Sinorhizobium fredii WGF03胞外多糖分泌相关基因exoD功能初探

从费氏中华根瘤菌WGF03的基因组中克隆出与胞外多糖分泌密切相关的基因exoD,研究该基因对胞外多糖合成、菌株共生结瘤能力和固氮效率的影响。利用自杀性质粒pK18mobsacB,通过同源双交换法构建exoD基因的缺失突变体ΔexoD。实验发现:与野生菌株相比,突变株在YMA培养基平板上胞外多糖产量明显减少、运动能力也有所减弱;在NaCl浓度小于350 mmol/L范围内,菌体均能维持稳定生长;接种于大豆幼苗后,产生的根瘤数量较多,但个体小、形状不一,且固氮酶活也显著下降。研究结果说明exoD基因参与S.fredii WGF03胞外多糖的合成并影响菌株共生结瘤能力和固氮效率。     

卵巢癌细胞与巨噬细胞共培养对B7-H1表达的影响及机制

为了探讨卵巢癌细胞与巨噬细胞共培养后对B7．H1表达的影响及其可能机制,利用佛波酯（PMA）诱导THP-1或外周血单核细胞分化为巨噬细胞后,与人卵巢癌细胞株SKOV3体外非接触共培乔24h,qRT-PCR、Western blot以及流式细胞术分别检测SKOV3与巨噬细胞B7-H1的表达：进一步利用NF-KB、JAK2／STAT3、p38MAPK信号通路的抑制剂作用于共培养体系,检测B7-H1表达的变化,以探讨其机制。结果显示,共培养24h后,SKOV37L巨噬细胞B7-H1mRNA和蛋白的表达较非共培养组均显著升高（P〈0．05）,而阻断NF-κB、JAK2／STAT3、p38MAPK信号通路后,B7-H1的上调均明显被抑制（P〈0．05）。SKOV3与巨噬细胞共培养后B7-H1的表达升高伊〈0．05）,其机制可能涉及到NF—κB、JAK2／STAT3、p38MAPK信号通路的激活。     

宁夏枸杞叶总黄酮提取和纯化方法的优化

采用L9(3⁴)正交设计,以黄酮含量为指标,确定的宁夏枸杞叶总黄酮的最佳超声提取方法为: 30倍70%乙醇超声提取50 min,超声功率为250 W;纯化方法条件为: 5倍柱体积70%乙醇洗脱,浓度为4 mg/mL、pH值5.0的上样液,上样速度和洗脱流速均为1 mL/min。并以吸附率、解吸率、回收率等作为考察参数,对提取和纯化方法进行了验证。实验结果表明,该方法简便节时、易操作且毒害小,各项变异系数低。     

ITS序列的特点及其在昆虫学研究中的应用

随着PCR技术和DNA测序技术的成熟及广泛应用,分子数据的分析和利用逐渐成为生物学研究的重要手段。基因组中含有丰富的遗传信息,运用核基因序列或将核基因与线粒体基因序列相结合作为遗传标记,研究昆虫的系统发育,已成为分子系统学领域的发展趋势。由于长度适中、易于扩增、进化速度快、变异性高等优点,核糖体基因中内转录间隔区(ITS)已在昆虫系统学研究中得到广泛的应用。本文介绍了ITS序列的结构特点,重点对ITS序列在近缘种及种型快速鉴定、属及属上高级阶元系统学研究、谱系生物地理学及与其它基因联合分析昆虫系统进化关系等研究中的应用及前景进行了综述。     

入侵害虫甘薯凹胫跳甲的鉴定及线粒体基因组分析

【目的】基于形态学鉴定和分子生物学技术确认甘薯凹胫跳甲Chaetocnema confinis是否入侵中国大陆,测定甘薯凹胫跳甲线粒体基因组序列,分析基因组结构及其系统发育关系。【方法】应用显微镜观察从广东不同地点采集的甘薯凹胫跳甲成虫的形态特征,并扩增cox1基因DNA序列进行分子鉴定;利用Illumina MiSeq测序平台对甘薯凹胫跳甲线粒体基因组进行测序、拼装、注释和特征分析;基于亲缘关系相近种属的线粒体基因组序列进行共线性分析和构建系统发育树,分析基因重排和系统发育关系。【结果】形态和分子鉴定结果表明大陆甘薯上发现的跳甲为甘薯凹胫跳甲。甘薯凹胫跳甲线粒体基因组序列大小为15 685 bp,包括有13个蛋白质编码基因、2个rRNA基因、22个tRNA基因和1个非编码控制区;这37个基因之间排列紧凑,间隔总长度101 bp,排列顺序与模式昆虫Drosophila yakuba线粒体基因排列顺序相同。甘薯凹胫跳甲线粒体基因组A+T含量为77.3%,具有明显的AT偏向性。13个蛋白质编码基因的起始密码子均为ATN。在22个tRNA基因中除trnS1的DHU臂缺失,trnD, trnG, trnN和trnT的二级结构中缺少TψC环外,其余17个都能形成典型的三叶草式二级结构,另trnK的反密码子突变为UUU,trnS1的反密码子突变为UCU。甘薯凹胫跳甲的控制区片段长度仅有60 bp,是目前已报道的昆虫线粒体基因组中最短的控制区。基于线粒体基因组的系统发育分析表明,甘薯凹胫跳甲与跳甲亚科(Alticinae)黄曲条跳甲Phyllotreta striolata亲缘关系最近。【结论】甘薯凹胫跳甲已经入侵到中国大陆。本研究获得了甘薯凹胫跳甲的线粒体基因组序列,为防控甘薯凹胫跳甲和分析叶甲科(Chrysomelidae)各种属间的系统发育关系奠定了基础。     

