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1.
tRNA介导蛋白质工程   总被引:1,自引:0,他引:1  
在遗传信息从DNA到蛋白质流动的过程中,tRNA携带特异的氨基酸参与蛋白质合成,对于维持蛋白质翻译的忠实性起着非常重要的作用,生物体内共有20种氨酰tRNA合成酶,每一种均对尖于一种氨基酸和一个tRNA类型,但是这种翻译过程仅仅限于20种天然氨基酸,因此在进行传统的蛋白质工程研究时常常受到限制,事实上,在蛋白质工程中借助于校正 tRNA定点掺入非天然氨基酸可以提供蛋白质的结构信息,改进蛋白质检测与分离的方法,甚至赋予蛋白质某些新的特性,随着生物技术的发展和完善,tRNA介导蛋白质工程将不仅在蛋白质工程中发挥潜能,而且在研制新型生物材料和疾病诊断及药物治疗方面起到推动作用。  相似文献   
2.
寡聚脱氧核苷酸的结构与抗降解特性的研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
合成了4段具有不同高级结构或不同修饰的寡聚脱氧核苷酸,检查它们在20%血清中的稳定性.发现:(1)寡核苷酸主要被血清中的3′外切核酸酶降解,未经修饰的线性寡核苷酸降解严重;(2)末端部分硫代修饰的寡核苷酸稳定性明显提高;(3)自身互补形成的配对结构可有效保护3′末端.具有4个以上(含4个)GC对的3′端发夹结构寡核苷酸,其抗核酸酶的能力几乎与硫代修饰的寡核苷酸相当.  相似文献   
3.
miRNA 的生物合成过程   总被引:4,自引:0,他引:4  
MicroRNA (miRNA) 是一类真核生物内源性的小分子单链 RNA ,通常为 18 ~ 25 nt 长,能够通过与靶 mRNA 特异性的碱基配对引起靶 mRNA 的降解或者抑制其翻译,从而对基因进行转录后的表达调控 . 近几年来,在动物细胞和植物组织中,上百种 miRNA 被陆续发现 . 这些小分子调控 RNA 是从 60 ~ 200 nt 的具有发夹状结构的前体中被切割出来而成熟的,在动物细胞中, miRNA 基因的转录初产物 (pri-miRMA) 很快被一种核糖核酸酶Ⅲ Drosha 加工成为 miRNA 前体 (pre-miRNA) ,然后由细胞核转运至细胞质中,经另一种核糖核酸酶Ⅲ Dicer 识别剪切为成熟 miRNA. 对这一过程进行了简要的综述,并且对植物 miRNA 的成熟过程也进行了探讨 . 对 miRNA 的生物合成过程的深入了解,将有助于研究这一类起重要调控作用的 RNA 是如何行使功能的,从而进一步研究其在生长发育及各种疾病中所起的重要作用 .  相似文献   
4.
<正>20世纪初德国科学家Albrecht Kossel发现了除鸟嘌呤外的三种组成核糖核酸的核苷酸,以及酵母来源的核糖核酸,开创了核糖核酸化学的研究。他也因此获得了1910年的诺贝尔生理学与医学奖。时至今日,核糖核酸研究已经有约120年的历史。从国内讲,王德宝先生20世纪50年代中期回国,建立了国内第一个RNA实验室。王德宝、王应睐院士领导我国科学家于1981年完成了酵母丙氨酸tRNA的人工全合成,  相似文献   
5.
化学法合成人线粒体野生型与A3243G点突变型tRNALeu(UUR)基因,体外转录生成相应的tRNALeu(UUR),表达并纯化人线粒体亮氨酰tRNA合成酶(mtLeuRS),用mtLeuRS催化野生型与突变型tRNALeu(UUR)与亮氨酸结合,分别检测两种类型tRNALeu(UUR)的氨酰化动力学常数。结果表明,野生型tRNALeu(UUR)的Km/Kcat仅为突变型tRNALeu(UUR)的63.9%,A3243G点突变使tRNALeu(UUR)接受亮氨酸的能力明显下降,提示此为A3243G点突变致病机制之一。 Abstract:The wild-type and mutant-type human mitochondrial tRNALeu(UUR) genes were synthesized and transcribed in vitro with T7 RNA polymerase.The kinetic parameters of human mitochondrial leucyl-tRNA synthetase(mtLeuRS) were determined with wild-type and mutant-type human mitochondrial tRNALeu(UUR) respectively.The results show that the value of Km/Kcat of mtLeuRS for the mutant-type tRNALeu(UUR) is 63.9% as compared with the wild-type.Human mitochondrial tRNALeu(UUR) gene A3243G point mutant can remarkably reduce it′s aminoacylation activity,suggesting it would be one of the mechanisms that the mutation could produce such clinical phenotypes.  相似文献   
6.
