±0.04和10.23%±0.03。构效比较结果表明:黄酮类化合物C环C3位羟基和B环3’-4’邻位二羟基是其清除HO.的重要功能基团。本研究为选择有效的能清除HO·的膳食黄酮类化合物用于预防和治疗相关疾病提供了一定实验基础和理论依据。     

特异的中草药配糖体苷酶微生物及其发酵与酶学特性

配糖体是中草药主要有效成分之一。但是中草药成分并不是活性最佳结构,中草药口服后其成分在消化系统酶和微生物的作用下,转化为另一种结构吸收、起药效;但是体内的这种转化甚微,往往受到人的个体条件的影响。如果这种体内的转化反应在体外实现,中草药成分酶转化为高活性成分,将对创新药、中医药、公众营养食品和保健食品、功能化妆品等意义很大。为此,以下主要介绍本实验室研究过的中草药配糖体苷酶新微生物筛选、分类鉴定,特异的中草药配糖体苷酶的发酵产酶和其酶学特性。     

人参皂苷Rb3糖基水解酶的纯化及其反应特性

人参皂苷Rb3是三七茎叶皂苷的主要成分。为了充分利用廉价的三七茎叶皂苷,该研究以微生物Aspergillus sp. P90r菌为对象,综合运用生物转化的方法,经过提取、分离纯化和酶活力测定等步骤,最终以确定酶反应途径的方式得到了所产的特异性人参皂苷Rb3糖基水解酶的相关性质和动力学等反应特性。结果表明:该酶比Absidia sp. GRB3-X8r菌产酶活力高15%~25%,SDS-PAGE电泳结果测得分子量约为65.6ku,纯化后酶蛋白的含量为0.237 mg·mL~(-1),蛋白比活力可达到169 U·mg~(-1),纯化倍数为13.70,回收率为9.39%。人参皂苷Rb3糖基水解酶在pH=5.0的偏酸性环境下酶活力很高,最适反应条件:pH=3.0~5.0,温度45℃,其中在pH=4.0~6.0范围内相对稳定。该酶在20 min时进入混合级反应,酶反应米氏常数Km值为8.77 mmol·L~(-1),V_(max)为57.44 mmol·L~(-1)·h~(-1),在60 min时反应速度达到最大,Vmax趋于稳定,为66.63mmol·L~(-1)·h~(-1)。通过对酶的催化特性研究表明,该酶先水解Rb3的20-O-木糖基,其次水解3-O-葡萄糖基,最终催化反应产物中有F2和C-K生成。综上结果,微生物Aspergillus sp. P90r菌酶具有能水解人参皂苷Rb3木糖基和葡萄糖基的特异性。     

微生物薯蓣皂苷糖苷酶的分离纯化的研究

产薯蓣皂苷酶的sp.s00c菌发酵液,通过分级沉淀的分离方法,经离子交换柱提纯分离,得到聚丙烯酰胺凝胶电泳单点的酶,其酶蛋白分子量为59 ku,提纯酶最适酶反应温度为40℃,最适pH值为5.0。提纯酶不仅能水解薯蓣皂苷的鼠李糖基,也能水解薯蓣皂苷的葡萄糖基。