稳定干扰素-α-2b的多糖玻璃体颗粒的研究

目的：在温和条件下,将结构脆弱的干扰素-α-2b制备成可耐受苛刻制剂条件的微粒。方法：通过干扰素在多糖和PEG共溶液中的冷冻相分离作用,制备干扰素分配在多糖分散相的微粒。在显微镜和扫描电镜下观察了颗粒的大小和外观。同时将颗粒置于不同密度的溶剂中考察了密度。用MicroBCA和ELISA法测量了颗粒的包封率和载药量;用SEC—HPLC和细胞病变抑制法初步考察了颗粒制备后蛋白稳定性的变化。结果：颗粒表面光滑圆整,粒径约1～5μm,密度约为1.47～1．48g／cm^3,说明颗粒结构致密。MicroBCA和ELISA法测量的包封率分别为90％和80％以上,SEC—HPLC法测定蛋白无明显聚集体产生,细胞病变抑制法得出的活性保留率80％左右.结论：冷冻相分离法是一种简单但有效的制备蛋白多糖颗粒的方法。颗粒粒径均一。形态规整。该方法可进一步应用于蛋白缓释及微粉吸入等剂型的研究。     

新型聚乙烯亚胺衍生物在COS-7细胞中转染和毒性的研究

目的：研究以乙二醛为连接剂的聚乙烯亚胺（Polyethyleneimine,PEI）衍生物Polyimine-PEI对非洲绿猴肾癌细胞COS-7的转染活性和细胞毒性的影响。方法：以荧光素酶质粒为报告基因,研究高分子与DNA的复合物在COS-7细胞的转染活性,用MTT方法研究高分子对COS-7细胞的毒性。结果：COS-7细胞实验显示,Polyimine-PEI具有很低细胞毒性,其毒性显著低于PEI25kDa,同时也具有高效输送质粒的能力。结论：Polyimine-PEI是一种新型的高效,低毒在基因治疗领域有相当前景的非病毒载体。     

重组人粒细胞集落刺激因子缓释微球的研究

目的：研究固体／油／水法制备重组人粒细胞集落刺激因子缓释微球,为开发其缓释剂型进行初步研究。方法：以聚乳酸．聚羟乙酸共聚物（PLGA）为载体材料：用固体／油／水法和水／油／水法制备载rhG-CSF缓释微球;考察粒径大小、外观、包封率等理化性质;用MieroBCA法考察微球的体外释药特性及影响因素;用SEC-HPLC和MTT比色法初步评价了微球制备工艺过程对rhG-CSF稳定性的影响。结果：两种方法制得的微球形态圆整、分散性良好,包封率均超过80％。固／油／水法制得的微球体外释放在2周内可超过90％,而水／油／水法制得的微球在相同的时间内仅释放30％。对于固／油／水法制备过程,SEC-HPLC法测定蛋白无明显聚集体出现,MTT法测定蛋白活性无明显损失。结论：实验证明了固／油／水法制备的PLGA微球可以实现2周以上的体外缓释。     

稳定干扰素的-α-2b多糖玻璃体颗粒的研究

目的:在温和条件下,将结构脆弱的干扰素-α-2b制备成可耐受苛刻制荆条件的微粒.方法:通过干扰素在多糖和PEG共溶液中的冷冻相分离作用,制备干扰素分配在多糖分散相的微粒.在显微镜和扫描电镜下观察了颗粒的大小和外观,同时将颗粒置于不同密度的溶剂中考察了密度.用MicroBCA和ELISA法测量了颗粒的包封率和载药量;用SEC-HPLC和细胞病变抑制法初步考察了颗粒制备后蛋白稳定性的变化.结果:颗粒表面光滑圆整,粒径约1～5μm,密度约为1.47～1.48 g/cm3,说明颗粒结构致密.MicroBCA和ELISA法测量的包封率分别为90%和80%以上,SEC-HPLC法测定蛋白无明显聚集体产生,细胞病变抑制法得出的活性保留率80%左右.结论:冷冻相分离法是一种简单但有效的制备蛋白多糖颗粒的方法.颗粒粒径均一,形态规整.该方法可进一步应用于蛋白缓释及微粉吸入等剂型的研究.     

