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1.
人体内各种复杂的生命活动离不开蛋白质之间的相互作用。这种相互作用具有瞬时性和结合力弱等特点,并受到多种动态调节,特别是蛋白质翻译后修饰(post-translation modifications, PTM)。传统的亲和质谱检测方法存在蛋白纯化的局限性,在高效检测到动态变化方面存在不足。邻近标记是一种能够给与靶蛋白质瞬时靠近,或者互作(邻近)的蛋白质加上生物素的技术,它与质谱检测技术的联合使用能检测细胞过程中弱的、瞬时的蛋白质相互作用,有效解决上述问题。本文综述了基于生物素的邻近标记方法的发展现状,从依赖于融合序列的生物素标记开始,依次介绍有关生物素连接酶、过氧化物酶及其进化后的2代标记方法等经典生物素标记的方法和原理,比较各个方法间的差异和优缺点;也列举了一些近年来新出现的标记方法,如将生物素连接酶进行拆分、鉴定蛋白质在不同复合物中功能的方法、抗体靶向的标记方法,以及其他来源的生物素连接酶突变体,例如枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的C端氨基酸突变的生物素连接酶,能够应用在苍蝇和蠕虫中的生物素连接酶突变体。本文对这些方法进行归纳总结,旨在为初步接触该领域的科研工作者提供参考,同时也希望能够提供一些新的思路,推动蛋白质相互作用组学的发展。  相似文献   
2.
目的:研究香菇多糖注射液对直肠癌根治术后患者纤维蛋白水平及免疫功能的影响。方法:将2010年5月-2014年10月期间在我院接受直肠癌根治术的患者随机分为两组,观察组术后接受香菇多糖联合FOLFOX-4化疗,对照组术后接受FOLFOX-4化疗,观察两组患者化疗过程中的不良反应,测定化疗前后纤维蛋白水平及免疫功能指标。结果:观察组患者在化疗过程中消化道反应、肝功能损伤、骨髓抑制、周围神经毒性、口腔黏膜损伤、脱发的发生率均显著低于对照组(P0.05);化疗后,对照组患者外周血中CD3~+CD4~+CD8~-细胞、CD3~+CD4~-CD8~+细胞、CD19~+细胞、CD3~-CD56~+细胞的含量以及血清Ig M、Ig A、Ig G、FIB的含量显著低于化疗前(P0.05),观察组患者外周血中CD3~+CD4~+CD8~-细胞、CD3~+CD4~-CD8~+细胞、CD19~+细胞、CD3~-CD56~+细胞的含量以及血清Ig M、Ig A、Ig G的含量与化疗前无显著性差异(P0.05),血清FIB含量显著低于化疗前(P0.05);观察组患者化疗后外周血中CD3~+CD4~+CD8~-细胞、CD3~+CD4~-CD8~+细胞、CD19~+细胞、CD3~-CD56~+细胞的含量以及血清Ig M、Ig A、Ig G、FIB的含量显著高于对照组(P0.05),血清FIB含量显著低于对照组(P0.05)。结论:香菇多糖注射液辅助治疗能够减轻直肠癌根治术后FOLFOX-4化疗的毒副作用、改善免疫功能。  相似文献   
3.
近些年,具有抗肿瘤生物活性的人工合成多肽受到广泛的关注.尽管受技术条件的制约,目前多数抗肿瘤肽类药物的半衰期较短,但抗肿瘤肽类药物具有其独特的优势:它们分子量小、抗肿瘤特异性高、免疫原性低,并且易于合成和改造.目前,多种抗肿瘤肽及其衍生物已上市或进入临床研究,以肽为基础的治疗不仅高效低毒,还可以增加肿瘤对其他治疗方法的敏感度,对于肿瘤的临床治疗将具有重要价值.综述了诱发肿瘤坏死活性肽、细胞凋亡肽及功能阻断肽等几种新型天然抗肿瘤活性肽诱发肿瘤死亡的作用,并归纳其应用前景.  相似文献   
4.
