镰刀菌毒素的研究——Ⅲ.T-2毒素产生菌株M-20的生物学特性

镰刀菌属(Fusarium)是真菌中危害性最大的一个菌属之一,其种类多,分布广,寄主范围大,有许多种是作物的重要致病菌,而且有些菌株能产生镰刀菌毒素。Ueno、Mirocha和Ellison等研究三隔镰孢(F.tricinctum)、拟     

镰刀菌毒素的研究 Ⅰ.T-2毒素产生菌株的筛选

<正> 镰刀菌属(Fusarium)是危害性最大的真菌之一,不仅侵染田间作物和库贮谷物,造成经济损失,而且产生毒素,引起人畜镰刀菌毒素中毒。黄曲霉毒素的致癌作用被证实后,更引起世界各国对镰刀菌毒素及其中毒现象的重视(孟昭赫等,1979)。镰刀菌产生的毒素主要是单端孢霉烯族化合物,其中 T-2毒素的毒性最强(Ronald,1981),它能引起兔子皮肤反应和抑制植物种子发芽等生物毒性效应(Burme-istes,1970;Ueno,1971)。国内尚未见人工培养产生 T-2毒素的报告。为给农业、食品卫生和环境保护等方面研究提供科学依据,本文报告 T-2毒素产生菌株的筛选。     

镰刀菌毒素的研究II．T-2毒素的提取、纯化及结构鉴定

本文报道了三线镰刀菌M-20(Fusarium tricinctum)接种于已灭菌的玉米粒培养基中,于13℃培养30天后,提取培养物所得粗毒素。经二次硅胶柱层析纯化后,经丙酮-正己烷结晶,可获得白色针状结晶。根据它的熔点(151—2℃)R_f0.56,LD_(50)2.5,mg/kg。分子量466,FD质谱测定,~1H核磁共振谱及EI质谱,确证结晶为T-2毒素。     

水稻尾孢霉毒素

水稻尾孢霉(Cercospora oryzae)是水稻条叶枯病的致病菌。24个菌株用抑制稻种胚根生长生物测定法进行产毒筛选。大部分菌株培养滤液对胚根生长有抑制作用。6个菌株:I-16,I-26,I-28,I-38,I-42和I-49选为进一步试验的菌株。添加10％稻叶汁马铃薯蔗糖培养液适于菌株的生长和产毒。生长适宜的温度和pH范围分别是25°-30℃和pH 6—7,光线和通气可促进菌株生长,但温度、光线和通气对培养滤液的毒性无影响,pH6—7的培养滤液毒性最强。接种后3周的培养滤液表现强毒性。多数菌株生长高峰出现在第4周。对水稻尾孢霉毒素进行了初步鉴定。结果表明菌株都能产生红色色素和黄色物质,红色色素经薄层色谱,可见光谱分析和颜色反应证明与尾孢霉毒素相同。培养滤液和尾孢霉毒素提取物能抑制稻种和4种作物种子胚根生长,并能在损伤稻叶上引起褪绿和枯死。这一作用与稻秧的品种抗性和秧龄无关。     

镰刀菌毒素的研究 Ⅱ.T-2毒素的提取、纯化及结构鉴定

本文报道了三线镰刀菌M-20(Fusarium tricinctum)接种于已灭菌的玉米粒培养基中,于13℃培养30天后,提取培养物所得粗毒素。经二次硅胶柱层析纯化后,经丙酮-正己烷结晶,可获得白色针状结晶。根据它的熔点(151—2℃)R_f0.56,LD_(50)2.5,mg/kg。分子量466,FD质谱测定,~1H核磁共振谱及EI质谱,确证结晶为T-2毒素。     

雪腐镰刀菌烯醇产生菌株的筛选

本文对镰刀菌3个种的47个菌株用豌豆发芽抑制和鸽子呕吐试验筛选雪腐镰刀菌烯醇(Nivalenol)的产生菌株。化学分析的结果表明雪腐镰刀菌M-24和禾谷镰刀菌M-46能够产生雪腐镰刀菌烯醇。菌株M-24适宜的产毒温度为25-30℃;25℃条件下,M-24的产毒高峰出现在接种后的第三、四周,雪腐镰刀菌烯醇的含量分别达到447.9mg/kg和538.0mg/kg;五种培养基上产毒量也有所不同,在大麦和大米上产毒量最高(毒素含量分别为819.7mg/kg和780.5mg/kg),玉米和小麦上次之(521.9mg/kg,402.4mg/kg),绿豆上产毒量最低(167.6mg/kg)。菌株M-46在上述条件下产毒量均低于5mg/kg。     

生长调节剂对石刁柏悬浮培养细胞的生长和多糖含量的影响

选取在MS十2,4DI．0ms／L（单位下同）＋6－BA0．2培养基上,每30～40d继代1次的一年生长石刁柏（As～（nxv）zllaLLi）愈伤组织无性系,于26士IC下进行无菌悬浮培养,培养基为MS＋2,4D0·4＋6－BA0．4,每4d换液1次,8～12d继代1次,3个月后用于实验。测定生长（60C下供至恒重）和多糖（0．15g干培养物加3ml水,超声波处理回～2min后匀浆,于90C水浴中置lh,离心,上清液加2倍体积酒精沉淀过夜,取沉淀加入1．5ml水）。多糖测定按苯酚硫酸法（张惟杰．复合多糖生化研究技术．上海：上海科学技术出版社,1987．6）。结果表明：回…