卵巢上皮癌细胞株间APE1单核苷酸多态性的研究

目的:检测APE1单核苷酸多态性变化在卵巢上皮癌细胞株HO-8910、A2780、SKOV3间的表达,对进行大样本临床病例对照研究探讨APE1遗传变异与卵巢癌易感性关系进行指导.方法:提取各细胞株基因组DNA,PCR扩增目的片段,直接测序法检测产物APE1位点rs1760944、rs1130409和rs2307486在细胞株中的基因表达,测序结果解读采用Chromas2软件,并结合NCBI及HapMap数据库分析测序结果.结果:测序结果发现rs1130409突变型等位基因(G)位于细胞株A2780中,基因型为T/G;其野生型等位基因(T)位于HO-8910及SKOV3,基因型均为T/T; rs 1760944突变型等位基因(G)位于细胞株A2780、SKOV3及HO-8910中,基因型均为G/G;rs2307486在三株细胞株均为野生型纯合子A/A.结论:APE1基因位点rs 1130409与rs 1760944在卵巢癌上皮细胞株HO-8910、A2780、SKOV3间存在单核苷酸多态性变化,提示其单核苷酸多态性可能与卵巢上皮癌易感性相关;rs2307486在HO-8910、A2780、SKOV3中不存在多态性改变,提示其单核苷酸多态性与卵巢上皮癌易感性可能无关.     

顺铂诱导人宫颈癌细胞系P27表达及其超微弱发光测定的意义

目的:探讨化疗药物对肿瘤增殖活性的影响.方法:选择人宫颈癌细胞系Hela分为两组,分别采用MTT比色法分析测定顺铂处理Hela细胞的浓度;免疫组化SP法分别检测Hela细胞中P27蛋白表达;流式细胞仪分析加药前后细胞周期变化及凋亡情况;用IFFM-D型流动式化学发光仪检测细胞的超弱发光强度.结果:顺铂处理Hela细胞48h的IC50值为3mg/L,当DDP浓度,在3mg/L以下时,对Hela细胞无明显毒性作用,超过此浓度时,其毒性呈剂量效应关系(P<0.001);流式细胞仪分析细胞周期可见与Hela细胞相比较,Hela+DDP细胞的G2期细胞数增多,而G1,S期的细胞数明显减少(P<0.01);从细胞调亡检测显示Hela与Hela+DDP相比,细胞凋亡率在不同时间点明显升高,在24h,48h,72h结果分别为(11.4±5.8、21.8±7.9、32.5±11.6)%.免疫组化结果显示Hela+DDP与Hela细胞相比细胞膜上P27蛋白高表达;在10-4mol/L鲁米诺及0.3%的双氧水(H2O2)条件下Hela细胞超弱发光强度高于用Hela+DDP细胞9P<0.001).结论:超弱发光能够快速、准确、有效地反映肿瘤细胞氧化代谢特点和增殖活动,也可用于筛选敏感的化疗药物.     

低分子肝素对早发型重度子痫前期治疗对母婴结局的影响分析

目的:探讨低分子肝素对早发型重度子痫前期治疗情况,并分析治疗对母婴结局的影响。方法:选择我院2012年1月~12月收治的早发型重度子痫前期患者120例,随机分为观察组和对照组,每组60例。对照组给予常规治疗,观察组在对照组治疗基础上加用低分子肝素。比较两组血压、24 h尿量、尿蛋白定量、尿酸、血常规、凝血功能及孕周延长时间、围产儿结局和产妇并发症。结果:两组患者临床指标无差异(P0.05),治疗后两组血压、24 h尿量、尿蛋白定量均显著改善,观察组红细胞压积、纤维蛋白原降低明显高于对照组,而观察组患者的产妇并发症和围产儿不良结局发生率均低于对照组,且产妇孕周延长时间明显多于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。两组患者的血小板、凝血酶原时间等治疗前后均无明显变化(P0.05)。结论:低分子肝素对早发型重度子痫前期的治疗能有效抑制高凝状态,改善肾功能,延长孕周时间,可有效减少患者并发症的发生,改善母婴预后,值得临床推广应用。     

