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人γ-精浆蛋白的亲和纯化及其糖基化分析   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:从人精液中提纯γ-精浆蛋白并对其生物学特性进行鉴定。 方法:应用饱和硫酸铵法从小鼠腹水中纯化出抗γ-精浆蛋白的单克隆抗体E4B7,将其共价交联到CNBr-Sepharose4B上,制备成免疫亲和层析柱,用该层析柱亲和纯化经饱和硫酸铵粗提的精液标本。纯化产物分别用SDS-PAGE、Western-blot及ELISA进行生物学特性鉴定,最后经PNGase F、Endo-H酶消化后进行糖基化分析。结果:SDS-PAGE电泳表明纯化蛋白的相对分子量约为44KD,Western-blot及ELISA鉴定显示该蛋白可与抗γ-精浆蛋白的单抗E4B7特异性结合。对纯化蛋白无论是单用Endo-H酶消化,还是同时用Endo-H酶和PNGase F酶共同消化,消化产物电泳后相对分子量均降低到34KD左右,而单独用PNGase F酶消化后相对分子量没有改变。Western-blot及ELISA鉴定显示糖苷酶处理后的纯化蛋白仍可与单抗E4B7特异性结合。结论:成功纯化出N-糖基化形式的γ-精浆蛋白,这为下一步筛选人源化抗体奠定了纯的抗原基础。  相似文献   
2.
凝集素法测定骨性碱性磷酸酶及临床应用   总被引:4,自引:0,他引:4  
选用凝集素分离法测定骨性碱性磷酸酶(bone alkaline phosphatase,B-ALP).分别对健康男女儿童123例和成人及老年66例,进行B-ALP和总ALP活性的测定.结果显示,在儿童骨生长阶段B-ALP水平随年龄增长而增高,到14~16岁时开始逐渐下降至成人水平,男女间增高和下降时间有所不同.同时对临床骨折病人60例测定以上项目,表现为B-ALP活性在骨折后一段时期内升高,提示骨形成活跃.粉碎性骨折两周后B-ALP活性有显著性差异,t=2.92, P<0.01,而裂缝性骨折三周后出现显著性,t=5.14, P<0.01.骨折病人自身比较,一周后出现显著性差异, t=3.51, P<0.05.凝集素法操作简便、重复性好,高低浓度血清的批内、批间变异系数分别为6.12%、8.5%和6.4%、9.5%.是临床观察骨代谢情况的一项有用指标.  相似文献   
3.
电转化条件对大肠杆菌XL1-Blue菌株转化效率的影响   总被引:10,自引:0,他引:10  
探讨XL1-Blue菌株电转化的最优条件。通过改变电压、质粒DNA浓度、细菌生长周期等影响电转化的重要条件,做出转化率的变化曲线,从中探索电转化的最优条件。实验结果得出在电容25μF、电阻200 Ω、电压2.5 kV、D600nm为0.3~0.4、0.2 cm电转化杯、DNA终浓度0.1μg/ml、感受态细胞终浓度2.5×1012、氨苄青霉素浓度50μg/ml的条件下,电转化效率最高,可达到7.64×108。电转化实验转化效率高,重复性好,为成功的建立抗体库提供了保证。  相似文献   
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