根际促生菌提高水稻对非生物胁迫耐受性的研究进展   总被引:1,自引:0,他引:1  
随着极端气候的不断出现和环境污染的日益严重,水稻在种植过程中受到了多种非生物胁迫(如干旱、重金属和高盐等),导致生长受到抑制,产量降低。近些年,减缓胁迫影响的技术受到越来越多的关注,根际促生菌(PGPR)作为从根际土壤中筛选出的微生物,可有效降低非生物胁迫对水稻生长的影响。它们不仅能够通过自身的生理特性阻碍重金属迁移,减轻重金属对水稻的毒害作用,还能通过产1-氨基环丙烷-1-羧酸脱氨酶、嗜铁素、植物激素或固氮解磷解钾作用,使水稻在形态或生理等方面发生改变,从而提高对重金属、干旱、高盐等非生物胁迫的耐性,促进其生长。该文介绍了PGPR及其种类,并对非生物胁迫下PGPR提高水稻耐受性的研究进展进行总结,为进一步研究和利用PGPR缓解非生物胁迫对水稻的影响提供参考。  相似文献   
5.
目的探讨显示皮质脊髓束在成年小鼠脑和脊髓中定位分布的简便有效方法。方法运用蛋白激酶Cγ(PKCγ)免疫组织化学染色法,观察成年ICR小鼠脑和脊髓中皮质脊髓束的定位和分布情况。结果PKCγ免疫阳性产物分布于大脑运动皮层第V层锥体细胞胞体和轴突中,锥体细胞的阳性纤维经内囊、中脑大脑脚底、脑桥基底部、下行至延髓锥体中。在延髓下段,PKCγ阳性纤维经锥体交叉后进入对侧脊髓灰质后联合背侧,形成背侧皮质脊髓束,在脊髓白质的后索腹侧深层下行,至骶髓3-4节段以下逐渐消失。在整个脊髓前索和外侧索中未见有PKCγ阳性纤维。结论PKCγ特异地表达于脊髓后索皮质脊髓束中,提示PKCγ免疫组织化学法是一种显示和观察皮质脊髓束精确定位的有效方法。  相似文献   
6.
利用高保真聚合酶从运动发酵单胞茵中克隆出丙酮酸脱羧酶基因,加A后克隆到pGM-T载体,测序验证无误.经酶切、连接、转化到表达栽体pUC-18.形成重组质粒pUC-18一pdc,转化到大肠杆菌TOPl0中,经定性定量分析丙酮酸脱羧酶基因在大肠杆菌中高效表达,成功构建出乙醛的代谢途径.  相似文献   
7.
本文采用三种常用的细胞毒性试验方法(四甲基偶氮唑盐方法、中性红染料摄取法和乳酸脱氢酶释放法)评价马齿苋多糖抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖的敏感性。结果显示,在一定浓度(0.01~0.50 mg/m L)和时间(1~5 d)范围内,马齿苋多糖具有抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖作用,且呈浓度和时间依存关系。MTT法和LDH法在马齿苋多糖(0.01 mg/m L)处理3T3-L1细胞1 d时,细胞增殖率明显低于对照组(P0.01),NRU法在马齿苋多糖处理3 d时,细胞增殖率明显低于对照组(P0.05)。但当马齿苋浓度增加到0.5 mg/m L、处理时间延长至5 d时,细胞出现明显的固缩、漂浮和裂解等毒性作用。MTT法和LDH法较NRU法更为敏感,马齿苋多糖主要影响3T3-L1前脂肪细胞的膜完整性和线粒体功能。  相似文献   
8.
