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1.
猪细小病毒(PPV)VP2蛋白N端连续9个甘氨酸富集的编码区是VP3蛋白的切割位点,常规PCR扩增容易导致该区段的缺失,为研究该缺失对PPV病毒样颗粒(VLPs)的影响,探索VP2病毒样颗粒上适合外源基因插入的位点,构建了该区段缺失的VP2的真核表达载体pCI-△VP2,并以完整VP2作为对照,采用脂质体介导法转染Vero细胞,通过生物信息学技术、SDS-PAGE、Western blotting、间接免疫荧光以及正染和免疫电镜对表达产物进行分析观察;进一步将重组质粒以核酸疫苗的方式直接肌注免疫小鼠,采用间接ELISA试验、淋巴细胞增殖试验和T细胞亚群流式细胞技术,分析免疫小鼠的体液和细胞免疫应答.结果显示,缺失△VP2和完整VP2在Vero细胞中均能自我装配成VLPs,并具有与完整病毒粒子类似血凝性,pCI-△VP2和pCI-VP2均可诱导小鼠产生较强的特异性体液免疫应答和良好的细胞免疫应答.结果表明,甘氨酸富集区的缺失不影响VP2病毒样颗粒的装配和免疫原性,△VP2同样可进行PPV VLPs疫苗和抗原转运载体的研制,为VLPs载体改造和修饰位点的探索提供了新方向,为VP2基因结构与蛋白质功能的关系提供了新的理论依据.  相似文献   
2.
为了研究表达猪2型圆环病毒ORF2基因和猪细小病毒VP2基因的重组伪狂犬病毒疫苗株SA215(D)的疫苗价值,对该病毒株安全性、免疫原性、保护力及对PRV Fa株定值进行了研究。研究结果表明重组病毒SA215(D)毒力显著低于PRV Fa强毒株,可以抵御伪狂犬病强毒Fa株的攻击,并能抵御其在小鼠体内的定植;抗体检测显示SA215(D)免疫小鼠后第2周抗PRV、PCV2和PPV的抗体水平均很低,加强免疫后第4周抗体水平大幅上升,且显著高于阴性对照组,而与阳性对照组无明显差异,表明SA215(D)可诱导小鼠产生体液免疫反应。淋巴细胞增殖试验显示SA215(D)可诱导小鼠产生较强的淋巴细胞增殖反应,与亲本株SA215组相比,差异显著(0.01  相似文献   
3.
为研究CSFV强毒感染对猪外周血白细胞的影响,本研究用猪瘟病毒石门株(CSFV SM)感染60日龄仔猪后,分析外周血中CSFV核酸载量动态变化、白细胞亚群变化和白细胞SLAⅠ和SLAⅡDR分子的表达情况。实验结果显示:实验仔猪经CSFV感染后48小时体温升高并可以在血液中检测到CSFV核酸,核酸载量持续升高,在感染后6日(DPI)达到最大值,为2 DPI时核酸载量的104.84±0.98倍;WBC、LYM、PLT数量持续降低,WBC在1DPI和2DPI分别降至65.87%和50.00%,LYM在1~3DPI分别降至70.68%、47.88%和23.29%,PLT数量持续降低,6DPI时仅为初始值的34.59%;NK、γδT、Tc、Th、CD3+CD4+CD8+和CD3-CD4-CD8-淋巴细胞在感染后均不同程度的减少,其中NK细胞在1DPI时减少78.49%,而后变化与1DPI比较差异不显著,γδT、Tc、CD3-CD4-CD8-、CD3+CD4+CD8+在3DPI时分别降至41.74%、43.83%、15.87%和32.96%,Th细胞在感染后持续下降,在6DPI时减少至42.95%;感染后淋巴细胞中表达S...  相似文献   
4.
伪狂犬病病毒Fa株胸苷激酶基因缺失株的构建   总被引:10,自引:0,他引:10  
王琴  郭万柱 《病毒学报》1996,12(4):348-354
采用外切除缺失法对已克隆于pBR322中包含伪狂犬病病毒(PRV)胸苷激酶(TK)基因的BamHI-11片段(pPB11)进行改建,经筛选获得4株TK基因缺失重组质粒(pDTK3-1.pDTK3-6,pdTK3-8和pDTK5-6)对其进行酶切鉴定和Southern转印杂交,结果其11片段迁移率均发生改变,缺失的碱基数分别约1250,1100,1250和200bp,用PRVFa-DNA或PRVFa  相似文献   
5.
