贝伐单抗辅助的23G玻璃体切割术治疗严重增生性糖尿病视网膜病变的疗效观察

目的：2011年,我国糖尿病患者人数高达9240万。糖尿病视网膜病变（diabeticretinopathy,DR）作为糖尿病患者的常见并发症,在糖尿病人群中的患病率为37％,是导致成人获得性盲的最主要原因之一。严重增生性糖尿病视网膜病变以牵拉性视网膜脱离、玻璃体出血为特征,具有致盲率大,手术难度高等特点。针对与此,本文主要探讨术前注射贝伐单抗对23G玻璃体切割手术治疗严重增生性糖尿病视网膜病变患者效果的影响。方法：回顾性病例对照研究。共收集严重增生性糖尿病视网膜病变患者70例,药物辅助手术组（A组）21例,术前3—7天行玻璃体腔注射贝伐单抗（1．25mg／O．05mL）;单纯手术组（B组）49例,行23G玻璃体切割术。分析两组术前及术后视力、手术时间、医源性裂孔、电凝、术后出血的不同。结果：在术后3月,两组视力提高有统计学意义（P〈O．05）。A组平均手术时间为74分钟,而B组平均手术时间为85分钟（P〉0．05）。医源性裂孔在A组中有1例,而B组中有16例（P〈0．05）,在A组中有3例使用电凝,B组中有25例使用电凝（P〈0．05）。A组有1例出现术中及术后出血,B组为20例（P〈O．05）。结论：在这个回顾性研究中,我们发现对于严重增生性糖尿病视网膜病变的病人,术前玻璃体腔注射1．25mg／O．05ml贝伐单抗可以显著减少医源性裂孔的发生,减少术中电凝使用及术中术后出血的发生。     

淀粉基高吸水树脂降解菌的筛选及初步鉴定*

以淀粉接枝丙烯酸高吸水树脂为唯一碳源,从土壤中筛选出4个菌株,纯化后进行菌种鉴定。经过表面观察和理化实验,初步鉴定出它们分别为两类放线菌(放线菌科,Actinomycetaceaes和固氮菌科,Azotobacteraceae)、酵母菌(隐球酵母科,红酵母属,Rhodotonda)和霉菌(毛霉科,根霉属,Rhizopus sp．),为深入研究高吸水树脂的降解性能提供参考。     

潮霉素B抗性为选择标记的整合型表达载体的构建及在米根霉中的遗传转化

为了建立适合米根霉的遗传转化体系,应用重叠延伸PCR的方法构建了以潮霉素B抗性为选择标记的单交换整合型表达载体p BS-hygro-ldh A;分别采用PEG/Ca Cl2介导的原生质体转化、原生质体电转化及萌发孢子电转化的方法将表达载体p BS-hygro-ldh A转化入米根霉AS 3.819菌株中,并研究了菌丝酶解时间、孢子萌发时间以及电转化电场强度对于转化效率的影响;通过荧光定量PCR(q PCR)对米根霉转化子基因组中质粒整合拷贝数进行了检测,并研究了其对米根霉转化子抗性稳定性的影响。实验结果表明成功获得整合了表达载体p BS-hygro-ldh A的米根霉转化子。菌丝酶解140 min产生的原生质体其再生率和转化率最高,原生质体电转化最佳电场强度为13 k V/cm,孢子萌发2.5 h转化率最高,萌发孢子电转化最佳电场强度为14 k V/cm。萌发孢子电转化方法转化率要高于原生质体转化的方法。荧光定量PCR检测结果表明,在一定范围内,高质粒整合拷贝数的米根霉转化子比较稳定。研究建立了用于工业米根霉菌株的遗传转化体系,为米根霉代谢调控研究以及菌种改造工作提供了基础与支持。     

米根霉乙醇脱氢酶(ADH)突变菌株的诱变选育

米根霉发酵生产L-乳酸过程中,由于丙酮酸在丙酮酸脱羧酶、乙醇脱氢酶(ADH)催化下生成乙醇,使得丙酮酸向乳酸转化的流量减少。采用亚硝基胍(NTG)诱变米根霉AS3．3462孢子液,诱变剂量为0．15 mg/ mL时,致死率为70%～80%。在含丙烯醇的YPD筛选培养基上筛选获得两株ADH活力降低的突变株mut-1和mut-2,检测突变株mut-1和mut-2的最大ADH活力分别为35．67和43．09U/mL,是原始菌株的41．63%和50．29%。发酵72h后,原始菌株的乙醇与乳酸浓度分别为28．9g/L和40．31g/L,而mut-1和mut-2突变株的乙醇产量分别为4．87g/L和6．56g/L,乳酸产量为54．45g/L和44．07g/L。在相同的发酵条件下,米根霉ADH突变株mut-1和mut-2对还原糖的利用速率高于出发菌株,其生物量积累亦高于出发菌株。     

内源性神经节苷脂GM1与神经系统发育的关系

神经节苷脂GM1是膜表面一类重要的鞘糖脂，与神经系统发育密切相关。神经节苷脂GM1对神经细胞胞内钙离子浓度的调节具有重要作用。核膜神经节苷脂GM1与神经细胞轴突生长密切相关。     

稳定表达Syncytin的EL4细胞系的建立及鉴定

Syncytin是人类内源性逆转录病毒W家族的囊膜蛋白。近期研究发现Syncytin与白血病密切相关。为研究Syncytin的生物学功能,我们克隆了人syncytin,并连接到pIRES2-EGFP质粒上,转化该质粒至感受态大肠杆菌DH5α,挑选阳性克隆进行PCR、酶切电泳和DNA测序鉴定,成功构建了表达syncytin基因的真核表达载体。利用罗氏转染试剂转染重组质粒至EL4细胞,并通过G418选择性培养基筛选,在荧光显微镜下观察细胞中Syncytin表达,用RT-PCR、Western blot检测Syncytin表达水平,结果显示我们成功构建了稳定表达人Syncytin的EL4细胞系。稳定表达人Syncytin的EL4细胞系的建立,为进一步研究人Syncytin功能及其与白血病免疫逃逸的关系提供了重要的细胞模型和实验基础。     

改革微生物学实验教学,提高学生实验技能

微生物学是一门实验性和应用性很强的学科,它具有一套独特的实验技术和方法,微生物学实验技术已被广泛应用于生产实践、科学研究过程中.从课程实验和综合实验两方面就不断改进微生物学实验教学,训练学生基本实验操作技能,培养学生综合创新能力的方法和途径.     

无载体固定化米根霉重复间歇发酵生产L-乳酸

通过研究影响米根霉菌丝体形态的培养基因素,初步构建了无载体固定化米根霉重复间歇发酵生产L-乳酸的工艺条件.研究结果表明,首批次发酵培养基采用120 g/L葡萄糖,3 g/L硝酸铵,K 和Na 浓度比为1:1,发酵72 h后,米根霉菌体形态为均匀的茵丝体小球,直径为1.0 mm～2.0 mm,此时L-乳酸产量可达100.8 g/L,葡萄糖转化率为84%.在此基础上,利用米根霉菌丝体小球重复间歇发酵16批次,每批次发酵24h,此时葡萄糖转化率均高于75%,L-乳酸产量保持在60.0 g/L以上,米根霉菌丝体小球形态保持稳定.