妊娠合并糖尿病诱发胚胎先天性神经管缺陷 动物模型的MAP 激酶信号传导机制MAP

为了揭示妊娠合并糖尿病诱发胚胎先天性神经管缺陷的分子机制,并探讨其有效的防治方法。 实验选用6个实验组的 Sprague-Dawley 大鼠：第1组为常规饲养的正常对照组;第2组尾静脉注射65mg/kg Streptozotocin (STZ) 构建妊娠合并糖尿病、且诱发先天性神经管缺陷的实验组大鼠;第3组为STZ构建的糖尿病、但胚胎不伴有先天性神经管缺陷的大鼠模型;第4、5、6 组为 STZ 构建的糖尿病治疗组大鼠,每日分别给予80mg/mL花生四烯酸 (arachidonic acid,AA)、400mg 维生素E、抗氧化剂(维生素 E) 和不饱和脂肪酸 (saflower oil) 混合物 cocktail 治疗。于妊娠第12天取出各组胚胎,解剖显微镜下进行形态学分析;提取卵黄囊细胞蛋白质,应用特异性抗磷酸化抗体进行免疫共沉淀及 Western 印迹,对MAP 激酶 信号途径上各蛋白激酶ERK1/2、JNK1/2、RAF-1活性进行分析。 与正常对照组相比,妊娠合并糖尿病诱发的先天性神经管缺陷胚胎中(第2组),ERK1/2蛋白激酶活性显著下降,其上游 RAF-1活性相应降低;与此相反,JNK1/2活性明显升高。在给予花生四烯酸、维生素E 补充物治疗后,通过调节MAP 激酶 信号通路蛋白激酶活性,逆转了胚胎神经管缺陷的发生。妊娠合并糖尿病诱发的胚胎先天性神经管缺陷的发生,与MAP 激酶信号传导机制异常密切相关。不饱和脂肪酸和抗氧化剂补充物的治疗作用通过对MAP 激酶信号途径的调控实现的。 AbstractThe aim of the present study was to determine molecular mechanism in hyperglycemia-induced congenital neural tube defects and the its potential pharmacologic rescuing agents. In order to explore these questions, six study groups of Sprague-Dawley rats were employed: Group 1 was normal control rats with normal diet; group 2 represented streptozotocin (STZ) -induced diabetic rats with congenital neural tube defects in offspring; group 3 included STZ-induced diabetic rats with normal offspring; groups 4,5 and 6 included rats exposed to the same STZ-induced diabetic condition, but receiving daily oral supplementation of 80mg/mL of the sodium salt of arachidonic acid (AA), 400mg of vitamin E and a cocktail of a polyunsaturated fatty acid (saflower oil) plus an antioxidant ( vitamin E) respectively. Yolk sac cells were harvested at gestational day 12 from each rat group. Changes in MAPK signaling pathways were detected by western blot analysis using special antibodies directed against phosphorylated forms of extracellular signal regulated kinase (ERK), Jun N-terminal/stress-activated protein kinase (JNK/SAPK). Furthermore, activity of RAF-1, an upstream kinase in ERK1/2 signaling cascade, was evaluated by immunoprecipitation assay. The results showed that in yolk sac cells in embryopathic offspring from experimentally-induced diabetic rats, activities of ERK1/2 were dramatically decreased (group 2). Consisted with these observation, reduction in RAF-1 kinase activity could be discerned in these diabetic yolk sac cells. In contrast, activities of JNK1/2 were significantly increased in yolk sac cells of group 2. Under rescuing circumstance,activations of ERK1/2 and RAF-1 were increased, and JNK1/2 were decreased. MAP kinase signal pathway plays a very important role in hyperglycemia induced neural tube defects. The supplementation of polyunsaturated fatty acid arachidonic acid, and antioxident vitamin E rescued conceptuses from diabetic embryopathy by triggering a restoration of normal membrane signaling pathways.     

siRNA抑制S100A4表达对卵巢癌细胞CP70生物学特性的影响

目的：探讨人卵巢癌顺铂耐药细胞株CP70沉默S100A4基因后,CP70细胞对顺铂敏感性、凋亡及细胞迁移的影响。方法：设计并合成S100A4基因特异性的siRNA并转染入卵巢癌细胞CP70,48 h后应用RT-PCR和Western Blot检测在mRNA和蛋白水平siRNA对S100A4的影响,MTT法检测转染siRNA后卵巢癌细胞CP70对顺铂敏感性的变化。用流式细胞术检测顺铂（40μM）对转染S100A4 siRNA后对卵巢癌细胞CP70凋亡的影响,Transwell法观察siRNA抑制S100A4后对卵巢癌CP70迁移能力的影响。结果：与空白对照组、阴性对照组相比,S100A4siRNA转染组CP70细胞的S100A4基因和蛋白表达降低（P〈0.01）。MTT法检测顺铂敏感性发现S100A4 siRNA转染组CP70细胞顺铂敏感性增强。在顺铂刺激下,siRNA转染组细胞凋亡率高于其他各组,差异具有统计学意义（P〈0.05）。Transwell发现CP70细胞迁移能力明显下降（P〈0.05）。结论：S100A4 siRNA能够明显抑制CP70细胞S100A4的表达,从而增强细胞对顺铂的敏感性,促进细胞凋亡,减弱细胞的迁移能力。S100A4有望成为逆转卵巢癌铂类耐药的治疗靶点。     

GDF15基因在卵巢上皮性癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨生长分化因子GDF15(Growth Differentiation Factor 15)基因在卵巢上皮性癌组织中的表达及其与铂类耐药的相关性。方法:应用免疫组化、western blot、RT-PCR等方法对80例原发性卵巢癌组织和卵巢癌顺铂敏感/耐药株A2780和CP70、SKOV3和SKOV3/DDP中生长分化因子GDF15表达水平进行测定。结果:生长分化因子GDF15的表达强度与卵巢癌铂类耐药性显著相关。在卵巢癌顺铂耐药株CP70、SKOV3/DDP中GDF15表达水平较顺铂敏感株A2780、SKOV3明显增高。结论:GDF15表达水平与卵巢癌发生发展及铂类耐药相关,对于卵巢癌患者早期筛选、预测预后具有一定的临床指导价值。     