伪狂犬病毒对神经系统的传导具有跨突触传导、自我复制和宿主范围广等特性,自20世纪70年代起,便开始运用于神经解剖学研究领域。四十年的应用实践使伪狂犬病毒神经传导有了许多新的进展,无论是在病毒神经传导机理上,还是在传导应用中。伪狂犬病毒神经传导机理,着重于阐释病毒对初级神经细胞的侵染过程和对次级神经细胞的传导方向;传导应用则着重于探索新的神经传导毒株和对病毒传导技术进行革新。目前,伪狂犬病毒神经传导理论和应用尚有许多未知的领域需要研究,结合分子生物学技术的探索会使神经传导研究事半功倍。  相似文献   
6.
7.
伪狂犬病病毒基因缺失疫苗制苗用毒种特性研究   总被引:4,自引:0,他引:4  
本试验通过对PRV基因缺失株SA215(gE -/gI -/TK -)细胞培养特性、理化特性及形态发生过程进行研究,来确定gE、gI和TK基因缺失对病毒特性的影响.结果表明,基因缺失对该毒株在培养细胞的吸附和穿入过程没有影响,但与亲本株相比,表现为生长掩蔽期延长,增殖速度减缓,但能达到相似的增殖滴度,并且基因缺失对病毒的理化特性影响很小.形态发生过程观察结果表明,PRV SA215株在细胞培养上形态发生正常,能形成感染性病毒粒子,但在由核膜出芽和囊膜形成上受到一定程度的阻碍.本研究为疫苗研制和生产提供指导和依据.  相似文献   
8.
减蛋综合征病毒六邻体重组蛋白的表达和初步应用   总被引:3,自引:0,他引:3  
减蛋综合征(egg drop syndrome 1976,EDS-76)是由腺病毒科禽腺病毒属Ⅲ群腺病毒即减蛋综合征病毒(egg drop syndrome virus,EDSV)引起的以产蛋鸡产薄壳或无壳蛋,产蛋率严重下降为主要特征的传染病。1976年Van Eck首次报道后,现已成为世界范围内引起产蛋损失的主要原因之一[1]。  相似文献   
9.
减蛋综合征病毒四川分离株六邻体蛋白基因的序列分析   总被引:1,自引:1,他引:0  
According to the nucleotide sequence of egg drop syndrome virus(EDSV)AV-127 strain (a foreign standard isolate)from the GenBank,a pair of oligonucleotide primers was designed and synthesizedWith use of polymerase chain reaction(PCR),the hexon-encoding gene fragment was amplified from the genome of EDSV SG9301 strain that was isolated from Sichuan Province of China and the amplified fragment was directly inserted into pMD-T vectorThe recombinant plasmid harboring the hexon-encoding gene was identified by digestion of restriction endonucleases and PCRThen,a positive clone was sequencedThe result showed that the recombinant plasmid contained the complete sequence of the hexon-encoding gene and the hexon-encoding gene was 2733 base pair long which encoded 910 amino acids, identical with AV-127 strain and AAV-2 strain (an attenuated strain)Comparison with AV-127 strain indicated that there was 9985% homology at the nucleotide levelThe homology of the deduced amino acid sequence with AV-127 strain and AAv-2 strain was over 98%,which indicated that the hexon protein was conservativeBut comparatively,the homology of the hexon protein of SG9301 strain with AV-127 strain was higher(9978%),the homology of the hexon protein of AAV-2 strain with AV-127 strain and SG9301 strain were 9868% and 9846% respectivelyComparison of nucleotides and amino acids suggested that the biological character is consistent with the homologies of nucleotide and amino acid of the hexon(Namely,the homology of the hexon of virulence strain with virulence strain was higher than that of virulence strain with attenuated strain),the hexon was one of the most conserved viral proteins among EDSV strains  相似文献   
10.
猪传染性胃肠炎病毒的分离鉴定及全基因组序列分析   总被引:1,自引:0,他引:1  
宋振辉  郭万柱 《病毒学报》2008,24(5):364-368
采用ST细胞培养,免疫荧光、理化试验、中和试验、电镜观察等方法,从四川疑似猪腹泻病料中分离到1株猪传染性胃肠炎病毒,命名为SC-Y.分离株在ST细胞上盲传至第8代时可出现稳定的细胞病变,病毒滴度TCID50为10-3.664/0.05m1,中和指数为52.应用长链RT-PCR技术成功地扩增出了覆盖SC-Y株全长基因组的5个片段,通过BioEdit软件对测序结果进行拼接,确认SC-Y株基因组全长28 590bp,包括7个开放阅读框,基因组5非编码区长315nt,3'端非编码区长277nt.TGEV基因组系统进化树显示,SC-Y株与美国Purdue株可能来源于共同的祖先.  相似文献   
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