交联聚乙烯亚胺衍生物的构建及其转染COS-7 细胞的研究

目的:优化构建交联聚乙烯亚胺(Polyethylenemine,PEI)衍生物PEI-Bu,研究其对非洲绿猴肾成纤维细胞系(COS-7)的转染活性和细胞毒性。方法:以PEI 800Da为骨架,1,4-丁二醇二氯甲酸酯为连接剂制备聚合物PEI-Bu,琼脂糖凝胶电泳考察其复合质粒DNA的能力,MTT法检测PEI-Bu对COS-7的毒性,以荧光素酶质粒作为报告基因,测定PEI-Bu/DNA复合物在COS-7细胞的转染活性。结果:凝胶电泳表明PEI-Bu/DNA在质量比大于1时即具有复合DNA的能力,PEI-Bu的细胞毒性随浓度增大而增大,在同一浓度下PEI-Bu的细胞毒性小于PEI 25kDa,(P<0.05),PEI-Bu/DNA在质量比为5时达到最高转染活性,高于PEI 25kDa(P<0.01),并与Lipofectamine2000相当(P>0.05)。结论:PEI-Bu在COS-7细胞中是一种低细胞毒性、高转染活性的非病毒基因载体(与商业化的PEI 25kDa比较),其在基因治疗领域中具有潜在的应用前景。     

新型聚乙烯亚胺衍生物体内转染活性的研究

目的:研究新型聚乙烯亚胺衍生物作为基因载体在小鼠体内的转染活性情况。方法:采用荧光素酶质粒DNA作为报告基因,与基因载体复合,对小鼠尾静脉注射,考察组织分布情况;以及对小鼠肌肉注射,应用活体成像技术考察其转染活性。结果:静脉注射后,小鼠肺组织中基因表达量最高;肌肉注射后,可以观察到活性转染结果,表达量高于对照PE(?)25KDa。结论:新型聚乙烯亚胺衍生物在体内可成功输送质粒DNA,但转染效率偏低。     

蛋白药物涂层支架的制备表征与体外释放研究

目的:探讨将蛋白大分子药物以较高的担载量涂层于心脏支架,并在不发生蛋白聚集的前提下实现数周之久缓释的方法.方法:将牛血清白蛋白通过稳定的水相-水相乳液技术制备成多糖玻璃体颗粒,并将多糖玻璃体颗粒分散于聚乳酸溶液中喷涂于支架表面制成蛋白涂层支架,在37°CPBs中进行体外释放动力学研究,用SEC-HPLC比较了蛋白涂层支架制备前后蛋白的聚集情况,并用扫描电镜等对蛋白涂层支架表面进行了表征.结果:蛋白涂层支架在电镜观察下外观圆整,表面光滑,制剂过程中未产生蛋白聚集,且能从涂层中缓慢释放达50天以上.结论:稳定的水相-水相乳液技术及其基础上制备的蛋白多糖玻璃体颗粒应用于心脏支架涂层上,能在有效保护蛋白构象的同时实现蛋白的缓释,为具有抗再狭窄活性蛋白应用于心脏支架提供了技术平台.     

糖基化突变体细胞引发疾病的研究进展

糖基化是细胞表面最常见也是最重要的一种修饰方法,异常的糖基化会影响糖基化产物的结构,改变细胞表面的化学特性;利用基因技术和化学小分子,调控糖基化酶的活性,可以人为地影响糖基化反应进程,揭示糖基化产物对生物体健康的影响.展示糖基化突变体与疾病的关联.     

戊型肝炎重组蛋白聚乳酸羟基乙酸微球疫苗的研究

目的:研究戊型肝炎重组蛋白(NE2)聚乳酸羟基乙酸(PLGA)微球疫苗诱导免疫应答的情况.方法:复乳法制备微球,考察粒径分布等特性.通过间接ELISA法检测其诱导BALB/c小鼠体内IgG、IgG2a和IgGl1水平,并通过IFN--ELISPOT方法检测其诱导BALB/c小鼠体内抗原特异性免疫应答情况.结果:微球的平均粒径为7.1m.注射小鼠6周后(第4周加强免疫1次),微球疫苗诱导产生的抗戊型肝炎病毒IgG抗体水平较同剂量铝佐剂组明显升高(间接ELISA:OD450/620 10.09vs.5.32).IgG2a抗体量略高于铝佐剂组,OD450/620分别为0.17、0.04.IgG1抗体量明显高于铝佐剂组.OD450/620分别为20.48、15.00.IFN--ELISPOT结果显示,微球疫苗能很好的诱导NE2或P34肽抗原特异性免疫应答.结论:戊型肝炎重组蛋白聚乳酸羟基乙酸微球作为疫苗输送体系能明显的提高抗原的免疫原性,有很好的应用前景.     

重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子长效、缓释制剂的研究进展

重组人粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)临床上有广泛的应用,然而,由于其体内半衰期很短,治疗周期长、不能通过胃肠道屏障进行口服给药,病人必须接受频繁注射。为了减少其注射频率,延长蛋白作用时间,多年来,科学家们对长效GM-CSF的研发进行了多种尝试。这类研究主要集中于三大类:GM-CSF的PEG化、脂质体包封及基于可降解高分子的缓释剂型。然而,这几类方法具有各自优势的同时,也都存在各种不足,如包封率低、对蛋白活性的保护不足、突释问题等。本文将对这三大类针对GM-CSF的长效制剂研究进展的报道,以及各类方法目前存在的主要优缺点进行综述。