tRNA是古老而具有多功能的小分子,具有复杂的倒“L”型高级结构。L形的tRNA结构为二维对称,因此可以将它分解为对应于双链螺旋结构的两部分,分别毗邻T环和反密码环。tRNA的主要功能是活化专一的氨基酸并携带氨基酸参与蛋白质生物合成。研究发现,有一些模拟tRNA结构特征的类似物,可参与其它生物功能。随着人们对tRNA结构和功能认识的逐渐积累,已经可以设计一些非天然的tRNA类似物。对这些类似物的研究,揭示了生物体复制、翻译和代谢途径之间的联系,为生命进化过程的探索提供了有力的工具,并导致一些生物技术的应…  相似文献   
7.
用毛细管电泳技术检测DNA点突变   总被引:1,自引:0,他引:1  
毛细管电泳(CE)是90年代初发展起来的新技术,具有分辨率高、重现性好、灵敏度高、快速和易于实现自动化的特点。后来又发展了激光诱导荧光检测器(LIF),大大提高了分析灵敏度,对微量样品如单细胞分析等,具有很大的优势。通常,利用CE技术可以在20min内分析完成几千个碱基的DNA片段。CE可以应用于DNA点突变的检测,目前在PCR基础上利用CE技术对DNA已知点突变及未知点突变的检测发展十分迅速。1.已知点突变的检测1.1 扩增抗拒突变系统PCR(ARMSPCR)和短串联重复PCR(STRPCR)  ARMSPCR和S…  相似文献   
8.
第 18届国际tRNA学术研讨会于 2 0 0 0年 4月8— 12日在英国剑桥大学皇后学院举行。来自各国的 2 4 0名科学家参加了会议。提交会议的论文共2 0 0篇。会议由新当选的国际生物化学与分子生物学联合会 (IUBMB)主席B .Clark主持 ,每天从上午 8点 4 5分开始 ,进行到晚上 11点 ,实际会议时间达10小时。共有 80位科学家作了学术报告。其余论文以墙报形式交流。这次会议原安排在去年 ,以纪念国际tRNA学术研讨会 30周年。故会议的第一部分 ,放了很多旧照片 ,回忆tRNA学术研讨会和tRNA研究的历史。在Holly因测定了第…  相似文献   
9.
To study the expression activity of various vectors containing anti-caspase-3 ribozyme cassettesin vivo, and to further study the role of caspas-3 in the apoptotic pathway, we constructed anti-caspase-3 hammerhead ribozyme embedded into the human snRNA U6, and detected the activity of the ribozymein vitro andin vivo. Meanwhile we compared it with the self-cleaving hammerhead ribozymes that we previously studied, and with the general ribozyme, cloned into RNA polymerase II expression systems. The results showed that the three ribozymes, p1.5RZ107, pRZ107 and pU6RZ107 had the correct structure, and that they could cleave caspase-3 mRNA exactly to produce two fragments: 143nt/553nt. p1.5RZ107 has the highest cleavage efficiencyin vitro, almost 80%. However, the U6 chimeric ribozyme, pU6RZ107, has the highest cleavage activityin vivo, almost to 65%, though it has lower cleavage activityin vitro. The cleavage results demonstrated that the pU6RZ107, the U6 chimeric ribozyme, could more efficiently express and downregulate the level of caspase-3in vivo, and the ribozyme could provide an alternative approach to the research into the mechanism of apoptosis and human gene therapy also.  相似文献   
10.
特异亲和活性蓝染料的小分子RNA的SELEX筛选   总被引:5,自引:1,他引:4  
化学合成含有20 个核苷酸随机序列, 长度为73 个核苷酸的单链 D N A 随机库; P C R 扩增和双链化后, T7 R N A 聚合酶体外转录得到单链 R N A 随机库。以活性蓝染料凝胶柱为筛选介质, 体外进化方法筛选特异亲和活性蓝染料的 R N A 分子。经8 轮循环筛选, R N A 群体亲和染料的比例从小于0 .03 % 上升至22 .4 % 。克隆筛选出 R N A 序列后, 测定了30 个克隆的序列, 得到三类 R N A 分子。经二级结构分析和活性蓝染料特异亲和能力测试,发现 R N A 特异亲和活性蓝染料的主要结构因素是 R N A 形成的双链结构  相似文献   
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