一种检测马尔尼菲青霉菌实时荧光定量PCR方法的建立和应用

目的:建立一种检测马尔尼菲青霉菌的实时荧光定量PCR的方法。方法:针对马尔尼菲青霉菌5.8S rRNA设计特异性PCR引物,采用核酸荧光染料SYBR GreenⅠ进行实时荧光定量PCR检测,探讨该方法的灵敏度和特异性,并进行临床样品检测验证。结果:该方法的特异性较好,与该菌属内的其他细菌间无交叉反应;灵敏度可检测出10个细胞/mL全血,在检测范围内线性良好,相关系数R2=0.981。临床样品检测和传统的培养方法结果完全相符。结论:该方法特异性好,灵敏度高,操作简单,检测时间短;临床样品检测具有很好的准确性,从本研究的结果显示实时荧光定量PCR方法在检测马尔尼菲青霉菌中的应用可以大大缩短临床的诊断时间,提高临床诊断的准确度和效率。     

用聚乙二醇分离富集microRNA的方法探讨

目的探讨用聚乙二醇（polyethylene glycol,PEG）溶液分离富集miRNA的操作方法和分离富集效果,并与Ambion公司的miRNA分离试剂盒分离效果进行比较。方法用PEG溶液和Ambion公司的miRNA分离试剂盒从肝脏组织总RNA中分离富集miRNA,用变性琼脂糖和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定分离效果,并在富集的miRNA中用RT—PCR扩增miR-122以鉴定是否有效地回收了miRNA。结果PEG和Ambion公司的miRNA分离试剂盒都能有效地富集miRNA,PEG富集的RNA片段比Ambion公司的试剂盒的大。结论PEG溶液能有效地分离富集miRNA,和Ambion公司的miRNA分离试剂盒分离效果相当,并具有操作简便、快捷及成本低廉的优点。     

NICU患儿呼吸道感染病原菌的分布及耐药性分析

目的:探讨新生儿重症监护病房(NICU)呼吸道感染常见病原菌的分布及耐药情况,为临床合理选用抗菌药物提供参考.方法:对本院2009年1月至2010年12月NICU患儿送检呼吸道标本所分离病原菌的分布及药敏结果进行统计分析.结果:共检出病原菌367株,分离率前6位的病原菌依次为肺炎克雷伯菌(46.0％)、大肠埃希菌(13.9％)、铜绿假单胞菌(10.9％)、阴沟肠杆菌(8.7％)、金黄色葡萄球菌(5.7％)、真菌(4.9％).耐药性分析显示,肺炎克雷伯菌耐药情况严重,ESBLs产生率54.4％,对头孢噻肟、头孢曲松的耐药率分别达91.7％、90.5％,对头孢吡肟、头孢哌酮/舒巴坦、阿莫西林/克拉维酸、头孢他啶、庆大霉素的耐药率分别为68.6％、66.9％、66.9％、47.3％、44.4％,对环丙沙星和阿米卡星的耐药率较低,分别为7.7％和16.6％.大肠埃希菌对青霉素、头孢菌素类的耐药率较高,对亚胺培南、环丙沙星和阿米卡星敏感或较为敏感,ESBLs产生率51.0％,未检出对亚胺培南耐药的肠杆菌科细菌.铜绿假单胞菌除对阿莫西林/克拉维酸、头孢曲松和头孢噻肟的耐药率较高外,对其余抗生素较为敏感或高度敏感.金黄色葡萄球菌对青霉素、红霉素耐药率较高,分别为95.2％、71.4％,对克林霉素、头孢他啶、头孢西丁、阿莫西林/棒酸的耐药率则较低,分别为23.8％、23.8％、14.3％、4.7％,检出MARSA 3株(14.3％),未发现万古霉素耐药的菌株;检出4株肺炎链球菌全部对红霉素的耐药,对β-内酰胺类药物耐药性不严重.结论:肺炎克雷伯菌为NICU患儿呼吸道感染的主要病原菌,且对常用抗生素耐药情况严重.根据病原菌种类及药敏结果合理应用抗菌药是有效控制危重病患儿感染和减少耐药菌株产生的重要手段.