Notchl信号蛋白在卵巢癌细胞系中的表达

目的：检测卵巢癌细胞系中Notchl信号蛋白的表达,为在卵巢癌细胞中对Notchl进行RNA干涉研究的体外实验筛选靶细胞。方法：采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法及Westernblotting对卵巢癌细胞系SKOV3、HO-8910、HO-8910-PM和3AO中Notchl进行检测。结果：Notchl信号蛋白在4种卵巢癌细胞系中均有表达,其在HO-8910-PM中表现为高表达,在SKOV3和3AO中表现为中等表达,在HO-8910中表现为低表达。结论：HO-8910-PM适合作为靶细胞,进行Notchl信号蛋白的RNA干涉研究。     

紫杉醇加铂类和环磷酰胺加铂类方案对卵巢上皮性癌疗效

目的:探讨紫杉醇加铂类(PT组)和环磷酰胺加铂类(PC组)在卵巢上皮性癌初治患者中的疗效.方法:时1998年1月至2004年1月第四军医大学西京医院和第三军医大学大坪医院收治的78例卵巢上皮性癌术后患者进行回顾性分析,其中PT组36例.PC组42例,比较两组的近期疗效和3年存活率、无进展生存时间以及不良反应.结果:PT和PC方案的患者化疗有效率分别为77.8%和66.7%(P＜0.01),中位生存时间分别为29个月和23个月(P＜0.01),中位无进展生存时间分别为23个月和15个月(P＜0.01),3年存活率分别为41.7%和19.0%(P＜0.05).在早期(Ⅰ期+Ⅱ期)卵巢癌患者中,PT组和PC组中位生存时间和中位无进展生存时间差异无统计学意义,但中晚期(Ⅲ期+Ⅳ期)患者PT组和PC组中位生存时间和中位无进展生存时间分别为25.4月和21.0月以及16.1月和7.9月(P＜0.05),有统计学意义,表明PT方案对中晚期患者可能更具有优势.PT组脱发和血液学毒性发生率高于PC组,而消化系统毒性和肝肾功损害发生率低于PC组.结论:卵巢癌的辅助化疗中,PT方案在化疗反应率、无进展生存时间及3年存活率均优于PC方案,对中晚期患者,前者的优势更为显著.     

siRNA抑制S100A4 表达对卵巢癌细胞CP70生物学特性的影响

摘要 目的：探讨人卵巢癌顺铂耐药细胞株CP70沉默S100A4 基因后,CP70细胞对顺铂敏感性、凋亡及细胞迁移的影响。方法：设计并合成S100A4基因特异性的siRNA并转染入卵巢癌细胞CP70,48 h后应用RT-PCR和Western Blot检测在mRNA和蛋白水平siRNA对S100A4的影响,MTT法检测转染 siRNA后卵巢癌细胞CP70对顺铂敏感性的变化。;用流式细胞术检测顺铂（40 μM） 对转染S100A4 siRNA后对卵巢癌细胞CP70凋亡的影响,Transwell法观察siRNA抑制S100A4后对卵巢癌CP70迁移能力的影响。 结果：与空白对照组、阴性对照组相比,S100A4 siRNA转染组CP70细胞的S100A4基因和蛋白表达降低(P<0.01)。MTT法检测顺铂敏感性发现S100A4 siRNA转染组CP70细胞顺铂敏感性增强。在顺铂刺激下,siRNA转染组细胞凋亡率高于其他各组,差异具有统计学意义（P<0.05）。Transwell发现CP70细胞迁移能力明显下降（P<0.05）。结论：S100A4 siRNA能够明显抑制CP70细胞S100A4的表达,从而增强细胞对顺铂的敏感性,促进细胞凋亡,减弱细胞的迁移能力。S100A4有望成为逆转卵巢癌铂类耐药的治疗靶点。     

Genistein增加顺铂诱导的SKOV-3细胞的凋亡与活性氧的关系

目的:探讨Genistein增加顺铂诱导的耐药卵巢癌细胞SKOV-3凋亡的可能作用机制.方法:倒置相差显微镜下观察药物处理后细胞形态学的变化;MTT比色法检测不同药物处理后对SKOV-3细胞增殖的影响;流式细胞仪检测药物处理后细胞的凋亡情况;流式细胞仪和荧光显微镜检测细胞内活性氧(ROS)的水平.结果:10ug/ml的Genistein和2.5ug/ml的顺铂联用24h后,引起了细胞内ROS的增加,细胞的凋亡率也显著增高,与单用顺铂组相比差异有显著性(P＜0.05);用NAC预处理细胞2h后,有效抑制了ROS的产生,并增加了细胞的活性,降低了细胞的凋亡率,与未加NAC组相比差异有显著性(P＜0.05).结论:Genistein增加顺铂诱导的耐药卵巢癌细胞SKOV一3的凋亡与细胞内ROS水平的升高有关,这可能是Genistein增加顺铂诱导的耐药卵巢癌细胞SKOV-3凋亡的作用机制之一.