目的分析β-内酰胺类耐药基因在肺炎克雷伯菌中的分布并评估这些基因对抗生素耐药水平的影响。方法选择76株肺炎克雷伯菌临床分离菌株,用K—B纸片法和MIC法检测抗生素的耐药性;用PCR法检测肺炎克雷伯菌株中β-内酰胺类抗生素的相关基因,RT—PCR的方法检测13-内酰胺类基因的表达。结果76株肺炎克雷伯菌中,ESBLs相关基因主要为SHV(45/76,59.21%)、TEM(27/76,35.53%)和CTX—M(38/76,50.00%);携带SHV基因菌株对阿米卡星的耐药率(37.78%)明屁高于非携带SHV基因菌株(16.13%)(P〈0.05)。携带CTX—M基因(76.32%)和TEM基因(70.37%)的菌株对庆大霉素的耐药率明显高于不携带CTX—M基因(34.21%)和TEM基因(46.94%)的菌株(P〈0.05)。RT—PCR的结果显示,阿米卡星和庆大霉素耐药株的CTX—M基因mRNA的表达率均明显高于敏感株。结论β-内酰胺类基凶与氨基糖苷类抗生素的耐药相关,CTX—M基因与肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类抗生素的耐药水平相关。  相似文献   
9.
不同入流条件下植被过滤带对坡面径流氮、磷的拦截效果   总被引:4,自引:0,他引:4  
植被过滤带能有效拦截坡面径流泥沙,在防治水土流失和农业面源污染等方面具有重大潜力.为探讨不同入流条件下植被过滤带对坡面径流氮、磷的拦截效果及其水动力学机理,本研究通过模拟上方来水冲刷试验,定量分析了上方来水流量、氮磷含量浓度等因素影响下植被过滤带对径流氮、磷的拦截规律及其与径流水动力学参数之间的关系.结果表明: 植被过滤带能有效拦截上方来水中氮、磷等污染物,入流流量分别为200、400、600 L·h-1时,模拟植被过滤带对总氮的拦截率分别为74.9%、62.0%、58.3%,对总磷拦截率分别为85.0%、75.6%、72.0%,在上方来水流量较低时拦截效果最优;上方来水入流氮、磷浓度变化对植被过滤带拦截效率的影响不显著.不同入流条件处理下,植被过滤带对氮、磷的拦截率随弗洛德数增大而增大,呈显著线性正相关关系;与阻力系数、水流剪切力、水流功率呈线性负相关关系;其中,氮、磷拦截率与水流剪切力的相关关系最优,可以用含水流剪切力的公式表征植被过滤带对氮、磷的拦截效率.  相似文献   
10.
摘要 目的:血管再生是实体肿瘤的生长和恶性转移的一个必须病理过程,阻断这一过程能够有效阻止恶性肿瘤的发生发展。YKL-40是血管再生因子,能刺激肿瘤的血管再生。本文探讨了一个原创性人源化抗YKL-40单克隆抗体(Rosazumab, 命名为洛沙单抗)阻断YKL-40血管生成的体外功能。方法:Western Blot检测洛沙单抗对分泌和重组YKL-40蛋白的特异性结合;Western Blot及考马斯亮蓝染色检测该抗体的抗体特异性和纯度;Live/Dead染色试验检测抗体的细胞毒性。以人微血管内皮细胞(Human microvascular endothelial cells, HMVECs)为研究对象,引入重组YKL-40蛋白或脑胶质瘤细胞(Glioblastoma serum-differentiated cells, GSDCs)的条件培养基进行培养。Transwell试验检测该抗体对HMVECs迁移力的影响,并用Matrigel试验检测对微管形成的作用。结果:洛沙单抗可特异性结合YKL-40,考马斯亮蓝染色进一步证明其纯度及特异性。体外血管再生试验包括细胞迁移力和微管形成证明该抗体可以有效中和重组YKL-40蛋白及肿瘤细胞条件培养基中的YKL-40,抑制HMVECs的迁移和血管形成。结论:洛沙单抗是首创的人源化中和YKL-40的抗体,其特异性高,细胞毒性低,能显著抑制YKL-40血管再生功能,为下一步体内试验奠定基础。本研究可为YKL-40诱导的肿瘤血管生成及恶性肿瘤转移提供一种新的治疗手段。  相似文献   
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