纪念《遗传工程》创刊十周年

《遗传工程》已创刊十年了!记得当时国外遗传工程研究也刚刚起步,并且对要不要搞还有着激烈的争论。但是,中国科学院图书馆卓有远见地创刊了这本杂志。几年来,它从油印本到铅印本,     

英国的生物工程

去年11月我有机会参加国家科委组织的生物工程考察小组在英国作了两周的考察。在那里访问了英国科学和工程研究委员会的生物工程指导小组、帝国化学公司(ICI)、帝国理工学院、应用微生物研究中心和约翰英尼斯(John Innes)研究所等10个单位。了解了他     

利用基因融合研究嘌呤生物合成的调控

利用Mudl噬菌体将Lac基因融合到大肠杆菌嘌呤合成基因中,使Lac基因受嘌呤合成调节基因的调控,这样,只要测定这些基因融合菌株的β-半乳糖苷酶的合成就可以了解各种因素对嘌呤合成的影响。遗传学定位知道,这些菌株是PurI-lac和pufF-lac融合菌株。实验表明,这些菌株的β-半乳糖苷酶合成受嘌呤合成的终产物——腺嘌呤的阻遏。我们还从这些菌株中分离到了它们的β-半乳糖苷酶合成不受高浓度腺嘌呤阻遏的突变株,由于在这些突变     

质粒R100.1汞抗性基因表达的调控

利用Mud1(Ap~rlac)噬菌体将lac结构基因融合到质粒R100.1的汞基因(mer)中,得到了47株mer-lac基因融合菌株。根据这些菌的互补试验、对氯化汞的敏感性以及氯化汞对β-半乳糖苷酶诱导特性,可把这些菌分为3类:merA-lac merR-lac和merO或P-lac。从这些试验也可看出mer基因表达象阿拉伯糖(ara)操纵子那样是受双重调节的。     

Tn2促进基因缺失与R质粒接合转移有关的遗传学证据

通过R100-1的接合转移和非接合转移的温度选择两种方法分别获得了一系列mer::Tn2突变体。回复试验和杂交结果表明,通过接合转移分得的22株mer::Tn2突变体中有7株发生了长度不等的缺失;但通过非接合转移的温度选择法获得的17株mer::Tn2突变体中没有发现缺失株。这一结果进一步证明Tn2促进缺失形成与R因子的接合转移有关。     

转译优化对EP0基因在cos7细胞中表达的影响

利用COS7细胞暂时表达系统,研究转译起始序列对EPO-cDNA表达的影响。通过DNA重组技术,构建了原EP0-cDNA表达载体pCSV-EP0(1)．其转译起始序列为5’AATTCATGG3’．同时通过定点突变技术,将起始序列改变成5’CCACCATGG3’,而构建了另一表达载体pCSv—EPO(2)。后者经序列分析证明无误后和前者均通过DEAE-dextran法转染COS7细胞,用ELlSA法定量洲量EP0表达水平．转染后48小时及72小时收集含pCSV—EP0(1)的COS7细胞上清．测定结果为1580pg／mI及954pg／mI,而含pCSV—EPO(2)的上清则为25 300pg／m1和17 450pg／ml。这表明经优化起始序列的基因表达远高于未经优化的。     

质粒RP4：：Mu引起霍乱弧菌基因的突变和转移

质粒pULB11(RP4：：Mucts)通过接合能从大肠杆菌转移到霍乱弧菌——吴江2(Vibriccholerae——Wu Jiang 2)中去。带有 puLB 11的霍乱弧菌经42℃诱导后能以0.5％的突变率产生营养缺陷型,这些营养缺陷型十分稳定,在10。细胞中还不能测出它们的回复突变体,这与Mu对大肠杆菌的诱变作用十分相似。质粒RP4及其抗药性很容易从霍乱弧菌中失去,这说明营养缺陷型的产生是由于Mu的插人而不是RP4的整人,所以pULB 11可以作为诱变剂来诱变霍乱弧菌的包括毒素基因在内的各种突变体,这在构建霍乱弧菌活菌苗方面有一定的意义。puLB 113(RP4：：Mini-Mu)还能诱动霍乱弧菌染色体基因,这也是研究霍乱弧菌遗传学的有用手段。     

美国分子遗传学和遗传工程研究现状

作者动态性地介绍了美国近几年来基因工程的概况及其成就和进展,更值得注意的是:美国的科研管理、组织、以及研究人员的选拔培养和使用有许多独到之处,可供借鉴。但他们的情况适合于他们的社会制度,我们该怎么办?值得我们认真研究。     

用DNA多聚酶A温度敏感突变株E.coli C600-ML分离转座子-2(Tn-2)插入突变体

用DNA转化将Co1E1型质粒RSF1030(Tn-2载体)引入大肠杆菌C600-ML细胞,然后用限制性温度和在氨基苄青霉素LB培养基上选择的方法,分离到了大量的Tn-插入突变体。经测定,其中有46株营养缺陷型。用琼脂糖电泳检查这些突变体的DNA提取物,发现它们都失去了质粒RSF1030。这些Tn-2插入引起的营养缺陷型在回复到原养型的同时,也失去了氨基苄青霉素抗性。已经插入到细菌染色体的Tn-2还能进一步转座到其他基因组。这些都表明,用这种方法获得的营养缺陷型是Tn-2插入突变体。     

恶性疟裂殖子表面蛋白1合成基因在毕赤酵母中的表达

恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1是当今疟疾疫苗主要的候选抗原。由于天然MSP1基因AT含量异常高(为74%),使得克隆全长天然基因无法实现。本文已全合成了msp1基因(4940bp),解决了该天然基因在异源系统中不稳定的问题。为制备大量msp1重组蛋白进行疫苗有效性试验,本研究建立了msp1基因在毕赤酵母中的表达,将合成的msp1基因克隆到毕赤酵母胞内表达载体pPIC3.5,构建了重组质粒pPIC3.5/msp1,用电击转化毕赤酵母得到重组转化子,经PCR证实msp1基因已整合于毕赤酵母染色体中。含有重组表达质粒的毕赤酵母菌经甲醇诱导后表达出全长msp1重组蛋白。表达产物能与识别MSP1分子二硫键依赖构象表位的特异性单抗发生很强的反应,表明msp1重组蛋白至少在该表位构象上与天然蛋白一致。从毕赤酵母中分离得到大量msp1为开展该蛋白的结构与功能,特别是测定其疟疾保护性免疫提供可能。