宁夏枸杞不同品种叶的总黄酮含量及清除自由基能力分析

采用紫外分光光度法和DPPH法分别对宁夏枸杞不同品种叶的总黄酮含量及其清除自由基能力进行分析。结果表明:宁夏枸杞不同品种的叶总黄酮含量和清除自由基能力之间均存在显著性差异。其中宁杞菜1号叶的总黄酮含量极显著高于其它几个品种(^**P<0.01),并且其清除自由基能力也最强,与其它品种之间差异显著(^*P<0.05)。说明宁杞菜1号是开发枸杞茶的优良品种。     

过表达IL-12调节单核系肿瘤细胞向巨噬细胞分化

构建过表达白细胞介素-12（interleukin-12,IL-12）的THP-1单核系肿瘤细胞模型,从形态学、巨噬细胞表面标志表达水平及吞噬功能3方面探究过表达IL—12能否调节单核系肿瘤细胞向巨噬细胞分化。结果发现,与空白和空载组相比,IL-12组的THP．1细胞界限不明显,散在细胞增多;呈圆形或不规则圆形,偶见毛刺状突起;核仁模糊或消失,核染色质条索状浓集;CD68mRNA和蛋白表达量均升高俨〈0．05）。与空白组相比,CDllbmRNA和蛋白表达量升高不明显俨〉O．05）,但72hCD11b蛋白表达量明显高于相同培养条件下的空载组（P〈O．05）。培养72h后各组细胞吞噬能力比较,IL-12组吞噬率（36．7±1．2）％高于空白组（15．7±3．1）％和空载组（28．O±1．5）％,差异有统计学意义（P〈0．05）。上述结果提示,过表达IL-12可以促进单核系肿瘤细胞向巨噬细胞分化。     

尼古丁降解菌SCUEC1菌株的分离及其降解基因

【目的】分离并鉴定1株具有尼古丁降解能力的细菌,研究其尼古丁降解特性并对其降解基因进行分析,为尼古丁微生物降解提供基础。【方法】从烟草种植地土壤中分离1株具有尼古丁降解能力的细菌,通过16S r RNA基因和生理生化特性对该菌株进行鉴定,检测该菌株尼古丁降解率与生长量的关系,并进一步对该菌株进行尼古丁浓度耐受性测定,采用高通量测序技术对菌株进行全基因组测序,BLAST比对分析尼古丁降解相关基因。【结果】筛选到1株具有尼古丁降解能力的细菌,经鉴定命名为根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumerficience)SCUEC1菌株,根癌土壤杆菌SCUEC1菌株尼古丁降解率可达到94.81%,该菌株在尼古丁浓度为0.50–5.00 g/L范围内生长良好且有较高的尼古丁降解能力。对根癌土壤杆菌SCUEC1菌株全基因组序列进行BLAST比对分析,推测该菌株的尼古丁降解代谢途径与中间苍白杆菌SYJ1菌株的尼古丁降解途径相似。【结论】本研究揭示了Agrobacterium tumerficienceSCUEC1菌株具备尼古丁降解特性,初步推测出尼古丁降解相关基因和降解代谢途径,为尼古丁微生物降解提供基础。     

蒲公英糖蛋白体内外抗氧化作用研究

为了探讨蒲公英糖蛋白(TMGP)体内外抗氧化活性,采用H2O2、Fe2+、DPPH.和总抗氧化能力反应体系,检测蒲公英糖蛋白体外抗氧化活性,并与VC进行比较;同时建立D-半乳糖所致衰老小鼠模型,测定并比较TMGP组与模型组的血清、肝脏和脑内MDA含量和SOD、CAT、GSH-Px活性。结果显示:(1)随着TMGP浓度增加,其Fe2+、H2O2和DPPH.清除率均有所增加,当TMGP浓度为1.72mg/mL时,对H2O2、Fe2+清除率分别达到76.8%和55%,接近VC水平;当TMGP浓度为1.5mg/mL时,对DPPH.的清除率达到77%,也与VC水平相当,说明TMGP具有一定的体外总体抗氧化能力。(2)将TMGP按低、中、高剂量分别给小白鼠灌胃,可显著增强小鼠体内血清、肝脏、脑组织中SOD、CAT、GSH-Px活性,降低MDA含量,从而提高衰老小白鼠体内的抗氧化能力。研究表明,TMGP具有明显的体内外抗氧化作用。